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1、生化与分析技术第 1 章生化实验室基本常识与常用技术第二章电泳技术第三章层析技术第四章光谱分析技术第五章生化制备技术生化与分析技术：是一门有关于生化实验常规技能以及仪器使用原理与正确的操作实验使用科学生化分析技术应用：渗透于生物学研究的所有的领域第 1 章 生化实验基本常识与常用技术一实验室：安全防护知识实验室安全常识：1 进入实验室要严格遵守实验室的规章制度，开工作时前应该了解木阀门即电阀所在处，离开实验室时将室内检查一遍，将木电开关关好，门窗锁好。2 使用电器设备（如烘箱，恒温水浴，离心机，电炉等）严防触电；决不可用湿手或在眼睛旁视时开关电阀和电器开关。检测电器设备是否漏电时应将手背轻轻触
2、及仪器的表面，凡是；漏电的仪器，一律不能用。3 使用浓酸，浓碱，必须小心操作，以防溅失。用吸管取这些试剂时，必须用吸球，决不可用嘴吸。若不慎溅到试验台上，必须及时用湿抹布擦洗干净。如触及皮肤，应立即治疗。4 使用可燃物，特别是易燃物（如乙醚酒精丙酮苯金属钠等）时，应该特别小心。不要大放在桌面上，更不应该放在靠经火焰上，只有在远离火源，或将火焰熄灭后，才可大量倾倒这类液体。低沸点的有机溶剂不准在火焰上直接加热，只能在浴上利用回流冷凝管加热或蒸馏。5 如果不慎倾出大量的易燃液体，应按照以下方法处理：（1）立即切断电源（2 ）打开窗户（3) 用湿布将其移到较大的容器里，用橡皮塞改好容器瓶。6 易燃和
3、易爆物质的残渣（如金属钠，白磷，火柴头）不得倒入污物桶 或水槽，应放入指定容器里。7 废液特别是强酸和强碱不能直接倒水槽， ，应先稀释后在导入水槽，再用大量的水冲洗水槽。实验室灭火方法：一旦失火后，切不可惊慌失措，应保持冷静，首先立即切断室内的电源，然后根据具体的情况积极正确的进行抢救和灭火，灭火的方法有：1 在可燃液体燃着时，应立即那开着火区一切可燃物，关闭通风器，防止扩大燃烧。若着火面积较小，可用石棉布，湿布，铁片，沙土覆盖，隔绝空气使之熄灭。覆盖时要轻，避免碰坏或打翻盛有易燃溶液。2 酒精即其他的可溶与水的液体着火时，可以用水灭火。3 汽油，甲醛，甲苯等有机溶剂着火时，应用石棉布，或沙土
4、扑灭。决不能用水，否者反而会扩大燃烧面积。4 金属钠着火时可用沙子盖在它的上面。5 导线着火时，不能用水或（二氧化碳灭火器） ，应用断开电源或用四氯化碳灭火器灭火。实验室急救1 受玻璃割破：首先必须检查伤口内无玻璃即金属物质碎片，然后用硼酸水洗，再涂碘酸红汞水，必要时用纱布包扎，若伤口较大或过深而大量出血，应在伤口的上部或上部扎紧止血，立即送往医院治疗。2 烫伤：一般用浓度为（90%95%）的酒精消毒后，涂上苦味软膏3 强碱（如氢氧化钠，氢氧化钾） ，钾，钠等触及皮肤而引起的灼伤，首先应用 5%碳酸氢钠溶液或氢氧化铵溶液洗涤（在用大量清水冲洗前，最好先用吸附性较强的纸将强酸溶液吸收）4 水银容
5、易有呼吸道进入人体，也可由皮肤进直接吸收而进行积累性中毒，严重中毒症状是口中有金属味，呼出的气体也有气味;流唾液，打哈欠时疼痛，牙床即嘴唇上有硫化汞的黑色，淋巴腺及唾液腺肿大。若不慎中毒，应送往医院急救，急性中毒时，通常使用碳粉，或呕吐剂彻底洗胃，或者食入蛋白（如一升牛奶加三个鸡蛋清)或蓖麻油解毒，并使之呕吐。5 强酸，溴等触及皮肤而致伤时应用大量清水清洗，自用 5%的硼酸或 2%的乙酸溶液洗涤6 酚触及到皮肤引起灼伤，可用酒精洗涤7 触电：触电时可按照下列方法之一切断电路， （1）关闭电源(2)用干木棍使导线与被害者分开(3)使被被害者与土地分开，受伤严重者应及时送往医院治疗，急救时急救者必
