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1、江淮学院本科毕业论文（设计）题目树舌灵芝多糖的提取及其抗氧化作用 学生姓名： 司楠楠 学号 01124068 系 别： 理工部 专业： 生物科学入学时间： 2012年 09月导师姓名： 吴庆喜 职称/学位：讲师/博士 毕业论文（设计）提交时间：二一六 年 四 月安徽大学江淮学院教学科研部制树舌灵芝的提取及其抗氧化作用摘 要目的：研究树舌灵芝多糖的提取条件及抗氧化作用。方法：本实验采用水提醇沉的方法进行灵芝多糖的提取，并对提取过程中的料液比、提取时间、提取温度进行单因素实验分析和正交试验，以多糖得率为指标得到最佳提取条件。本文选取两个指标即DPPH的清除作用和-OH的清除作用研究灵芝多糖的抗氧化
2、活性。结果：正交试验结果表明，最佳提取条件：提取温度为90C、提取时间为2h、料液比为1：15的条件下多糖得率为69.7%。结论：各提取因素对提取率的影响大小排序为：提取温度提取时间料液比。灵芝多糖对DPPH和-OH都具有较强的清除作用，且对浓度有依赖关系，表明野生树舌灵芝多糖具有较强的抗氧化活性。关键词：树舌灵芝多糖；单因素分析；正交试验；抗氧化作用Extraction and antioxidation studies of polysaccharides from Ganoderma lucidumAbstractObjective: To study the extraction co
3、nditions and antioxidation of Ganoderma lucidum polysaccharides from Ganoderma lucidum. Methods: in this experiment, the water extraction and alcohol precipitation method for the extraction of Ganoderma lucidum polysaccharides, and analysis of single factor experiments and orthogonal test of extract
4、ion process of solid to liquid ratio, extraction time, extraction temperature, to polysaccharide yield as the index to get the best extraction conditions. In this paper, we selected two indicators, namely, the scavenging effect of DPPH and the scavenging effect of -OH on the antioxidant activities o
5、f Ganoderma lucidum polysaccharides. Results: orthogonal test results showed that the best extraction conditions: extraction temperature was 90 degrees C, extraction time was 2h, the ratio of material to liquid ratio of 1:15 was 69.7%. Conclusion: the effects of the extraction factors on the extract
6、ion rate were as follows: extraction temperature feed liquid ratio. The Ganoderma lucidum polysaccharides had strong scavenging effect on DPPH and -OH, and had a strong dependence on the concentration, which indicated that the Ganoderma lucidum polysaccharides had strong antioxidant activity.Key wor
7、ds: Ganoderma lucidum polysaccharides; Single factor analysis; Orthogonal test; Antioxidation目 录第一章 引言1 1.1 树舌灵芝简介1 1.2 树舌灵芝多糖简介1 1.3 树舌灵芝多糖的提取方法研究1 1.4 树舌灵芝多糖的生物活性2 1.4.1 树舌灵芝多糖的抗肿瘤作用 2 1.4.2 树舌灵芝多糖的降血糖作用2 1.4.3 树舌灵芝多糖的抗氧化作用2 1.5论文主要研究内容及研究意义3第二章 材料、试剂、仪器3 2.1 材料3 2.2 试剂3 2.3 仪器设备3第三章 方法4 3.1 原材料的处
