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1、石河子大学 硕士学位论文 瓜尔豆花药离体培养研究 姓名：孙爱新 申请学位级别：硕士 专业：蔬菜学 指导教师：傅振清;吕国华 20040520 f “可F 人学2 0 0 4 届硕十学位论文姓名：孙爱自i论文名称：瓜尔显化曲离体培养研究 瓜尔豆花药离体培养研究 姓名：孙爱新( 蔬菜学) 导师姓名：傅振清( 教授) 、吕国华( 教授) 摘要 关于瓜尔豆花药培养国内外尚无相关报道。鉴于此情况，本文着重研究了瓜尔 豆花药培养过程中小孢子发育时期、供体植株基因型和生长环境、培养基成分、预 处理和接种密度等因素对愈伤组织形成的影响，并对愈伤组织诱导再分化。纤了初 探，以期为后期试验奠定坚实的理论和实践基础
2、。 合适的小孢子发育时期是花药培养成功开始的关键。本文通过研究确定花蕾纵 径作为瓜尔豆小孢子发育时期的判断指标；花蕾横径和纵横径比作为辅助指标。研 究中还发现，瓜尔豆同一花序上各花蕾的小孢子发育时期不同，相邻花蕾的小孢子 发育时期存在差异。随后的试验表明小孢子发育处于单核前中期的花药较容易形成 愈伤组织。 关于大豆的花药培养已经有许多报道。借用大豆花药培养成功的培养基进行了 瓜尔豆花药培养，结果表明M B l 和S A C 3 较适合瓜尔豆花药培养。 将花蕾先在1 2 低温下预处理2 4 h 后再接种培养，有利于花药愈伤组织高诱导 率的获得。N A A 和2 ，4 一D 都利于瓜尔豆花药愈伤组
3、织的形成，其中N A A 效果优于 2 ，4 一D ，I B A 的作用不明显。2 , 4 一D 在低浓度时促进愈伤组织形成，但高浓度( 8 0 m g L ) 时愈伤组织诱导率呈明显的下降趋势。N A A 在4 O 8 0 m g L 范围都有利于愈伤组织 形成，但此范围内差异不显著。蔗糖和葡萄糖对瓜尔豆花药培养愈伤组织形成都有 促进作用，但蔗糖效果优于葡萄糖，且以7 0 8 0 9 L 效果最好。 大田花药较温室花药易于形成愈伤组织。在供试的五个基因型中，以S U B 3 和 S U B 5 愈伤组织诱导率高于其它品系。 花药接种密度为3 0 枚时，花药愈伤组织诱导率较高于其它接种密度；p
4、 H 值 5 3 左右较合适；培养容器以三角瓶( 5 0 m 1 ) 和试管( 1 5 1 0 0 m m ) 对愈伤组织的 诱导较好，培养基中添加活性碳在0 0 4 9 L 的范围内对花药愈伤组织形成有促进 作用，当超过此浓度后，反而抑制了愈伤组织的形成。 瓜尔豆花药愈伤组织分化研究中发现B A 效果优于K T 。但是B A 诱导出的绿色 芽点却无法继续培养。有关这方面的研究尚须进一步深入。 关键饲：瓜尔U L ( C y a m o p s 妇t e t r a g o n o l o b a ( L ) T a u b ) ；花药培养；愈伤组织诱导：芽 论文类型：B ( 应用研究) 1
5、l 河j + 人学2 0 0 4 腾硕士学何论上姓名：孙爱新沦文名称：瓜尔豆花曲离佛= 培养研究 S t u d y o nt h eA n t h e rC u l t u r eo fG u a r G R A D U A T E ：S U NA i x i n g P R O F E S S E R ：F UZ h e n q i n g ；L 0G u o h u a A b s t r a c t ：I nt h i sp a p e rm a n yf a c t o r ss u c ha sc y t o l o g i c a l p e r i o d o fm i c r
6、 o s p o r e ， p r e t r e a t m e n t ，c u l t u r em e d i u m ，g e n o t y p e ，s u g a r , v e s s e la n dg r o w i n ge n v i r o n m e n to fp l a n t w e r es t u d i e d ，w h i c hi n f l u e n c ec a l l u si n d u c t i o no na n t h e rc u l t u r eo fg u a r ( a m 印s i s t e t r a g o n
7、 o l o b a ( L ) T a u b ) + A n dr e d i f f e r e n t i a t i o n o fg u a ra n t h e rc a l l u sw a ss t u d i e d e l e m e n t a r i l y I ti si m p o r t a n tf o ra n t h e rc u l t u r et h a tc y t o l o g i c a lp e r i o do fm i c r o s p o r e I nt h i st r a i lr e s u l t s s h o w e
8、dt h a tc y t o l o g i c a lp e r i o do fm i c r o s p o r ec o u l db ed e c i d e db yl e n g t ho fb u d ，a n d w i d t ha n ds p e c i f i cv a l u eo fl e n g t ha n dw i d t hw e r eh e l p f u lt om a k et h es e l e c t i o n I n a d d i t i o n ，t h e r ew a sd i f f e r e n tc y t o l o
