《肝动脉桥式置管转流对供肝及胆道组织细胞凋亡保护作用的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肝动脉桥式置管转流对供肝及胆道组织细胞凋亡保护作用的实验研究（64页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 摘要 论文题目:肝动脉桥式置管转流对供肝及胆道组织细 胞凋亡保护作用的实验研究 专业:外科学 研 究 生:陆宏伟 指导教师:黎一鸣教授 豁臀 竿 签名: A 摘要 研究 目的:肝移植术 目前已经成为治疗终末期肝脏疾病的重要手 段。 肝动脉吻合是肝移植手术过程中的一个 技术难点， 其吻合技术要求 高、耗时长。 肝动脉缺血 ( HA I )时间过长会延迟肝血液循环的恢复， 易引起术后肝动脉栓 塞， 导致胆道因 缺血而形成胆痰;同 时， H A I尚 可 导致供肝细胞和胆道上皮细胞凋亡，引起术后供肝及胆道系统功能障 碍，甚至因此而导致移植的彻底失败。为了缩短 H A I 时间，我们在门 静脉吻合后
2、， 通过抗凝硅胶管将受体的脾动脉与供肝的胃十二指肠动脉 相连， 之 后同时开 放门 静脉及桥式置管转流 通道， 使动脉血通过这一临 时管道由 肝动脉输入供肝， 在此之后再吻合肝 动脉. 本实验即 是为了 验 证通过肝动脉桥式置管转流这一方法是否能够减轻 H A I对肝胆组织的 损伤并减少由此而引起的肝胆细胞凋亡。 研究方法:本实验应用简易犬肝自体原位移植模型，将 2 4只西安 地区杂交犬随机分为肝动脉缺血组 ( H A I 组)( 8 只) 、肝动脉桥式置管 转流组 ( 8只)和对照组 ( 8只) 。H A I 组在冷灌注后开放门静脉，1 2 0 分钟后， 再开放肝动脉; 肝动脉桥式置管组在冷
3、灌注 前从受体 脾动脉和 供肝胃 十二指肠动脉动脉分别向 脾动 脉近心端和肝动脉用 抗凝管 插管， 两管间用 三通管相连， 建立肝动脉桥式置管转 流通道。 之后通过三通管 和胃十二指肠静脉插管分别向肝动脉和门静脉进行冷灌注。 冷灌注后同 时开 放门 静脉及 桥式置管转流通道， 使 得门静 脉与肝动脉同 时获得血流 西安交通大学硕士学位论文 灌注，血液再灌注后 1 2 0分钟时，夹闭桥式置管转流通道，开放肝动 脉: 对照组在冷灌注后， 直接同时开放肝动脉和门静脉，三组动物均于 冷灌注后不同时点切取肝脏、胆道组织，分别用戊二醛及 4 %多聚甲醛 固定，进行电镜观察并行 H E和 T U N E L
4、染色，观察肝胆组织形态学改 变及细胞凋亡的变化情况，计算三组的凋亡指数，进行统计学处理. 研究结果:1 . H E染色切片:冷灌注后，肝胆组织大体形态无明显 改变。 对照组在实验过程中肝胆组织无明显病理学改变。 H A I 组门静脉 开放 2小时，肝组织大体结构发生显著改变，肝小叶细胞板结构紊乱， 肝细胞明显肿胀， 并出现点状或片状坏死， 汇管区出血并可见炎细胞浸 润; 胆道粘膜上皮出现大片状脱落， 未脱落的胆道上皮细胞肿胀变为圆 形， 刷状缘消失; 胆道粘膜下可见炎细胞浸润。 当肝动脉开放后2小时， 肝小叶结构基本恢复， 仍可见点状或片状坏死， 但肝细胞水肿减轻， 汇 管区无明显出血: 胆道
5、上皮细胞肿胀减轻， 胆道粘膜下炎细胞浸润减少。 肝动脉桥式置管转流组肝胆组织病理学改变较轻，仅可见肝胆细胞水 肿，肝细胞点状坏死， 汇管区有少量的炎细胞浸润，胆道粘膜有点状脱 落，粘膜下有少量的炎细胞浸润。 2 . 电镜结果:冷灌注后，肝细胞及胆 道上皮细胞轻度水肿，胞质疏松，线粒体稍肿胀。对照组肝胆细胞无明 显的病理学改变，凋亡细胞少见。 H A I 组门静脉开放 2 小时肝细胞体积 增大，胞质明显疏松， 线粒体明显肿胀:肝内毛细胆管扩张、癖胆，毛 细胆管微绒毛减少;胆管上皮细胞胞质明显疏松，线粒体明显扩大，空 泡变，表面微绒毛稀疏:出现较明显的肝胆细胞凋亡现象。当肝动脉开 放后 2 小时，
