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1、体细胞免疫治疗联合肿瘤常规治疗的基本原则,中山大学肿瘤防治中心 夏建川,一、肿瘤体细胞免疫治疗,向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞（包括特异性或非特异性），直接杀伤肿瘤细胞或激发机体抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗肿瘤的目的，这一过程称为体细胞免疫治疗。 大量研究表明，肿瘤患者的外周血中存在癌细胞，是引发肿瘤复发转移、导致患者死亡的重要原因之一。有效清除血循环中的癌细胞，对抑制肿瘤的复发和转移，改善肿瘤晚期患者的生存质量具有重要的作用。,体细胞免疫治疗的过程,（一）自体树突状细胞疫苗（DC 细胞）； （二）自体细胞因子诱导的杀伤细胞 （CIK 细胞）； （三）自体树突状细胞（DC）刺激CIK细
2、胞（DC-CIK 细胞） （四）自体自然杀伤细胞（NK 细胞）； （五）经基因修饰的自体DC细胞激活T淋巴细胞（DC-T细胞） （六）自体链式CIK巴细胞（Capri 细胞）,目前临床上常用几种体细胞免疫治疗,（一）树突状细胞疫苗,DC 是人体内功能最强大的抗原提呈细胞，通过对肿瘤抗原的摄取及抗原提呈，可有效地诱导及活化免疫效应细胞，从而产生强大的抗肿瘤特异性免疫。,Immature Dendritic Cell (Periphery),Mature Dendritic Cell (Lymphoid),Antigen capture and processing,树突状细胞激刺激T淋巴细胞 转
3、化成效应细胞,几种DC肿瘤疫苗制备流程,如何获得高纯度的肿瘤抗原？,树突状细胞在抗肿瘤免疫中发挥重要作用,2010.4.29 美国食品药品管理局批准 Provenge (sipuleucel-T)，作为一种治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性细胞，这标志着癌症进入一种新的治疗：自身免疫活性细胞治疗。 Provenge诱导作用是通过抗原提呈细胞(APCs)负载前列腺癌酸性磷酸酶（PAP）抗原，继而激活肿瘤特异的CD8+T细胞，诱导抗前列腺癌免疫应答。这是FDA首次批准的自体免疫细胞用于治疗肿瘤。,发病率高,病情进展 缓慢,肿瘤相关 抗原表达,化疗疗效 有限,“非必需” 组织,前列腺癌细胞免疫治疗获得成
4、功的原因,PSA、PAP等,内分泌治疗无效的患者，此时肿瘤负荷较小，机体具有一定的抗肿瘤能力,Nat Rev Immunol. 2010, 10: 580-593.,Provenge疫苗治疗晚期前列腺癌的机制,受试者：512名 总体生存期：对照组 21.7个月，治疗组25.8个月。 3年存活率： 治疗组 32% ，对照组只有23%。 副作用：主要是发烧、发冷、疲劳和疼痛。,治疗结果,2011年诺贝尔生理学或医学奖,Bruce A. Beutler Jules A. Hoffmann Ralph M. Steinman,2011年诺贝尔生理学或医学奖揭晓，美国、法国三位科学家因在免疫学方面的发现
5、获奖。其中一半的奖金归于Bruce A. Beutler和Jules A. Hoffmann，获奖理由是在“Toll样受体和先天免疫激活方面的发现”；另一半奖金归于Ralph M. Steinman，获奖理由是“发现树突状细胞及其在获得性免疫中的作用”。 美籍科学家比尤特勒和卢森堡籍科学家霍夫曼是因为发现“Toll样受体（Toll-like Receptors，TLRs）及其配体”获得2011年诺贝尔生理学或医学奖,DC疫苗的制备,抽取骨髓30ml BMDC,GM-CSF, IL-4, TNF,成熟的DC,培养68 days,TNF, IL-4 GM-CSF,加肿瘤抗原,抽病人60ml-80m