6、须防止触电的安全措施，手脚必须绝缘二实验室基本操作和实验常识1 玻璃仪器的的清洗新购买的玻璃仪器的清洗新购买的玻璃仪器表面常附有游离的碱性物质，可先用肥皂水（或去污粉）洗涮在用自来水清洗，然后浸泡在 1%-2%的盐酸溶液中（不少 4 小时） ，在用自来水冲洗，最后用蒸馏水洗涤，2-3 次后晾干，烘干2 使用过的玻璃仪器的使用 1 一般的玻璃仪器（试管，烧杯，锥形瓶量筒，先用水洗刷至无污物，再选用大小合适的毛刷蘸取去污粉或浸于肥皂水中将器皿内外细心的刷，用自来水洗净后，用蒸馏水冲洗后 2-3 次，倒置或至烘箱低温烘干，内壁不在有水珠为干净。凡洗净的玻璃器皿，不应在容器壁上带有水珠，否者表示未洗干
7、净量器(洗量管，滴定管，量筒）等使用后立即浸泡在(不能烘干） ，工作完毕用流水清洗出去附着的试剂，蛋白质等物质， （切记不可加热烘干）晾干后浸泡在铬酸 4-6 小时(或过夜） ，在用自来水充分洗涤，最后用自来水充分洗涤，最后用蒸馏水多洗 2-4 次，晾干备用，3 洗涤液的种类和配制方法（1） 铬酸洗液（重铬酸钾-硫酸洗液或简称洗液）广泛用于玻璃仪器洗涤。常用的配置方法有一下四种:（1）取 100ml 浓硫酸置于烧杯中，小心加热，然后慢慢加入 5g 重铬酸钾粉末，边加搅拌，待全部溶解后冷却，置于玻璃塞的细口瓶中（2 ）取 5g 重铬酸钾置于 150ml 的烧杯中，加入 5ml 水，尽量使其溶解，
8、慢慢加入浓硫酸 100ml，随加随搅拌，冷却后贮存备用（3）取 80g 重铬酸钾粉末置于 100ml 自来水中，慢慢加入工业硫酸 100ml（边加边用玻璃棒搅拌（4）取 200g 重铬酸钾粉末置于 500ml 自来水中，慢慢加入工业硫酸（边加边用玻璃棒搅拌）（2）浓盐酸（工业用）：可用于洗去水垢或某些无机盐沉淀（3）5%的草酸溶液，可用数滴硫酸酸化，可洗去高锰酸钾沉淀(4) 5_10%磷酸三钠溶液可洗涤油污物（5）30 %的硝酸溶液：洗涤二氧化碳测定仪器（6）酒精与浓硝酸混合液最适合于洗净滴定管（7 ）有机溶液如丙酮，乙醇，乙醚等可用于洗脱油脂，脂溶性染料，二甲苯可用于洗脱油漆污垢，肥皂水，有
9、机溶剂及少量油污皆会使重铬酸钾溶液变绿，洗涤效果降低（8 ）5%-10%的乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）加热煮沸洗涤蛋白质 （9）尿素洗涤剂：洗涤蛋白质（10 ）NaOH 的酒精溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液是两种强碱性的洗涤剂，对玻璃仪器的腐蚀性很强，清除内壁的污渍时间，洗涤时间不宜过长，要及时清洗用上述洗液前，应将玻璃仪器用水多次清洗，除废液，用软纸擦去凡士林或羊毛脂，以防4 搅拌和震荡（1 ）配制溶液时必须随时搅拌或震荡混合，配制完毕后必须充分搅拌或震荡混合（2）搅拌时的用的玻璃棒必须两头烧圆滑（3) 搅棒的粗细长短必须与容器的大小和所配溶液的多少成适当的比例关系，不能用长而粗的
10、玻璃棒去搅拌小离心管中的少量溶液(4)搅拌时尽量沿着器壁搅拌，不搅入空气，不使液体飞溅(5)震荡混合小离心管中液体时，可将离心管握于手中，以手腕，肩或肘作轴(6)容量瓶混合溶液时，应倒持容量瓶摇动，用食指或掌心顶住瓶塞并不时翻动容量瓶（用于精确配制溶液）(7)在分液漏斗中震荡液体时，应一手在适当倾斜下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，要不时的打开塞子放气。分液漏斗震荡液体时要一边震荡一边转塞子(8)研磨配制胶体溶液要单向研磨5 沉淀的过滤和洗涤（1） 过滤黏度小的沉淀一般要用滤纸（2）颗粒应根据沉淀的不同性质选择不同的滤纸。胶状沉淀应该用质松孔大的滤纸。一般大小形成结晶沉淀，应用致密孔较小的滤纸
11、。而极细的沉淀应该用致密孔最小的滤纸。滤纸越致密，过滤就越慢。（3）滤纸的大小应有沉淀的量来决定不应由溶液的体积来决定，沉淀量应装到滤纸高度的1/3 左右，最多不超过 1/2.通常使用直径为 1-9cm 的圆形滤纸（4）在容器里洗涤沉淀一般采用倾注法。洗涤时采用少量多次的方法最有效。通常容易洗涤的粗粒晶体沉淀洗 2-3 次，难洗的粘稠无定型沉淀则需洗 5-6 次。每次应尽量倾干水分以防止沉淀流失。（5）在漏斗中洗涤沉淀时，先将沉淀轻轻摊开在漏斗下部，再用吸管吸液加入漏斗上缘稍向下的地方，同时转动漏斗。*注：沉淀过滤和洗涤工作要一次完成，不可间断。通常洗去沉淀所吸收的不挥发物质约8-10 次6
