《传染病的检测技术进展与质量控制》由会员分享，可在线阅读，更多相关《传染病的检测技术进展与质量控制（83页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、传染病的检测技术进展及质量控制,伴随医疗卫生事业的发展 ，人们对传染病的防治也越来越重视 。在医院中大量传染病标本的检测工作也变得十分重要。,传统的检测方法多种多样，对于很多疾病的诊断有相当大的辅助作用，传染病病原体的准确检测是传染病有效防控的前提，也是合理用药的基础。然而，传统的病原体分离、 培养等诊断方法不能完全满足临床治疗和疾病控制的需要。新发展的传染病诊断技术可有效弥补传统方法的不足。,传统检测方法,乙型病毒性肝炎的病原学检查及其意义,电镜下，HBV感染者血清中存在三种形式的颗粒： 1.小球形颗粒：直径15-25nm，数量最多 2.管形颗粒：直径22nm，长50-230nm 3.大球形
2、颗粒：直径42nm，量少，完整颗粒，有传染性,仅由HBsAg构成的空心颗粒，无核酸、无传染性,生物学特征,大球形颗粒是完整的乙型肝炎病毒（HBV）颗粒，又称Dane颗粒，分为包膜和核心两部分,包膜：含HBsAg、糖蛋白与细胞脂质,核心：含环状双股DNA、DNAP、HBcAg和HBeAg，是病毒复制的主体,HBsAg,HBeAg,DNA,DNA-P,HBcAg,Dane颗粒,生物学特征,HBV基因组又称HBV DNA,环状部分双股DNA,全长2182bp 长的负链（L） 分S、C、P、X区 重叠，高利用率 短的正链（S） 长度可变（50-80%）,生物学特征,HBV基因组结构 编码,pre-S1
3、 pre-S1蛋白 pre-S2 pre-S2蛋白 S HBsAg pre-C HBeAg C HBcAg P DNAP X HBxAg,生物学特征,生物学特征,生物学特征,生物学特征,开放读码框架（ORF）及编码蛋白,S区 前S1区：前S1蛋白（pre-S1） 阳性提示HBV存在和复制，慢性化 前S2区：前S2蛋白（pre-S2） 阳性提示HBV复制 S区：HBsAg：感染标志 属决定簇“a”亚型决定簇“d/y”和“w/r”,C区 前C基因：HBeAg：阳性提示患者高感染低应答率 C基因：HBcAg：免疫原性强,生物学特征,开放读码框架（ORF）及编码蛋白,P区 最长，编码多种功能蛋白，参与
4、HBV复制 DNA多聚酶：复制的主要酶体，有逆转录功能 RNA酶H,X区 HBxAg ：具反式激活作用，在HCC发生中起重 要作用,生物学特征,乙肝五项检查是用来判断是否感染乙肝，粗略估计病毒复制水平的初步检查，虽然项目少，检查简单，但是意义非常重要。,乙肝五项检查分别是：1.表面抗原(HBsAg) 2.表面抗体(抗HBs) 3.抗原(HBeAg) 4.抗体(抗HBe) 5.核心抗体(抗HBc） 乙肝五项又叫乙肝两对半。,病原学检查,乙型肝炎病毒血清学检测临床意义,乙肝五项的检测包括定性检测和定量检测；,定量检测方法包括：化学发光免疫分析法（CLIA）、电化学发光免疫分析法、时间分辨荧光分析法
5、（TRFIA）、放射免疫分析法（RIA）、微粒子酶免分析（MEIA）等,定性检测包括酶联免疫分析法（ELISA）、乳胶分析法、金标快速法等。,病原学检查,1.乙肝五项定量检查可以动态观察疗效和对乙肝病情进行监测。 乙肝五项定量检查分析HBSAg和HBsAb浓度的变化，可以预见急性乙肝是不是处在恢复期。 乙肝五项定量检查分析HBeAg和HBeAb浓度的变化，可以反映病情变化和治疗作用。 HBcAb浓度的高低能够反映病毒感染的状况，高浓度的HBcAb提示乙肝急性感染;低浓度通常为恢复期或既往感染，有利于对慢性肝炎活动性和非活动性的判断，可以用于慢性乙肝的分类。,病原学检查,2.乙肝五项定量检查分析
