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1、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA),相关疾病 IIF染色型 特异性靶抗原抗体 韦格纳氏肉芽肿(WG) c, p(少见) PR3(85%),MPO(10%) 显微型多动脉炎(MPA) c, p PR3(30%),MPO(70%) 坏死性新月体肾小球肾炎 p, c(少见) PR3(25%),MPO(65%) (NCGN) 过敏性肉芽肿性血管炎(CSS) p, c(少见) PR3(10%),MPO(60%) 结节性多动脉炎(PAN) 低阳性率 PR3( 5%),MPO(15%) 抗肾小球基底膜疾病 p MPO(30%) (抗GBM病),ANCA临床意义(1):原发性系统性小血管炎,相关疾病 IIF染色
2、型 特异性靶抗原抗体 炎症性肠病 溃疡性结肠炎(UC, 60-80%) p, a BPI , lamina ?其它 克罗恩病(Crohns病, 10-20%) p, a BPI, lamina ?其它 自身免疫性肝病 原发性硬化性胆管炎(PSC, 70-88%) p, a actin? BPI ,其它 原发性胆汁性肝硬化(PBC, 3-18%) p, a actin? BPI ,其它 自身免疫性肝炎(AIH) p, a actin? BPI ,其它 结缔组织病 系统性红斑狼疮(SLE) p, a LF, CG,MPO(少见) 类风湿性关节炎(RA) p, a LF, CG,MPO (少见) F
3、elty综合征 p, a LF, CG,MPO(少见),ANCA临床意义(2):IBD/ALD/CTD,相关疾病 IIF染色型 特异性靶抗原抗体 药物性ANCA阳性血管炎 药物性狼疮(DIL) p MPO (常见) LF,HEL 甲状腺功能亢进(PTU治疗) p, a MPO,LF,HEL,BPI,其它 呼吸系统炎性疾病 囊性纤维化(CF) a, p BPI(91%) 原发性支气管扩张症 a, p BPI,其它 原发性支气管扩张 a, p BPI,其它 感染性疾病 细菌(心内膜炎、呼吸道感染) a, p BPI,CG,其它 病毒(HIV感染) a, p 不明 真菌(着色真菌病) a, p 不明
4、 原虫(急性疟疾、侵袭性阿米巴感染) a, p CG,PR3,ANCA临床意义(3):药物性 /感染性疾病,ANCA检测方法及检测指标,ANCA(抗中性粒细胞胞浆抗体),ANCA=Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies,中性粒细胞结构: 细胞直径10-12um,核呈深染的弯曲杆状(马蹄铁形)或分叶状,分叶核一般为25叶,叶间有前戏的缩窄部相连。,ANCA(抗中性粒细胞胞浆抗体),欧蒙公司产品基质是从O型血的人血中提取出来的中心粒细胞。 ANCA的靶抗原位于中心粒细胞胞浆中,ANCA是从间接免疫荧光法中发现的。 ANCA分两种:cANCA及pANCA。,
5、ANCA检测方法及指标,间接免疫荧光法,ELISA方法/欧蒙印迹法,ANCA检测和报告的国际公识 (Savige, van der Woude, Wiik et al., 1999),间接免疫荧光法是检测ANCA的经典方法,特点:敏感性高,半定量,是区分cANCA和pANCA的基础 局限性:间接免疫荧光法测定的是总ANCA,不能区分靶抗原,需要确认实验作为补充,间接免疫荧光法检测ANCA,核周型ANCA(pANCA) 胞浆型ANCA(cANCA),间接免疫荧光法检测ANCA,细胞核周围呈现平滑的带状荧光,细胞核阴性,细胞浆呈现不均匀的颗粒样荧光,有时形成小团块或粗大颗粒,核分叶处有荧光增强,两
6、种ANCA荧光染色成因,甲醛的强固定作用细胞浆中ANCA抗原如MPO不能从嗜天青颗粒中释放,表现为胞浆内均一的荧光染色即c-ANCA,无水乙醇固定时,MPO等抗原物质可以从嗜天青颗粒中释放出来,由于电荷作用吸附在细胞核周围形成p-ANCA,ANCA筛查: 免疫荧光,cANCA,ANCA判读,建议 读片顺序: 粒细胞 (乙醇固定) 粒细胞 (甲醛固定) HEP-2 猴肝 判读,cANCA,pANCA,HEp-2 cells,cANCA,粒细胞 (乙醇固定),粒细胞 (甲醛固定),猴肝,1,3,4,2,cANCA: 靶抗原,蛋白酶3 (PR3) 杀菌性/通透性增强蛋白 (BPI; CAP57) 其
7、它未知抗原,cANCA: 相关疾病,韦格纳肉芽肿(WG) - 典型的WG:可逐渐发展成为肾小球肾炎 90% - 局限性的WG:可不累及肾小球 70% 显微镜下多动脉炎(MPA) up to 30% 变应性肉芽肿性血管炎(Churg-Strauss 综合征) 10-20% 结节性多动脉炎(PAN) 5-10%,注意区分ANA对荧光模型的干扰,抗溶酶体抗体,粒细胞 (乙醇固定),猴肝,粒细胞 (甲醛固定),HEp-2 cells,1,3,4,2,pANCA,pANCA (甲醛抗性),粒细胞 (乙醇固定),猴肝,粒细胞 (甲醛固定),HEp-2 cells,HEp-2 cells,1,3,4,2,p
