《簇毛麦丝氨酸苏氨酸蛋白激酶基因StpkV2、StpkV3的克隆与分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《簇毛麦丝氨酸苏氨酸蛋白激酶基因StpkV2、StpkV3的克隆与分析（82页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
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2、。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：墼垒丝 ? 、 导师签名盈幺蕴 目 符号说明 A m p ：a m p i c i l l i n ，氨苄青霉素 c D N A ：c o m p l e m e n t a r yD N A ，互补D N A d d H 2 0 ：d i s t i l l e da n dd e i o n i z e dw a t e r ，双蒸水 D E P C ：d i e t h y lp y r o c a r b o n a t e ，焦碳酸二乙酯 D M S O ：d i m e t h y ls u l p h o x i d e ，二甲基
3、亚砜 D N A ：d e o x y r i b o n u c l e i ca c i d ，脱氧核糖核酸 d N T P ：d e o x y r i b o n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t e ，脱氧核糖核苷三磷酸 E B ：e d h i d i u mb r o m i d e ，溴化乙锭 E D T A ：e t h y l e n d i a m i n e t e t r a c e t a t e ，乙二胺四乙酸 I P T G ：i s o p r o p y l t h i o p D - g a l a c t o
4、s i d e ，异丙基一p - D 一硫代半乳糖苷 L B ：l u r i a b e r t a n im e d i u m ，L B 培养基 P C R ：p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，聚合酶链式反应 R N a s e A ：r i b o n u c l e a s eA ，核糖核酸酶A R i f “ r i f a m p i c i n ，利福平 R T P C R ：r e v e r s et r a n s c r i p t i o nP C 反转录P C R S D S ：s o d i u md o d
5、 e c y ls u l f a t e ，十二烷基硫酸钠 T r i s ：t r i s h y d r y x y m e t h yl a m i n o m e t h a n e ，三羟甲基氨基甲烷 Y E P ：y e a s te x t r a c ta n dp e p t o n em e d i u m ，Y E P 培养基 L 目录 中文摘要1 英文摘要3 1 前言? 6 1 1 普通小麦及近缘种概述：6 1 2 白粉病危害的严重性7 1 2 1 白粉病在中国的发生情况7 1 2 2 白粉病爆发的原因7 1 3 小麦抗白粉病基因的研究8 1 3 1 小麦抗白粉病基因
6、的染色体定位8 1 3 2 抗小麦白粉病的微效基因研究1 0 1 4 外源抗白粉病基因向普通小麦的导入1 1 1 5 簇毛麦的优良性状：1 l 1 5 1 簇毛麦潜在的优良农艺性状11 1 6 簇毛麦在育种中的应用1 2 1 6 1 小麦簇毛麦双二倍体的创造1 2 1 6 2 小麦簇毛麦异附加系和代换系的选育1 3 1 6 3 小麦簇毛麦易位系的选育1 4 1 7 蛋白激酶在植物防御反应中的作用1 5 1 8R 基因编码的保守区1 6 1 9R 基因的简要研究现况1 6 1 1 0R N A 干扰技术的作用原理1 7 1 11 转基因R N A 干扰技术在植物中的应用1 7 1 1 2 本实验
7、的目的意义1 8 2 材料与方法2 0 2 1 实验材料2 0 2 1 1 植物材料2 0 2 1 2 菌株与质粒2 0 2 1 3 酶与各种生化试剂2 0 2 1 4P C R 引物 2 2 实验方法 2 2 1 目的基因的分离 2 2 1 1 总R N A 的提取 2 2 1 2 琼脂糖凝胶电泳检测R N A 2 2 1 3 反转录e D N A 第一链的合成 2 2 1 4P C R 扩增 2 2 1 5D N A 目的片段的回收2 5 2 2 1 6 回收产物加A 2 5 2 2 1 7 连接反应2 5 2 2 1 8 大肠杆菌感受态细胞的转化2 6 2 2 1 9 质粒的提取2 6
8、2 2 3 根癌农杆菌感受态细胞的制备与转化2 6 2 2 3 1 农杆菌感受态细胞的制备2 7 2 2 3 2 冻融法转化农杆菌2 7 2 3 原核表达分析。2 8 2 3 1 原核表达载体的构建2 9 2 3 2 目的蛋白的诱导表达和检测2 9 2 3 2 1 目的蛋白的诱导表达2 9 2 3 2 2 目的蛋白的检测2 9 2 3 2 3 重组菌总蛋白的提取3 0 2 3 3s t p k - v 及s t p k - w 的表达分析3 0 2 3 3 1 半定量R T - P C R 3 0 2 3 3 2 实时定量P C R 。3 0 2 4 农杆菌介导的转化31 2 4 1 以幼胚为
9、材料3 l 2 4 1 1 胚性愈伤组织的获得3 l 2 4 1 2 菌液的准备3 1 2 4 1 2 感染步骤3 2 2 4 1 3 抗性愈伤组织的筛选和抗性苗的获得3 2 2 6 转基因植株鉴定3 4 2 6 1 再生植株叶片D N A 的提取3 4 2 7 转基因植株的P C R 检测3 5 2 7 1 再生植株选择标记基因的P C R 检测3 5 3 结果与分析3 6 3 1 簇毛麦H v # 2 及簇毛麦N o 1 0 2 6 的形态学观察3 6 3 2 簇毛麦N o 1 0 2 6 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶基因的克隆和序列分析3 6 3 2 1S t p k - V 2 ，S t p
10、k - I 3e D N A 全长的克隆3 6 3 2 2S t p k - V 2 ，S t p k - V 3 基因组D N A 全长的克隆3 7 3 3S t p k - V 2 和S t p k - V 3 基因氨基酸序列的分析与系统发育树的构建3 8 3 3 1S t p k - V 2 和S t p k - V 3 基因氨基酸序列分析3 8 3 3 1S t p k V 2 和S t p k - V 3 系统发育树的构建3 9 3 4S t p k - V 2 和S t p k - V 3 基因组序列的分析4 1 3 5 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶基因S t p k - V 2 的染色体定位4 2 3 6 功能标记的开发与应用4 4 3 6 1 引物对P K F 1 P K R 的P C R 的扩增