6、能够对抗体是不是真正具有中和HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。 HBsAb的含量在10 mIU/ml以上的患者在用酶联免疫吸附剂（ELISA）检测查就可呈HBsAb阳性结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在 10 mIU/ml-100 mIU/ml之间的样本，定性虽为阳性，但此时机体对乙肝病毒的免疫能力较弱，甚至不能预防HBV感染，仍然有感染HBV的危险。作为定量检查，依据 HBsAb的含量能够判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果。,病原学检查,放射免疫技术,优点： 1.是一项较为成熟的诊断技术，其夹心法、竞争法的标记原理为以后的检测技术的发展
7、奠定了基础。 2.其精度可达10-12mol/L。,缺点： 1.使用的放射性物质（125I）对环境造成了污染 2.对操作者的身体健康造成了危害； 3.试剂有效期短，试剂盒的批间、批内变异较大，标准曲线有效期短，必须每次定标，造成浪费； 4.该法操作繁琐，出报告时间长。,病原学检查,优点： 1.在于该法避免对环境和人体的危害； 2.操作简便并且有效期较长。,缺点： 1.由于该法酶的纯度和反应过程容易受环境因素影像，导致其稳定性不好； 2.该法灵敏度、重复性不及放射免疫技术，精度为10-9mol/L，易造成漏检和假阳性。,酶联免疫分析法（ELISA）,病原学检查,化学发光法,优点： 1.单个样本检
8、测速度快，适合做急诊； 2.灵敏度较高，精度可达10-15mol/L 3.自动化程度高。,缺点： 1.该法发光过程短，样品不能重复检测2.本底较高，在超微量分析及早期诊断方面能力不足 3.试剂价格较高,病原学检查,时间分辨荧光免疫法,技术特异性高，线性范围更宽； 可以反复检测，并且其重复性、稳定性好 ， 试剂保质期至少1a，标准曲线保留时间长，同一批次试剂只需做一条标准曲线即可， 其精度可达10-18mol/L， 其定量结果更是肝移植、乙肝疫苗接种疗效观察等临床必须的检查。,病原学检查,临床上采用定量测定乙肝五项指标更能准确的反应乙型肝炎临床变化，以及乙肝患者的治疗，预后情况。现在临床医生对乙
9、肝五项定量测定已经有了普遍的认识，也越来越被患者接受。,病原学检查,HBV DNA 是病毒复制和传染性的直接标志。目前常用聚合酶链反应（PCR）。,聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。,病原学检查,HBV-DNA定量检查就是检验乙肝病毒在血液中的含量。通过乙肝病毒含量的检测，可以了解患者体内的病毒含量，病情发展状况，对患者的治疗有很好的指导作用。,病原学检查,HBV-DNA定量检查的正常值是1000cps/ml。 当HBV-DNA定量检查值小于1000cps/ml时，表明体
10、内HBV-DNA为阴性，传染力弱。 当HBV-DNA定量检查值大于1000cps/ml时，表明体内HBV-DNA为阳性，病毒仍然较多，传染力强。,病毒的数量与某些药物的疗效相关。例如，干扰素治疗对肝炎病毒高拷贝者不敏感，低拷贝者敏感；而有些药物则具有显著降低病毒高拷贝的作用。,病原学检查,乙型肝炎病毒前1抗原,乙型肝炎病毒前1抗原（PreS1-Ag）是存在于均有传染性的完整Dane颗粒和管型颗粒上最外端的外膜蛋白，前S1蛋白（抗原）在病毒侵入肝细胞过程中起重要作用。 国内报道部分HBeAg阴性患者仍有病毒复制，而前S1抗原可作为HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝细胞损害的一项指标。作为HBV感染
11、、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后的一个重要标志，在多数医院广泛开展，但其临床价值仍没有被充分认识。,病原学检查,国内外对前蛋白/抗前蛋白临床意义的基本共识 一 前蛋白 前1病毒蛋白出现在急性 HBV 感染的最早期，是病毒 清除的最早迹象。 前 1 病毒蛋白持续存在者将发展至慢性肝炎。 前1 病毒蛋白与HBV-DNA, HBeAg 高度相关。与肝内 HBV-DNA, HBcAg 检出高度相关。 在抗 HBe(+) 的 HBV 感染者中，检出前1蛋白 可表明病毒的复制。,病原学检查,病毒附着于肝细胞膜上，最重要的介导部位是前1 蛋白的 氨基酸 (AA) 21-47片段。变异的病毒只要这 一区段完好