8、理4 3.2 树舌灵芝多糖的提取工艺路线4 3.2.1 热水浸提4 3.2.2 过滤4 3.2.3 浓缩4 3.2.4 醇沉4 3.2.5 离心4 3.2.6 再浓缩4 3.2.7 冷冻干燥并称量4 3.3 单因素提取实验4 3.3.1 不同提取温度对多糖得率的影响4 3.3.2不同料液比对多糖得率的影响5 3.3.3不同提取时间对多糖得率的影响5 3.3.4树舌灵芝多糖提取的正交试验5 3.4树舌灵芝粗多糖的含量测定5 3.4.1总糖含量的测定5 3.5抗氧化研究实验6 3.5.1 实验溶剂6 3.5.2实验过程6 3.5.2.1对DPPH的清除能力测定 6 3.5.2.2对羟基自由基的清除
9、能力测定6 3.5.3数据处理7第四章 实验结果分析7 4.1单因素提取对多糖得率的影响7 4.1.1提取温度对多糖得率的影响7 4.1.2料液比对多糖得率的影响8 4.1.3提取时间对多糖得率的影响9 4.2正交试验9 4.3多糖含量的测定10 4.3.1葡萄糖标准曲线10 4.4抗氧化作用的研究11 4.4.1DPPH的清除作用分析11 4.4.2羟基自由基的清除作用分析11第五章 结论与展望12主要参考文献14致 谢15第一章 引 言1.1 树舌灵芝简介 灵芝为多孔蓖科真菌灵芝的子实体。性味 性温，味淡。气特殊，味道苦涩。是中国最珍贵而又稀少的野生草本植物。自古享有“诸药为个病之药，灵芝
10、为百病之药”的美誉。灵芝，在我国自古就有“仙草”的美誉，已有悠久的药用和食用历史，神农本草经、本草纲目都有灵芝的药效记载1。树舌灵芝又称树舌扁灵芝、老母菌、枫树菌。子实体大型或特大型。无柄或几乎无柄。菌盖半圆形，扁半球形或扁平，表面灰色，渐变褐色，有同心环纹棱，有时有瘤，皮壳胶角质，边缘较薄。菌肉浅栗色，菌孔圆形。生于杨、桦、柳、栎等阔叶树的枯立木、倒木和伐桩上，是重要的木腐菌之一，会导致木材木质部形成白色腐朽，可药用。在中国和日本民间作为抗癌药物。还可以治闻风湿性肺结核，有止痛、清热、化积、止血、化痰之功效。成分包括多糖、甾体化合物、三萜、脂类、氨基酸、多肽、蛋白质类、生物碱类、酚类、内酯、
11、香豆素类和甙类以及微量元素等。野生灵芝有非常丰富的药理成分，在神农本草经和本草纲目中，都记载了灵芝的药效，它能“治胸中结，溢心气”，“入心生血，助心充脉”，“安神”、“保神”、“益肺气”、“益脾气”、“益精气”等，对全身五脏之气均具有补益作用2。图1 树舌灵芝Fig1: Ganoderma lipsiense 本实验论文采用的是从安徽省霍山县深山老林中得到的野生树舌灵芝，其颜色为深灰色，其长度为27.75cm、宽度为35.2cm，重量在1公斤左右。1.2 树舌灵芝多糖简介多糖是由多个单糖分子以糖苷键结合而成的天然大分子化合物广泛存在于植物、动物和微生物组织中是生命有机体的重要组成部分，并且具有
12、多种多样的生物活性3。多糖是一类高分子活性的大分子物质，大量药理和临床证明多糖具有抗肿瘤、抗炎症及增强免疫和降低血糖等活性，近年来,天然产物多糖作为医药产品的前体已受到广泛重视,多糖化合物已成为当今新药的发展方向之一。灵芝多糖是灵芝中最有活性的有效组分之一，并且具有多种药理活性，如提高免疫力、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化，研究结果表明，灵芝的抗肿瘤活性是由于具有特定结构的多糖，灵芝多糖除了具有增强免疫力的作用及抑制肿瘤的功能以外，还有显著的抗突变，降血脂、血糖，抗病毒等功效4。树舌灵芝多糖的抗肿瘤作用：目前许多研究证明灵芝多糖具有抗肿瘤活性。灵芝多糖主要是通过巨噬细胞和NK细胞，促进IL-1、IL-
13、2、TNF-，等细胞因子的分泌，提高机体的免疫监视功能，从而减少肿瘤的发生5。灵芝多糖之所以能防止肿瘤的发生和抑制肿瘤的生长，主要是作为机体免疫调节剂，通过增强宿主免疫调节功能即宿主介导抗肿瘤活性来实现的6。树舌灵芝多糖的降血糖作用：随着社会的发展，人们生活水平的不断提高，许多老年人都患有糖尿病，然而糖尿病也正向着年轻人发起攻势，所以当今社会对于糖尿病的防御已经是措手不及，目前针对治疗糖尿病的药物主要为二甲双胍片。通过文献查阅可知，目前大部分研究主要通过灵芝多糖对胰腺组织的保护和抑制胰腺P细胞的凋亡来研究其降血糖的机理。结果表明其降血糖作用还是非常显著的，这一研究对于今后防治糖尿病有重大意义。
14、 树舌灵芝多糖的抗氧化作用，人体代谢过程中会因氧化作用而产生大量的自由基，在正常情况下，人体内的自由基处于不断产生与清除的动态平衡中，自由基的大量存在会影响生物大分子及细胞器的正常运作，最终造成机体不同程度的损伤，使机体衰老或者会诱发各种疾病。因此，研究某种物质的抗氧化性质主要是研究其对各种自由基（-OH、DPPH、超氧阴离子等）的清除作用。灵芝多糖具有减少机体内自由基的产生，增强免疫力的作用。通过文献查阅，大部分资料表明对多糖体内抗氧化能力的研究较多，而关于灵芝多糖在体外的直接清除作用研究较少，因此，本文主要研究灵芝多糖在体外的抗氧化活性。1.3 树舌灵芝多糖的提取方法研究 目前关于灵芝多糖的提取常用的方法为水提醇沉、酸提取法、碱提取法、高温提取法以及酶法提取等。根据所查阅的资料表明，高温提取法虽然效率非常高，但是温度过高会使糖类物质的结构发生变化，从而对多糖的活性产生影响，不利于实验的正常进行。此外，对于富含淀粉类
