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1、Tumor-Infiltrating CD8 Lymphocytes Predict Clinical Outcome in Breast Cancer,肿瘤浸润CD8+淋巴细胞预测乳腺癌的临床预后,来源：JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY VOLUME 29 NUMBER 15 MAY 20 2011 IF：18.97 顾佳芸,背景,肿瘤抗原驱动肿瘤特异性获得免疫的应答。细胞毒性CD8+T淋巴细胞是其中的关键成员，它们攻击表面结合有I类主要组织相容性复合体的并表达肿瘤相关抗原肽的肿瘤细胞。 CD8+T细胞受肿瘤目标的刺激后产生干扰素r。 细胞周期的抑制、凋亡、血行停滞以
2、及诱导产生巨细胞肿瘤杀伤的现象都使干扰素r 依赖的杀伤肿瘤细胞的机制出现。 但是一旦肿瘤系统不能清除所有的肿瘤细胞，那么可以逃避免疫攻击的缺乏免疫原性的肿瘤就可能会出现。 炎症细胞或免疫细胞宿主保护与肿瘤促进作用的结合构成了肿瘤编辑这个概念【5】,【7】,【8】。,从鼠科动物上的研究清楚地表明：适应性免疫系统来源的细胞 执行监视和消除初期肿瘤的功能，这个过程被称为免疫监视【4】,【5】。 关于免疫监视的流行观点是：免疫编辑学说 其强调了一个概念：在肿瘤进展时，宿主免疫系统与肿瘤发展有一个互动的过程，这样的过程导致的结果是耐受免疫干预的肿瘤基因变异体会代替我们通常所熟悉的肿瘤细胞【8】，而这个机
3、制则导致了肿瘤免疫逃逸。 （鼠科动物乳腺癌细胞变异体发生免疫逃逸时很少会发出危险信号来激活免疫应答【49】。） 本文关于此的结论是，适应性免疫应答对抵抗肿瘤在阻止肿瘤复发方面承担重要任务，当肿瘤明显表达肿瘤相关物质（可能是抗原决定簇或是危险性号）时，炎症因子可能可以提供一个有效的避免肿瘤进展的适应性免疫反应。 此外，肿瘤仍存活并不受细胞毒性CD8+淋巴细胞出现的影响而继续生长这一事实显示了宿主免疫应答并不是完全成功和有效的，这可能是因为肿瘤有各种各样的机制来逃避免疫监视所造成的。,乳腺癌与细胞免疫应答,根据肿瘤浸润CD8+淋巴细胞能够显著提高结肠癌【11】,【12】、卵巢癌【13】,【14】食
4、管癌【15】、肾癌【16】、肺癌【17】和胰腺癌【18】病人的生存率而推断它们具有抗肿瘤活性 乳腺癌通常被炎症细胞浸润，尤其是巨噬细胞和T淋巴细胞, 它们可能扮演着一个细胞介导针对肿瘤的免疫应答的角色。而CD8+淋巴细胞是已知的细胞介导免疫中的重要一员。 浸润乳腺癌炎症细胞的潜在影响是众多且复杂的【19】,【20】。关于乳腺癌的主要研究主要依靠苏木精和伊红染色的切片和多变量分析，这些研究显示出炎症反应是较好【21】或较差【22】或无相关【23】于肿瘤的预后。但是，有证据证明这些炎症细胞通常是受损的【24】,【25】。实际上， 如果不能明确地定义参与每个过程的免疫细胞表型，那么对免疫系统促进还是
5、抵抗肿瘤的结论仍不能被解释【26】 。 在小部分患乳腺癌的患者中的淋巴细胞亚群已经被研究了【27-31】。然而，CD8+细胞毒性淋巴细胞的出现是否提供任何预后信息仍不十分明了。 因此，我们的目标是在大量的特点明确的患者（患有侵袭型乳腺癌并长期随访）中分析CD8+细胞毒性淋巴细胞密度与分布的影响，来探索肿瘤浸润CD8+细胞毒性淋巴细胞对乳腺癌的预后价值。,实验准备,志愿者选取,选择了1987 到 1998年诊断为乳腺癌的病人 这些患者都低于71岁(平均55岁)，并长期参与随访。 所有的患者都用一种统一的规范的方式进行治疗，并广泛研究了他们的蛋白表达【32】,【33】。 除了患者的个性特征（年龄、
6、家族史和绝经期）患者的病理特征，包括组织学分级【34】、组织学肿瘤类型【35】、肿瘤大小、淋巴结阶段、诺丁汉预后指标 Nottingham Prognostic Index (NPI),【36】和血管侵袭【37】进行了常规评估 。,所有的患者接受了标准手术治疗（乳房切除术或广泛局部切除术加放射疗法）。从1988年后，患者按照NPI分数和激素受体状态被有选择性地挑选出来进行全身佐剂疗法NPI3.4且ER+的接受他莫西芬（一种抗雌激素）（如果是绝经前患者使用戈舍瑞林 ），如果是ER-并适合和承受化疗的则用经典的环磷酰胺、甲氨蝶呤和氟二氧氟尿嘧啶 Breast cancerspecific surv