12、就有传染性。仅仅是对 (AA) 21-47 肽的 前1抗体才能中和病毒。 前 S1 蛋白颗粒表面具有高度的免疫原性，常作为 乙肝疫苗的主要成分。 前 S1 抗原主要存在于血清中完整 HBV 表面。,病原学检查,PreS1抗原试剂盒的临床应用,1. 对拟查“二对半”的患者，同时加查PreS1， 可起到确诊与补充的作用，如感染与复制、 急性与慢性、预后与疗效等； 2. 非肝炎住院病人常规检测，PreS1 比“二对 半” 更有意义； 3. 献血员筛查，检测前S1可减少乙肝病毒感染 者漏检； 4. 创伤性检查病员应检测PreS1，如内窥镜检 查、 牙科手术等。,病原学检查,乙型肝炎病毒血清学检测的临床
13、意义,乙肝大蛋白,HBV 表面抗原通过启动子表达后，会产生大蛋白（HBV-LP）、中蛋白（HBV-MP）以及小蛋白（HBV-SP）三类产物;HBV-LP氨基酸序列中包括Pre-S1、Pre-S2和S部分； 产物中蛋白和产物小蛋白形式主要为小球型病毒颗粒，其余两种病毒颗粒（管形颗粒、Dane颗粒）则是由三类产物共同组成，且Dane颗粒的组成取决于HBV-LP。因此HBV-LP被认为是一种能反映HBV 复制和Dane颗粒存在的标记物。,病原学检查,病原学检查,HBV-LP有直接的肝细胞毒性，致使肝细胞凋亡而快速死亡。,HBV-LP对HBV复制过程有反式激活作用，并与病毒颗粒从细胞内释放调节有关。,
14、所以，检测HBV-LP用于临床判断体内HBV 复制和治疗预后有一定意义。,病原学检查,病毒性肝炎丙肝,丙型肝炎（HC）是一种对人类危害重大的疾病，HCV感染的慢性化发生率明显高于乙型肝炎，较乙型肝炎易早期出现肝硬化、HCC，因此，HCV的检测对丙型肝炎病毒感染的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义。到目前为止 ,丙型肝炎检测技术主要有抗 - HCV检测、HCV - RNA核酸扩增检测、HCV基因分型、HCV核心抗原的检测以及同时检测抗 - HCV和 HCV核心抗原等。,抗 - HCV的检测 抗 - HCV的检测（化学发光免疫分析法CIA，或者酶免疫法EIA）是最早出现的 HCV检测技术 , 可用
15、于HCV感染者的筛查。快速诊断测试(RDTs)可以被用来初步筛查抗 HCV，对于抗体阳性者，应进一步进行HCV RNA检测。 然而，对于免疫功能不正常的 HCV感染者 ,则不能检出抗 - HCV。另外 ,由于“窗口期 ”的存在 ,仍有一定的漏检率 。对于抗 - HCV的检测 ,目前仍有改进的潜力。 HCV抗原的检测 在缺乏HCV RNA检测条件时，可考虑进行HCV核心抗原的检测，用于慢性HCV感染者的实验室诊断。,HCV - RNA核酸扩增检测技术 (NAT) HCV-RNA是HCV感染、传染性和病毒复制的标志 HCV-RNA水平直接代表患者病毒血症水平 HCV-RNA检测可将窗口期由6-8周缩短至12天 HCV-RNA检测是丙肝早期筛查、诊断和治疗管理最关键的指标 准确的HCV-RNA检测是应答指导治疗策略的保障，可以帮助医生确定停药终点，进而提高治愈率,HCV基因分型 HCV基因分型的方法有分子生物学和血清学两大类，前者包括DNA测序法、特异型引物扩增法、基因芯片、探针杂交等，后者是合成HCV特异性多肽来检测其特异性的抗体从而区分基因型，HCV基因分型应当在抗病毒治疗前进行。 HCV基因型与肝病严重程度有着密切关系，并且对抗病毒治疗产生很大影响。因此，HCV基因分型检测可为HCV感染者的诊断和治疗提供重要的科学依据。 HCV1b和2a在中国各地较为常见
