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1、HBV基因分型和耐药突变基因检测的临床应用,产品介绍,1,2,背景介绍,主 要 内 容,乙型病毒性肝炎 是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝脏炎性损害。是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种传染病。 HBV感染呈世界性流行，但不同地区HBV感染的流行强度差异很大。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌 (HCC) 1。 1 World Health Organization. Hepatitis B. World Health Organization Fact Sheet 204
2、dex. (Revised October 2000). WHO Web site .http:/www.who.int/mediacentre/ factsheets/fs204/en/ in html.,流行病学,流行病学,Clinical and Epidemiologic Correlations in HBV Infection.,Lok AS, McMahon BJ. Chronic hepatitis B. Hepatology 2007;45:507-39. Erratum, Hepatology 2007;45:1347.,流行病学,2006年全国乙型肝炎流行病学调查结果表明
3、： 我国 159岁人群乙肝表面抗原携带率为7.18% ，据此推算， 我国现有的慢性HBV感染者约9300万人， 其中慢性乙型肝炎患者约2000万例2 2 慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）肝病学会，感染病学分会，2010年12月10日,病原学,HBV（hepatitis B virus）乙型肝炎病毒，属嗜肝病毒科，基因组长约3.2Kb，为部分双链环状DNA。HBV已发现有AI 9个基因型，在我国以C型和B型为主。,包膜： HBsAg 糖蛋白 细胞脂肪 核心： HBV-DNA DNA-Polymerase HBcAg,病原学,HBV侵入肝细胞后，部分双链环状HBV DNA在细胞核内以负链DNA
4、为模板延长正链以修补正链中的裂隙区，形成共价闭合环状DNA (cccDNA)；然后以cccDNA为模板，转录成几种不同长度的mRNA，分别作为前基因组RNA和编码HBV的各种抗原。 cccDNA半寿 (衰) 期较长，很难从体内彻底清除。,HBV感染和发展的结局图,HBV感染可有不同的发展和结局，这是由病毒和宿主双方因素决定的。 病毒方面：感染的数量和毒株的异质性、以及传播的方式； 宿主方面：免疫状态、以及决定免疫状态的年龄、遗传素质、基础健康状况和并存的疾病。,自然史,诊断, 临床诊断 既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月，现HBsAg和（或）HBV DNA仍为阳性者，可诊断为慢性HB
5、V感染。可分为： 慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、携带者、隐匿性慢性乙型肝炎 实验室诊断 生物化学检查：ALT、AST、血清白蛋白、PT、胆碱酯酶、AFP 血清学检查 HBV DNA、基因型和变异检测：定量检测、分型和耐药突变检测 影像学诊断 病理学诊断,治疗,慢性乙型肝炎治疗的总体目标 最大限度地长期抑制HBV，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。 慢性乙型肝炎治疗 抗病毒、免疫调节、抗炎和抗氧化、抗纤维化和对症治疗。 抗病毒治疗是关键，只要有适应证，且条件允许，就应进行规范的抗病毒治疗。,干扰素：直接抗病毒作用和
6、免疫调节作用清除病毒。 我国已批准普通IFN （2、2b和1b）和聚乙二醇干扰素（2和2b）用于治疗慢性乙型肝炎。 HBV基因型与疾病进展和干扰素治疗效果有关。 与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌。 HBeAg阳性患者对干扰素治疗的应答率，B基因型高于C基因型；A基因型患者高于D基因型 。,治疗,治疗,核苷（酸）类药物：竞争性抑制HBV DNA聚合酶；参与新的HBV DNA链合成过程中，终止新链合成。 目前已应用于临床的抗HBV核苷（酸）类药物有3类，我国已上市4种。,治疗,耐药是核苷酸类药物的共性 耐药检测的意义 治疗