12、实验室常识（1） 挪动干净玻璃仪器时，勿触摸仪器内部（2）量瓶是量器，不要用量瓶做盛器。量瓶等带有磨口的玻璃塞的仪器的塞子不要盖错。盖玻璃塞的玻璃仪器或玻璃瓶等暂时不能使用，要用纸条把瓶口和瓶塞隔开，洗净的仪器要放在架上或纱布上晾晒，不能用抹布擦。（3）不要用滤纸称量药品(要用硫酸纸)，更不能用滤纸做记录（4）不要用纸片覆盖烧瓶或锥形瓶等，不要用石蜡封闭精细药瓶的瓶口，以免掺混，不要用棉花代替木塞或橡胶塞堵瓶口或试管口。（5）标签纸的大小应该与容量瓶相称，或用大小相等的白纸，绝对不能用滤纸，标签上应写明物质的名称，规格，浓度，配制的日期及配制人。标签应贴咋试剂瓶或烧瓶的 2/3 处，试管等细长
13、容器应贴在上部。（6）使用铅笔写标记时，要在玻璃仪器的磨砂玻璃处。如果用玻璃铅笔，则写在玻璃仪器的光滑面，还有记录笔等其他的标记方式（坩埚：在棕黄色 FeCl3 在烧到 40-50 度的时候写上去。（7） 凡是发生烟雾，有毒气体和有臭味气体的实验均应该在通风橱里进行，橱门应紧闭，非必要时不能打开（8）取用试剂和标准溶液后应立即将瓶塞塞严，放回原处，未用勿倒回瓶内（9）天平，分光光度计，离心机应十分重视7 试剂的配制 壹 一般注意事项（1） 称量要精确，特别是在配制标准溶液和缓冲液时应该注意严格称量。有特殊要求的，要按照规定进行干燥提纯等。（2）一般溶液都应用蒸馏水或无离子水（即离子交换水）配制
14、，有特殊要求的除外。（3）化学试剂根据质量分为各种规格（如化学纯，分析纯） ，另外还有一些规格：如纯度很高的高谱纯，层析纯；纯度较低的工业用：药典纯等等、配制溶液时，应根据实验要求选择不同的规格的试剂。（4）试剂应根据需要量配制，一般不宜过多，以免挤压浪费，过期失效。（5）试剂（特别是液体）一经取出不能放回。试剂要用愿瓶塞塞紧，瓶塞不得沾染污物或沾污桌面。贰 一些常用术语（1) 溶质：可均匀分布在另一种介质的物质，称为溶质（2) 溶剂：使溶质质点均匀分布的介质，称为溶剂。（3) 溶液 ;（1 ）真溶液：溶质颗粒的直径小于 1*10-6mm 溶液里的溶质是以分子状态或离子状态均匀的分布在溶剂的分
15、子之间（2）乳浊液：由两种均匀的散布着但又互不相溶的液体微小珠滴组成的溶液直径大于 10-4mm悬浊液:在这种液体溶剂中间散布着固体的小颗粒，这些溶质颗粒直径大于1*10-4mm j 胶体溶液：直径大于溶液小于浊液直径在 1*10-6 至 1*10-4mm 之间（4)溶解：溶质均匀的分布在溶剂中溶解速度：在单位时间内，溶质的分子分布到溶剂里的量。受温度，压力，振动搅拌等影响。溶解热：1mol 溶质溶解时所放出的热量饱和溶液：在一定的温度；压力下，溶剂中所溶解的溶质已达到最大量的溶液叫饱和溶液。若溶质在溶剂中所溶解的量超于饱和溶液的量称不饱和溶液。半饱和溶液是溶质在溶剂中所溶解的量相当于饱和溶液
16、中该溶剂量的一半，在溶剂中溶质的量超于相应的饱和状态时，称为过饱和溶液。 （绝对不溶的物质是没有的，易溶，难溶，不溶是相对的）溶解度：在一定的条件下所能溶解的最大量。溶质克数一般规定在常温 120下某物种能溶解在 100g 水中的量，在 10g 以上称为易溶解物质；如果溶解的量小于 1g 则称难溶物质；若溶剂的量少于万分之一克，则称不溶解物质溶解浓度：在一定重量或一定体积的溶液中所含溶质的量，称为溶液的浓度。如百分浓度，摩尔浓度，和当量浓度叁 常用试剂表示方法重量/体积百分比浓度（w/v）指 100ml 溶液中所含溶质的克数，一般用于溶质为固体的溶液的配置 例 1%NaOH=1gNaOH 加水至 100ml重量/重量百分比浓度*（w/w）指 100g 溶液中所含溶质的克数，生产厂家生产液体酸.碱常用此法 例 10%H2SO4 200g=20gH2SO4+180gH2O体积/体积百分比浓度（v/v）指 100ml 溶液中所含溶质的数用于液体溶质 nt