9、g i c a lp e r i o do fm i c r o s p o r eo nf l o w e rb u d sg r o w i n go n a s s o r t e dp l a c eo nas a m ei n f l o r e s c e n c e A n o t h e rt r a i ls h o w e dt h a tc a l l u sc a nb ei n d u c e d e a s i l yo na n t h e r i nm o n o n u c l e a rp r o p h a s e T h e r ew e r em a
10、n yr e p o r t sa b o u ta n t h e rc u l t u r eo fs o y b e a n B a s i n go nt h e s ee x p e r i m e n t s ， t h ee f f e c to fc u l t u r em e d i u mW a Ss m d i e d ；r e s u l t ss h o w e dt h a tM B la n dS A C 3w e r eg o o d c u l t u r em e d i u mo na n t h e rc u l t u r eo fg u a r P
11、 r e t r e a t i n go nf l o w e rb u db e f o r ei n o c u l a t i n gw a sh e l p f u lo nc a l l u si n d u c t i o no fg u a r T h ee f f e c to f N A Aa n d2 4 Do nc a l l u si n d u c t i o no fg u a ra n t h e rw a sp o s i t i v ea n dt h a to f N A Aw a sh i g h e rt h a n2 ，4 - D ，t h a to
12、 f I B AW a sn o to b v i o u s T h e r eW a sap o s i t i v ee f f e c to n c a l l u si n d u c t i o no fg u a ra n t h e rw h e n2 ，4 - Dc o n c e n t r a t i o nW a sl o w e r , b u tw h e ni tW a s h i g h e ri n d u c t i o nf r e q u e n c yd e c l i n ec l e a r l y E f f e c to fN A A o nc
13、 a l l u si n d u c t i o no fg u a r a n t h e rw a sa l S Op o s i t i v ew h e nc o n c e n t r a t i o nW a sb e t w e e n4 O 8 0 m e d L E f f e c t so f s u c r o s ea n dg l u c o s eo nc a l l u si n d u c t i o no fg u a ra n t h e rw e r ep o s i t i v e ，t h a to fs u e r o s ew a s h i g
14、 h e rt h a ng l u c o s e ，a n dt h a to fs u c r o s ew a sh i g h e s tw h e nc o n c e n t r a t i o nw a sb e t w e e n 7 0 8 0 9 L T h ec a l l u si n d u c t i o nf r e q u e n c yo fS U B 3a n dS U B 5w a sh i g h e rt h a no t h e re l s e A n d c a l l u sc o u l de a s i l yb ei n d u c e
15、 do na n t h e rg r o w i n gi no p e nf i e l dt h a ni ng r e e n h o u s e I tC a r lg e th i g h e rc a l l u si n d u c t i o nf r e q u e n c yw h e nn u m b e ro fa n t h e r si n o c u l a t e dp e r v e s s e lw a s3 0a n dp HW a s5 3 A n dt h ee f f e c t so ft r i a n g l eb o t t l ea n
16、dt e s tt u b eo nc a l l u s i n d u c t i o no fg u a ra n t h e rw e r eh i g h e rt h a nP e t r id i s h A c t i v ec a r b o na l s oh a dap o s i t i V e e f f e c to nc a l l u si n d u c t i o no fg u a ra n t h e rw h e ni t sc o n c e n t r a t i o nw a sb e t w e e nO 0 4 9 L b u ti f t h ec o n c e n t r a t i o nW a sh i g h e rt h a n0 4 9 Lt h ee f f e c td e c l i n e T h ee f f e c to fB AO I lr e d i f f e r e n