6、 肝胆组织的病理改变较门静脉开放 2 小时时有所减轻。 肝 动脉桥式置管转流组肝胆细胞病理学改变较轻，凋亡细胞少于H A I 组， 且多为早期改变的凋亡细胞。3 . T U N E L法染色切片:冷灌注后， 三组 肝胆组织内 均有少量凋亡肝 胆细 胞，其凋亡指数相差不 大 ( P 0 . 0 5 ) ; 随冷灌注后时间的延长， 三组间凋亡细胞的数量均有所增加， 对照组凋 亡指数轻 度升高， H A I 组凋亡 指数的 升高幅 度最大， 肝动 脉桥式置管 转流组凋亡指数高于对照组，但显著低于 H A I 组，三组间各时点凋亡 指数差别 显著 ( p 0 .0 5 ) , w i t h t h
7、e t i m e p r o l o n g i n g a ft e r t h e c o l d p e r f u s i o n , t h e q u a n t i t i e s o f t h e a p o p t o t i c c e l l s i n c r e a s e d i n a l l g r o u p s , b u t t h e a p o p t o t i c in d e x i n H A I g r o u p i n c r e a s e d m o r e s i g n i f i c a n t l y , I n t h
8、e T B B g r o u p , t h e a p o p to t ic in d e x in c r e as e d s lig h tly , a n d th e a p o p to t ic in d e x in c o n tro l g r o u p i n c r e ase d u n c l e a r l y , t h e d i s t i n c t i o n o f a p o p t o t i c i n d e x i n d i ff e r e n t t i m e o f 3 b Ab s t r ac tA g r o u p
9、s w a s n o t a b l e ( p 0 . 0 5 ) ; 随时间的 延长， 凋亡 细胞的 数量均有所增加，H A I 组及肝 动脉 桥式置管转流组随时间延 长， 其凋亡指数均有显著性的增加 ( p 0 . 0 1 ) ， 但肝动脉桥式置管转流 组凋亡指数的升高幅度显著低于H A I 组 ( 见图 1 4 , 1 5 ) , H A I 组在门静 脉开放后4 h ， 其凋亡指数达到1 1 . 3 2 士 1 . 1 7 %, 耐乖谴管 转流红 胜门 静脉 开放后 4 h ，其凋亡指数为 5 . 8 7 士0 . 5 4 %，增长幅度为H A I 组的 1 / 2 。对 照组在门
10、静脉与肝动脉开放后， 其凋亡指数较冷灌注后亦 有显著的增加 中 0 .0 5 ) 。 三组间 在门静 脉开 通后各时点凋亡指 数均差别显著 ( p 0 .0 1 ) , 西安交通大学硕士学位论文 H A I 组凋亡指数显著高于肝动 脉桥式置 管转流组和对照组( p 0 . 0 1 ) ，而 肝动脉桥式置管转流组凋 亡指数显著高于对照组( p 0 .0 1 ) 。 我们将三 组 门静脉开放后各时点肝细 胞凋亡 指数为 纵坐标， 门静 脉开 放后各时点为 横坐标做凋亡指数变化折线图， 比 较三组肝细 胞凋亡 指数的 变化趋势( 如 图 1 8 ) ， 发现肝动脉桥式置管 转流 组凋亡 指数的升高趋
11、势介于 H A I 组和 对照组之间。 此外， 我们通过直线回归分析， 发现肝细胞凋亡指数与冷 灌注后门静脉开放时间之间存在着线性关系, H A I 组直线方程为: Y = - 0 . 1 3 6 + 2 .7 7 0 X ( 1 = 0 . 9 8 9 , p 0 . 0 1 )，桥 式 置 管 转 流 组 为 : Y = 一 。 一 2 6 4 + 1 .3 3 4 X ( 1 = 0 . 9 3 2 , p p 0 . 0 5 ) 0 表 1 肝细胞凋亡指数检测结果( x上s ) 对照组 ( n = 8 ) ( % ) 冷灌注后 门静脉开放I h 1 7 静脉开放 2 h 门静脉开放 3
