《矮牵牛ECE支TCP基因的克隆、表达模式、序列变异及PhTCP1的超量表达研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《矮牵牛ECE支TCP基因的克隆、表达模式、序列变异及PhTCP1的超量表达研究（76页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、论文答辩日劳 学位授予单住 学位论文题目：矮窒生曼星玄堑里基固鲍壶隆：塞达搓塞：庄列 变是区盟丛2 Z 鲍超量塞达狃究 、 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以
2、采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 f ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：桥保密，口 保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名： 签字日期： 沙7 年 导师鲐劫州 签字日期：矽f 少年多月j 州象日 一 侈 ，复 目录 目录 摘要I A B S T R A C T I I I 第一章文献综述1 1 1 T C P 基因的研究进展1 1 1 1T C P 基因家族的命名1 1 1 2T C P 基因家族的进化1 1 1 3T C P 基因的相关功能3 第二章引言j 7 2 1 研究背景、目的及意义7 2 2 技术路线8 第三章矮牵牛E C E 支T C P 基因的
3、克隆及序列分析9 3 1 实验材料9 3 1 1 植物材料9 3 1 2 菌株与载体9 3 1 3 主要仪器设备9 3 1 4 试剂盒及主要试剂9 3 1 5 常用试剂配制9 3 2 实验方法。1 0 3 2 1 植物材料的处理l O 3 2 2 矮牵牛D N A 的提取1 0 3 2 3 矮牵牛总R N A 提取1 0 3 2 4e D N A 第一链的合成1 1 3 2 5E C E 支T C P 基因片段扩增1 2 3 2 6h i T A I L P C R 法扩增E C E 支T C P 基因未知片段1 2 3 2 7R A C E 技术克隆基因5 端和37 端c D N A 序列1
4、 3 3 2 8 目的基因的P C R 扩增、D N A 片段的回收、连接、转化、鉴定和测 序1 z I 3 2 9 基因的生物信息学分析15 3 3 结果与分析1 5 3 3 1 矮牵牛E C E 支T C P 基因T C P R 区序列的扩增及分析1 5 3 3 2P h T C P I , - , 4 基因的全长序列的克隆及序列分析1 6 3 3 3 矮牵牛E C E 支T C P 基因的进化树分析2 1 西南大学硕士学位论文 量皇量鲁| 旨置量量量量置置皇舅皇量量皇曼鼍量量量曼量曼量量詈皇曼曼罾舅曼量鼍II 鼍量量| 量皇曼曼曼量量量皇舅量喜量皇量舅一 3 4 小结与讨论。2 2 3
5、4 己未知序列的获得2 2 3 4 2 矮牵牛E C E 支T C P 基因全长的获得及序列分析2 2 3 4 3 生物信息学分析2 2 第四章矮牵牛E C E 支T C P 基因的序列变异研究2 5 4 1 实验材料与试剂2 5 4 1 1 实验材料、载体2 5 4 1 2 主要试剂及设备2 5 4 2 实验方法：2 5 4 3 结果与分析：2 5 小结与讨论2 9 矮牵牛E C E 支T C P 基因的表达分析31 实验材料与试剂。31 5 1 1 实验材料31 5 1 2 试剂盒及主要设备3 1 实验方法31 5 2 1 植物的取材：。3 1 5 2 2 基因的表达分析31 结果及分析。
6、3l 5 3 1P h T C P I 4 基因的在矮牵牛不同组织中的表达分析3 1 5 3 1P h T C P I 。, 4 基因的在矮牵牛腋芽中的表达分析3 2 小结与讨论3 4 5 4 1P h T C P I - , 4 基因在矮牵牛中不同部位的表达特异性分析：3 4 5 4 2P h T C P l 4 基因在矮牵牛腋芽中的表达差异3 6 P h T C P l 基因的超量表达研究3 7 材料与试剂3 7 6 1 1 实验材料、菌株及载体3 7 6 1 2 主要仪器设备3 7 6 1 3 试剂盒及主要试剂3 7 6 1 4 常用试剂配制3 7 6 1 5 矮牵牛转化基本培养基3 8
7、 实验方法3 8 6 2 1 植物材料的处理3 8 6 2 2 植物表达载体的构建3 8 目录 6 2 3 农杆菌电转化感受态的制备3 9 6 2 。4 电击杯的处理及农杆菌电转化感受态细胞的转化4 0 6 2 5 农杆菌介导矮牵牛的转化4 0 6 2 7 转户唬咒P J 基因矮牵牛的检测4 1 6 3 结果与分析4 1 6 3 1P h T C P l 基因超表达( p C M F 5 0 5 ) 和沉默( p C M F 5 0 6 ) 表达载体构 j 枣z 1 1 6 3 2 转基因矮牵牛的获得和检测一4 2 第七章总结4 7 7 1 结论：4 7 7 2 特色4 7 7 3 下一步工作
8、计划4 8 参考文献4 9 缩略词表5 5 附录5 7 至l 谢6 1 摘要 矮牵牛E C E 支T C P 基因的克隆、表达模式、 序列变异及P hT C P l 的超量表达研究 花卉学专业硕士研究生邹世慧 指导老师郭余龙副研究员李名扬教授 摘要 T C P 蛋白是植物所特有的一种转录因子。T C P 结构域最早在金鱼草C Y C 、玉米 的T B l 和水稻P C F l 和P C F 2 中发现，并根据这几个基因的第一个字母缩写为T C P B 1 - _ _ c Y C - P C F s ) 。T C P 结构域由6 0 个左右氨基酸组成，可以形成b H L H 的结构 域( 碱性螺
9、旋环螺旋结构域) ，可能参与蛋白质的二聚化和D N A 结合的功能。 E C E 支T C P 基因除了b H L H 结构域外，还存在富有精氨酸的R 结构域。在核心双 子叶植物中，E C E 支T C P 基因可分为C Y C l 、C Y C 2 、C Y C 3 支，参与了植物的分 枝、花对称性及雄蕊的发育，在植物形态发育过程中发挥了重要的作用。矮牵牛 分枝变异丰富，花对称性有别于其它已对T C P 基因功能研究过的物种，并且易于 进行反向遗传学研究，研究其T C P 基因将有助于认识该类基因的功能多样性，促 进其在植物株型改良和创造新奇花卉新品种中得以应用。 本论文利用简并P C R
10、法获得矮牵牛中E C E 支T C P 基因的同源片段，采用 R A C E 技术获得基因全长，并对序列进行生物信息学分析；构建系统进化树将矮牵 牛E C E 支T C P 基因进行分类，并研究其同源性；使用D N As t a r 软件分析矮牵牛 亲本种和栽培品种中E C E 支T C P 基因的变异情况；利用实时荧光定量P C R 技术 来研究各基因在矮牵牛不同组织中的表达；并将P h T C P l 基因的超量表达载体和 C R E S T 沉默载体转入矮牵牛中，研究P h T C P l 基因的功能。主要取得了以下结果： 1 矮牵牛E C E 支T C P 基因全长的获得及分析 以矮牵牛G L 8 基因组D N A 作为模板，根据玉米的T B l 、金鱼草的C Y C 、柳 穿鱼的L C Y C 及等同源基因设计简并引物，