6、l外周血（或上血细胞分离机）,树突状细胞疫苗在实体瘤 治疗中的策略（1）,从外周血或骨髓中分离单个核细胞，体外诱导DC细胞,负载肿瘤抗原的DC细胞，通过静脉回输给病人或经皮下注射（至少8次）,经肿瘤抗原负载DC细胞能刺激自体T细胞,产生强烈的抗肿瘤免疫应答。,常规治疗尽可能使肿瘤负荷降低,树突状细胞疫苗在实体瘤 治疗中的策略（2）,负载肿瘤抗原的成熟DC与自体的淋巴细胞混合，刺激自体T细胞产生细胞毒性T淋巴细胞,将这些细胞毒性T淋巴细胞通过静脉回输给病人（至少4次）,直接杀伤肿瘤肿瘤细胞,常规治疗尽可能使肿瘤负荷降低,从外周血或骨髓中分离单个核细胞，体外诱导DC细胞,从手术后肾癌组织中分离纯化
7、肾癌细胞,未纯化的人肾癌细胞,纯化后的肾癌细胞,贴壁生长的肾癌细胞,（六）链式CIK细胞的制备,激活的淋巴细胞,淋巴细胞,自体链式CIK细胞（CAPRI 细胞）,PBMNC （80-100ml外周血 或上血细胞分离机）,共培养,细胞激活因子1,第一次激活,细胞激活因子2,第二次激活,细胞激活因子3,负载CEA 抗原的DC刺激的T淋巴细胞的表型,一些抗原与肿瘤的发生发展密切相关,Viral antigens: Primary hepatic carcinoma: Hepatitis B virus, Hepatitis C virus Cervical cancer : Human papill
8、omavirus: E6, E7. 2. Self-antigens: Lung cancer: k19, Her-2/neu, etc. Primary hepatic carcinoma: -FP. Breast cancer: Her-2/neu, BA46, etc. Prostate cancer: PSA, PSMA,PAP,自体DC-T淋巴细胞在恶性肿瘤 治疗中的策略,体外诱导DC-T淋巴细胞,回输DC-T淋巴细胞给的患者（两周一次，至少4次）,特异性杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤的复发和转移,常规治疗尽可能使肿瘤负荷降低,前列腺癌,患者，男，年龄：68岁 2007年4月，常规体检时，发
9、现PSA显著升高，100ng/L穿刺活检提示：前列腺癌，Gleason评分：10分。胸部CT: 未见异常。 行内分泌治疗：诺雷德 Zoladex（goserelin）+康士得/Casodex （Bicalutamide）。PSA迅速下降，9个月后降至0.2以下，继续维持9个月后，选择了间断治疗（停用这两种药物），PSA迅速上升，6个月后升至16，继续内分泌治疗，PSA迅速降至0.16，以后就逐步上升，倍增时间1416周。自2010年9月开始出现全身骨痛，以左髋部明显，胸腹部CT：椎体及髂骨广泛转移灶， 全身骨扫描：中轴骨广泛转移。左髋臼及多处肋骨转移。 2011.2-13: PSA: 1376
10、 ng/ml ， 2011.3-28开始进行生物治疗，回输两次DCT，2011.4.25 PSA: 737 ng/ml，2011.5.25回输四次DCT（负载PSA抗原的DC刺激的自体T淋巴细胞）,一星期后检测 PSA 561 ng/ml。现在患者感觉精神改善，无明显副反应。生活能够完全自理，能够自由下床活动，左髋部不适改善，疼痛不明显，无需止痛药物。饮食可，精神可。,DCT 细胞免疫治疗,用负载前列腺癌细胞高表达抗原PSA和PSMA负载自体DC刺激的自体T淋巴细胞对前列腺癌患者治疗后，外周血中PSA水平明显下降,PSA: 1376 ng/ml,PSA 561 ng/ml,（三）CIK细胞治疗
11、肿瘤,“CIK细胞” 是将人的外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗CD3McAb, IL-2, IFN-, IL-1等）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。 在这群细胞中，CD3+CD56+细胞被证明是CIK细胞群中的主要效应细胞，这群细胞兼具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特性，在临床上具有强大的广谱抗瘤活性。,自体CIK细胞的制备,PBMNC 0.5-3107（抽患者50-60ml 外周血）,24 个175cm的培养瓶,IFN Il-2 CD3 mAb IL 1,12-14 days 11.51010,经淋巴细胞亚群检测，CIK细胞的中CD3CD56双阳性