12、 h 门静脉开放4 h H A I 组( n = 8 ) ( %) 0 . 4 6 士0 . 1 4 2 . 4 7 士0 . 1 8 0 4 . 3 2 士0 . 2 6 0 8 . 4 5 士0 . 4 1 - 1 1 . 3 2 士1 . 1 7 0 桥式置管组 n = 8 ) ( % ) 0 . 4 9 士0 . 0 8 0 . 9 3 士0 . 1 2 0 “ 1 . 2 4 士0 . 1 8 0 3 . 4 7 士0 . 2 5 0 5 . 8 7士0 . 5 4 - 0 . 4 8 士0 . 1 1 0 . 6 7 士0 . 1 4 “ 0 . 7 0 士0 . 1 2 - 0
13、. 6 9 士0 . 0 9 0 . 7 2 士0 . 1 6 0 H A I 组 和 肝 动 脉 桥 式 置 管 组 肝 细 胞 凋 亡 指 数 在 各 时 点 组 内 。 而 p c 而万 t 三组肝细胞凋亡指数在门静脉开放后各时点组间相比较p 0 . 0 l . 对照组肝细胞凋亡指数在门静脉开放后各时点与冷灌注后相比较p 0 . 0 5 ) ; 随时间的延长 ， 凋I : 细胞的数量均有所增加， H A I 组及桥式置管组随时间延长， 其凋亡 指数均有显著性的增加 ( p 0 . 0 1 ) ，但肝动脉 桥式置管转流组凋亡 指数 的升高 幅度显著 低于H A I 组 ( p 0 . 0
14、1 ) ( 见图 1 6 , 1 7 ) , H A I 组在门静 脉开放后4 h , 其凋亡指数由冷灌 注后的0 .2 3 士 0 . 0 7 % 增至1 2 . 8 9 土 1 . 0 2 % ; 肝动脉 桥式置管 转流 组山 冷灌注后的0 . 2 7 1 0 . 1 1 % O P l 至门静脉开放后4 h 的2 . 5 6 士 。 . 5 8 % ,增长 幅 度仅为H A I 组的1 1 5 。 对照组在门 静脉与 肝动 脉开放后1 h , 其凋亡指数较冷灌注后 亦有显 著的 增加( p 0 . 0 5 ) ，在门静脉开 放后4 h ， 胆道上皮细胞的凋 亡指数为0 . 3 7 士 0
15、 .0 8 0/ n 三组间在门静脉开通后各时点凋亡指数均差别 显著( p 0 .0 1 ) ,肝动脉 桥式置管转流组凋亡指数显著高 于对照组 ( p 0 . 0 1 ) ， 而低于 H A I 组 ( p 0 . 0 1 ) 。 我们将三组门 静脉开 放后各时点胆 道土皮细 胞凋亡指数为 纵坐 标， 门 静脉开放时间为横 坐标做凋亡指数变化折 线图， 比 较三组胆 道_ ! 二 皮细胞凋 亡指数的变化 趋势 如图1 9 ) ， 发 现肝动脉桥式置管转流 组凋亡 指数的 升高趋势介于 H A I 组和对照组 之间。 此外， 我们通过直 线回归 分析. 发现胆道上 皮细胞凋亡指数也 与 冷灌 注
16、后门 静脉开放时间 之间存在着线性关系， H A I 组 直线方程为: Y = - 0 . 9 4 6 + 3 . 0 5 9 X ( r = 0 .9 6 3 , p 0 .0 1 ) ， 桥式置管转流组为: Y = 0 .3 2 0 + 0 . 5 8 3 X ( r = 0 . 9 3 0 , p 0 . 0 1 ) ， X 寸 0f为;Y = 0 . 2 7 8 + 0 . 0 3 0 X ( x = 0 .8 3 6 , p 0 .0 5 ) e 表 2 胆道上皮细胞凋亡指数检测结果( x士s ) H A I 组 ( n = 8 )(%) 0 . 2 3 土0 . 0 7 1 . 8 7 士0 . 1 3 “ 0 3 . 7 3 士0 . 2 4 0 * 7 . 1 4 士0 . 6 2 - 1 2 . 8 9 士1 . 0 2 0 “ 桥式置管 组( n = 8 ) ( % ) 对洲纫( n = 8 又 % ) 冷灌注后 门静脉开放I I I 门静脉开放2 h I 7