8、ANCA(甲醛敏感),粒细胞 (乙醇固定),猴肝,粒细胞 (甲醛固定),HEp-2 cells,1,3,4,2,pANCA: 靶抗原,髓过氧化物酶(MPO; 甲醛固定;甲醛抗性) 乳铁蛋白 弹性蛋白酶 组织蛋白酶G(甲醛敏感) 杀菌性/通透性增强蛋白(BPI; CAP57) -烯醇化酶 -葡萄糖醛酸酶 溶菌酶 Azurocidine (CAP37) .,请参考上文2-4页相关疾病与其靶抗原,pANCA: 相关疾病,原发性血管炎 (MPO) 显微镜下多动脉炎 42-70% 变应性肉芽肿性血管炎 18-60%,结缔组织病 SLE 9-25% 类风湿性关节炎 3-20%,慢性炎症性肠病 溃疡性结肠炎
9、 76% 克隆恩氏病 7%,自身免疫性肝病 原发性硬化性胆管炎 87% AIH type 1 / PBC ?,注意区分ANA对荧光模型的干扰,ANA + pANCA 与 ANA,猴肝,猴肝,ANA + pANCA,ANA,均质型ANA的干扰,粒细胞 (乙醇固定),猴肝,粒细胞 (甲醛固定),HEp-2 cells,1,3,4,2,核膜型ANA的干扰,猴肝,粒细胞 (甲醛固定),HEp-2 cells,粒细胞 (乙醇固定),1,3,4,2,ANA + pANCA(甲醛抗性),粒细胞 (乙醇固定),猴肝,粒细胞 (甲醛固定),HEp-2 cells,1,3,4,2,ANA + pANCA (甲醛敏
10、感),粒细胞 (乙醇固定),猴肝,HEp-2 cells,粒细胞 (甲醛固定),1,3,4,2,1,3,4,2,ANA干扰 ANCA阴性,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2 细胞,粒细胞 (乙醇固定),粒细胞 (甲醛固定),1,3,4,2,阴性,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2 细胞,粒细胞 (乙醇固定),粒细胞 (甲醛固定),1,3,4,2,甲醛抗性pANCA,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2 细胞,粒细胞 (乙醇固定),粒细胞 (甲醛固定),1,3,4,2,甲醛抗性pANCA,猴肝,HEp-2 细胞,粒细胞 (甲醛固定),粒细胞 (乙醇固定),1,3,4,2,ANCA阴性,ANC
11、A常见问题答疑,关于ANCA: 理论知识:,一、实验结果与理论知识不符,IFT为C-ANCA,靶抗原为MPO,结果的解释(1),作者证明了抗MPO抗体成为C-ANCA的原因:抗MPO抗体为一组异质性抗体,其中某个亚群的靶抗原(即MPO蛋白)被与乙醇反应后不会向胞膜移动。,IFT为C-ANCA,靶抗原为MPO 样本稀释后实验结果:IFT为强C-ANCA+弱pANCA 靶抗原结果为:弱MPO + 强BPI,结果的解释(2),提醒: 强C-ANCA有时会掩盖弱pANCA; ANCA的靶抗原检测多数医院还是很有局限,ANCA谱 ELISA-可同时检测6种靶抗原,蛋白酶 3,乳铁蛋白,髓过氧化物酶,弹性
12、蛋白酶,组织蛋白酶 G,BPI (CAP57),pANCA,二、检测方法学选择上的问题,仅RP3和MPO,仅定性,无定量,单基质/两基质片, 未排除ANA干扰,仅IIF,临床应用范围受限,降低疾病特异性,假阳性,给临床信息少,国内ANCA临床常规检测存在的问题,两种方法联合使用,可提高ANCA临床应用价值 原发性系统性小血管炎患者约5%IIFT阴性而ELISA阳性,ANCA检测方法的合理选择,据国内外报道,采用IIF在SLE中检测ANCA,阳性率差异很大, 16%-69%,主要为pANCA 仅采用乙醇片判断,ANA干扰大 据欧蒙检测数据,SLE中单独采用乙醇固定抗原片检测ANCA,由于 ANA
13、干扰可产生31.2%的假阳性结果,主要为均质型的ANA(占77.8%) 推荐:IIF法检测ANCA提倡应用组合抗原片(甲醛固定片、乙醇固 定片、Hep-2细胞片等),综和判断结果,避免ANA干扰,提高 ANCA临床应用价值,ANCA IIF法检测的影响因素-ANA,需求:抗PR3及MPO抗体滴度与病情活动一致疗效判断、复发指标 特异性:低效价MPO抗体偶见于CTD患者等非血管炎患者,高滴度的 抗MPO抗体更多见于原发性小血管炎 结论:临床常规检测ANCA应报告定量或半定量检测结果。 IIF法:将血清作倍比稀释后(1:10、1:100)检测 ELISA法:应选择可定量或相对定量的检测试剂盒,三、ANCA的定量或半定量检测的选择,Thank you!,