7、前检测，有助于临床判断用药是否有效； 治疗中每36个月检测，有助于观察疗效，及时调整用药。,EASL Clinical Practice Guidelines：Management of chronic hepatitis B. European Association for the Study of the Liver. J Hepatol, 2009, 50: 227-242.,HBV基因分型和耐药突变基因检测产品介绍,乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒 （PCR-反向点杂交法）,国食药监械（准）字2011第3401179号,产品用途,在抗病毒治疗前和治疗中对血清/血浆中的HBV进
8、行基因分型和耐药突变基因检测,区分中国和其他亚洲国家常见的HBV-B、C、D基因型 检测HBV 3类抗病毒药物5个热点突变位点的6种突变类型,HBV耐药突变基因检测的临床意义,1. 抗病毒药物治疗前的药物选择 在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前，进行耐药突变基因检测，可以指导临床医生合理选择抗病毒药物，真正实现个体化诊治。 2.抗病毒药物治疗中的药效监测 在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗过程中，进行耐药突变基因检测，可以监测抗病毒药物治疗效果并及时调整治疗方案。,HBV基因分型的临床意义,1. 预测疾病进展 与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和
9、原发性肝细胞癌。 2. 治疗方案的选择 HBeAg阳性患者对干扰素治疗的应答率，B基因型高于C基因型；A基因型患者高于D基因型 3. 流行病学调查研究,1. 准确性：检测105例临床慢性HBV感染阳性样本，结果与测序比较显示为相同的基因型和耐药突变类型，准确率为100%。 2. 特异性：检测50例临床HBV阴性样本结果全部为阴性；检测非HBV感染性病原体DNA，包括C型肝炎病毒（HCV）、乙型脑炎病毒、梅毒螺旋体和HIV，结果均为阴性。 3. 灵敏度：能稳定检测血清HBV的最低检出限为1.0103IU/mL。 4. 精密度：检测2.0103IU/mL的血清HBV，批内和批间的一致性好。 5.
10、稳定性：产品有效期为6个月，在有效期内产品性能稳定。,产品性能指标,产品使用,产品操作流程,产品使用,HBV膜条探针阵列图,rt=reverse transcriptase，逆转录酶。以逆转录酶编码氨基酸的顺序命名各检测位点。如：rt180L表示逆转录酶编码氨基酸第180位为亮氨酸。 CC为显色控制点。,试验成立的条件 显色控制点CC正常显色。 阳性质控品正常显色同时阴性质控品除CC外其他所有阵列位点不显色。 结果判读 根据显色（蓝色斑点）出现的阵列位点直接判读HBV的基因型和耐药突变类型。 示例：,产品使用,产品使用,结果判读示例,交叉耐药突变与核苷类似物药物的关系表,注释： 耐药水平分高、
11、中、低三级，以体外实验IC50的变化倍数计算 （变化倍数是相比较于野生株而言）； IC50指：最大药物抑制浓度的一半。 低：IC505；中：IC50为520；高：IC5020。,Marc Chany, T. Jake Liang. Drug targets and molecular mechanisms of drug resistance in chronic hepatitis B. Gastroenterology,2007(132):1574-1585.,产品使用,适用人群及科室,适用人群：慢性乙肝患者的用药指导及疗效监测 科室：检验科、感染科、消化内科、肝病科等 使用原则： 慢性乙
12、肝患者抗病毒药物治疗前进行检测，确定HBV基因型和是否发生耐药突变，指导选择敏感的治疗药物； 在抗病毒治疗过程中建议3-6个月进行一次检测，实时监控耐药突变的发生。,检测后的处理 -慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）,对于接受拉米夫定治疗的患者，一旦检出基因型耐药或HBV DNA开始升高时就加用阿德福韦酯联合治疗，抑制病毒更快、耐药发生较少、临床结局较好。 对于替比夫定、恩替卡韦发生耐药者，亦可加用阿德福韦酯联合治疗。 对于阿德福韦酯耐药者，可加拉米夫定、替比夫定、恩替卡韦联合治疗； 对于未应用过其他核苷（酸）类药物者，亦可换用恩替卡韦。 对于核苷（酸）类药物发生耐药者，亦可考虑改用或加用IFN类联合治疗，但应避免替比夫定和PegIFN联合应用，因为可导致外周神经肌肉疾病。,谢谢,