12、细胞的数量达到42.35%，,CIK细胞杀伤肿瘤细胞机制,（四）自体DC细胞激活的CIK细胞,通过体外诱导有活性的自体DC细胞，将这种DC细胞与自体CIK细胞共培养，产生一种的抗肿瘤的免疫效应细胞（DC-CIK细胞），研究表明，DC-CIK细胞能大量促进INF-的分泌，提高细胞毒性，增强对肿瘤细胞的杀伤作用。,自体DC-CIK 细胞的制备,CIK细胞,成熟DC细胞,DC细胞刺激的CIK细胞（ 11.51010 ）,PBMNC 0.5-3107（抽患者50-60ml外周血）,共培养,TNF, IL-4 GM-CSF,IFN Il-2 CD3 mAb IL 1,DC刺激的自体CIK细胞的表型,自体
13、CIK、DC-CIK在临床肿瘤 治疗中的策略,常规治疗尽可能使肿瘤负荷降低,体外制备CIK或DC-CIK细胞 （1x1010以上）,回输CIK或DC-CIK细胞给患者（两周一次，至少4次）,杀伤残留的肿瘤细胞，抑制肿瘤的复发和转移,（五）自然杀伤细胞,自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）来源于造血细胞，其发育成熟依赖骨髓及胸腺微环境，是机体重要的免疫细胞，与抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关。 NK细胞其无须预先接触抗原即可杀伤靶细胞(如病毒感染的宿主细胞和肿瘤细胞)，由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制，因此称为自然杀伤活性，其在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要
14、作用。,自体自然杀伤细胞（NK cells）,PBMNC （30-40ml 外周血）,68个175cm的培养瓶,诱导NK培养试剂 IL-2,NK细胞数量可达 23109,培养12-14天,NK细胞的表型是以CD56阳性为主的细胞群,自体NK细胞的治疗策略,体外诱导NK细胞,回输NK细胞给患者（两周一次，至少4次）,回输的NK细胞能提高机体免疫功能,杀伤残留的肿瘤细胞，抑制肿瘤的复发和转移,常规治疗尽可能使肿瘤负荷降低,根据不同肿瘤的生物学特性（肿瘤类型、分期和肿瘤的免疫源性）、患者的遗传背景（是否具有家族倾向？）、目前的病情状况（体质，免疫状况）、前期治疗方法、年龄等，在常规治疗的基础上，制定
15、出适合病人的个体化体细胞免疫治疗方案。,二、制定适合病人的个体化体细胞免疫治疗方案,（一）针对老年肿瘤晚期患者，体质弱、免疫功能极度低下采取抽少量血多次回输的治疗方案,抽血30-40ml外周血,第1天,第3次CIK回输,第2次CIK回输,第4天,第8天,第12天,第14天,第16天,开始下一个疗程的治疗,第1次CIK回输,(二）化疗联合细胞治疗的增效方案,化疗前1天抽血50ml，进行CIK或D-CIK免疫细胞培养,第一周,第二周,7天,开始化疗,第2次开始化疗,回输CIK或D-CIK等细胞,化疗前1天抽血50ml，进行CIK或D-CIK免疫细胞培养,（三）体细胞免疫治疗联合放疗的增效方案,放疗
16、前抽外周血50ml， 上午放疗前,放疗,放疗,放疗,两周后，当天放疗后回输免疫细胞,第2天 周二,第3天 周三,第1天 周一,第4天 周四,第6天 周六,第7天 周日,第5天 周五 回输培养的CIK、 NK、D-CIK等细胞,休息,休息,（四）抗肿瘤效应细胞交替使用方案,第二周D-CIK,第三周NK,第四周D-CIK,抽血30ml,回输NK,抽血50ml,抽血30ml，回输NK细胞,抽血50ml，回输D-CIK细胞,第五周NK,第六周D-CIK,回输D-CIK,第一周NK,（五）体细胞免疫治疗联合抗肿瘤的细胞因子，抗肿瘤抗体，生物分子靶向药物增强疗效的方案,Threshold for tumor regression,Immune stimulation/ inflammation,Spontane
