类芽孢杆菌B69中脂肽类化合物Pelgipeptins的分离鉴定及相关基因簇分析

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1、论文作者签名: 指导教师签名: 答辩委员会主席: 因舷教援逝江太堂 委员1 : 邳健忠教援逝迢太堂 委员2 : 望鱼光数援逝、江工些太堂 委员3 :直渔查塾援浙江太堂 委员4 : 赵主垡教援逝江太堂 A u t h or ss i gn a t u r e : f 、 S u p e r v i s o r 7 ss t g n a t u r e : 1 I l l l l l l l lI I I 9 9 4 6 C h a i r : 垃H 驾M 瓯丛自i 堑g 也煎戤 ( C o m m i t t e eo f o r a ld e f e n c e ) C o m m i t t

2、 e e m a n1 : P 殴逝= 凼Q 氅趾煦,助自遮磐垃i y 鲎政 C o m m i t t e e m a n2 :垃遨釜凹磐趾弛盈自遮n g 逊i 巡s 醯 C o m m i t t e e m a n3 E 垃H 吐Q 虹nQ a Q 丛白遮n g i 盥堡丝y C o m m i t t e e m a n4 : P 垃进垃堕Z 逝。Z h 白遮n gU n 曼竖豇Y D a t eo f o r a ld e f e n c e :地1 Q 竺2 Q 11 I I 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成

3、果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果,也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名:丁钪 签字日期: 加, 年厂月1 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解迸望盘堂有权保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权澎望盘鲎 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播,可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书

4、) 学位论文作者签名: 5 - 饶 签字同期:2 p 1 1 年厂月日 l I I 导师签名: 签字日期:幻f 年么月厂日 浙江大学博士学位论文 致谢 目录 英文缩略词( A B B R E V I A T I O N ) H 摘 A b s t r a c t 第一章文献综述1 1 1 前言1 1 2 多肽类生物活性物质的非核糖体合成机理2 1 2 1 非核糖体肽类( N R P ) 合成过程2 1 2 2 非核糖体和核糖体机制的区别3 1 2 3 非核糖体肽合酶( N R P S ) 核心域的结构与功能5 1 2 3 1A 结构域5 1 2 3 2P C P 结构域5 1 2 3 3C 结

5、构域6 1 2 3 4T 结构域7 1 3 芽孢杆菌产生的非核糖体肽类抗生素研究概况7 1 3 1 芽孢杆菌源非核糖体肽及相关基因簇研究概况7 1 3 1 1 表面活性素超家族7 1 3 1 2 丰原素超家族9 1 3 1 3 伊枯菌素超家族1 0 1 3 1 4 多粘菌素家族1 1 1 3 2 脂肽类化合物的抗菌机理研究1 2 1 4 基于N R P S P K S 挖掘隐蔽型天然产物生物合成基因簇1 3 1 5 本课题的主要研究内容1 6 第二章脂肽类抗生素p e l g i p e p t i n s 的分离、纯化及结构鉴定1 7 2 1 前言17 2 2 材料18 2 2 1 菌株18

6、 2 2 2 主要试剂18 2 2 3 主要培养基一1 8 2 2 4 主要仪器19 2 3 方法19 Z 3 1 单因素实验方法对产抗发酵条件的研究。1 9 2 3 1 1 不同碳源对菌株1 3 6 9 产抗能力的影响2 0 2 3 1 2 不同氮源对菌株B 6 9 产抗能力的影响2 0 2 3 1 3 碳源、氮源浓度优化实验2 0 2 3 1 4 微量元素成分及浓度的优化实验2 1 2 3 1 5 确定培养基的最佳起始D H 2 1 2 3 1 6 确定培养条件中的最佳温度2 1 2 3 1 7 不同诱导物对菌株1 3 6 9 产抗能力的影响2 l 2 3 2 扩大规模的发酵罐发酵工艺2

7、2 2 3 3 产抗物质的分离纯化工艺2 2 浙江大学博士学位论文 2 3 3 1 粗提物的制备2 2 2 3 3 2 初步分离纯化2 2 2 3 3 3H P L C 分离纯化2 2 2 3 3 4 样品纯度分析2 3 2 3 3 5 纯品的制备2 3 2 3 4 脂肽类抗菌化合物的结构鉴定2 3 2 3 4 1E S I C I D - M S 分析2 3 2 3 4 2 核磁共振技术分析2 4 2 4 结果与分析2 4 2 4 1B 6 9 菌株产抗条件优化研究2 4 2 4 2P e l g i p e p t i n s 抗生素的分离纯化3 0 2 4 2 1 粗纯3 0 2 4 2

8、 2 精纯3 1 2 4 3P e l g i p e p t i n s 抗生素的结构鉴定31 2 4 3 1P e l g :i p e p t i n s 的分子量测定3 1 2 4 3 2P e l g i p e p t i nA 结构推断3 4 2 4 3 3P e l g i p e p t i nB 结构推断一3 5 2 4 3 4P e l g i p e p t i nC 结构推断3 7 2 4 3 5P e l g i p e p t i nD 结构推断4 0 2 5 讨论4 3 2 6 本章小结4 4 第三章脂肽类抗生素p e l g i p e p t i n s 的

9、生物活性测定4 7 3 1 前言4 7 3 2 材料4 7 3 2 1 指示菌4 7 3 2 1 1 革兰氏阳性菌一4 7 3 2 1 2 革兰氏阴性菌4 8 3 2 1 3 真菌4 8 3 2 2 实验动物一4 8 3 2 3 主要试剂一4 8 3 2 4 主要培养基。4 9 3 2 5 主要器材。4 9 3 3 方法4 9 3 3 1 抗生素抑菌活性的测定4 9 3 3 2 细菌的M I C 测定4 9 3 3 3 丝状真菌M I C 测定方法5 0 3 3 4 植物体内抗菌实验。5 0 3 3 4 1 药剂制备及处理5 1 3 3 4 2 盘栽实验5 1 3 3 4 3 药效计算5 2 3 3 5 小鼠急毒实验5 2 3 3 6 时间杀菌曲线5 2 3 3 7 外膜通透性实验5 2 3 4 结果与分析5 3 3 4 1P e l g i p e p t i n s 体外抗菌活性5 3 3

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