7、ival (BCSS)被定义为从初次手术治疗开始到死亡结束，之间所经历的时间（以年记）。,组织微阵列技术免疫组化染色,切下新鲜的4um乳腺癌TMAs（tissue microarrays），整个组织切面用鼠抗人单克隆抗体 (clone 1A5; 1:50 dilution; Vector Laboratories, Burlingame,CA).标准复合染色方法染色 抗原复得是用在10 mmol/L柠檬酸钠缓冲液 (pH 6.0)中用微波处理20分钟。 阳性质控用了石蜡保存的正常人扁桃体切片 阴性质控去除了抗体,CD8+T细胞定量方法,计数CD8 T细胞： Nikon Eclipse 80i
8、显微镜 一位技术员（对患者临床背景没有了解） 计数类型： 肿瘤细胞巢内 在远郊基质中 (定义为在肿瘤一个肿瘤细胞直径以外） 在邻近基质中 (定义为在肿瘤一个肿瘤细胞直径以内的 CD8+细胞 Fig 1E).,(E) 黑箭头为肿瘤内的CD8+细胞；红箭头为远郊CD8+T细胞；紫箭头为邻近CD8+细胞 (原始放大200倍).,结果,CD8+T淋巴细胞 浸润乳腺癌的密度与分布,(A), (B)是正常人类扁桃体组织，CD8+淋巴细胞主要分布在皮层周围区域 (A100; B 400) (C), (D)整个乳腺癌组织切面被CD8+细胞浸润 (C 100; D 400),1334个肿瘤标本中779 个(59
9、.5%)是非特殊型浸润性导管癌 ；219个(17%)是导管混合型； 39个(3%)是髓癌； 88个(7%)是经典小叶癌； 42 个(3.2%)是导管癌；43 个(3.3%)是小叶混合型 ；100 个(7%)是其他型。 CD8+T 细胞的分布在总数及各方面成正偏态分布 远郊肿瘤浸润CD8+T细胞的数量高于其他两类CD8细胞 (Table 1).,CD8+T细胞浸润与 临床病理参数关系,Table 2 是总体CD8+淋巴细胞密度与临床病理的变化因素的统计. CD8+淋巴细胞的总数与高肿瘤级别弱相关并与患者年龄、ER-a和PgR弱负相关；相同的统计结果也可以在肿瘤内和邻基质CD8+T细胞中发现 (d
10、ata not shown). 肿瘤内部以及邻近基质CD8+T细胞浸润与基底表型显著相关 (P0.001). 远郊基质CD8+T细胞的浸润表现出与高肿瘤级数弱相关 (rs0.06; P0.001).,病人预后的结果,探索组 (n656)中，总的CD8+淋巴细胞（即使只是一个邻近淋巴细胞阳性，一个肿瘤内淋巴细胞）阳性以及远郊基质CD8+淋巴细胞阳性的截止点是至少两个阳性细胞。这些患者的终期随访阶段平均是127个月（从4个月到243个月）（175名因乳腺癌死亡，261名复发），对这个组做单因素分析：总的CD8数量以及远郊基质CD8+数量与较长的BCSS显著相关(Figs 2A and 2B). A
11、图是总CD8+淋巴细胞；B图是远郊基质CD8+淋巴细胞,然而肿瘤内与邻近基质CD8+T细胞都不予患者生存率显著相关(Figs 2C and 2D). （C是肿瘤内部CD8+淋巴细胞；D是邻近CD8+淋巴细胞）,在一个包括了肿瘤体积、节点阶段、等级、导管浸润、HER2和ER状态、患者年龄以及辅助治疗等多因素模型的分析中，显示出了CD8+细胞毒性淋巴细胞数量增长独立相关于更长的BCSS (hazard ratio HR, 0.55; 95% CI, 0.39 to 0.78; P0.001;Table 3) 远郊基质CD8+T细胞在相同模型中体现了一个独立良好的预后价值 (HR, 0.50; 95
12、% CI, 0.37 to 0.68; P .001). 而肿瘤内或邻近基质的CD8+T细胞计数却都没有在COX模型中显著相关于病人的预后情况。,在验证组 (n678)中，运用相同的cutoff值后，总的CD8+T细胞计数（独立于肿瘤大小、分期、等级、血管侵袭和HER2状态）与较好的BCSS显著相关。(HR, 0.58; 95% CI, 0.41 to,乳腺癌亚型的生存分析,ER+的肿瘤中(n=911),浸润的CD8+细胞总数不显著相关于患者的预后，相反，CD8+计数在ER-肿瘤中(n=485)与较长的BCSS (log-rank test, 16.17; P0.001) 和较长的无病间歇期(
13、logrank test, 8.15; P=0.004)相关。 在HER2-患者中(n=106) CD8+细胞总数也有比较好的预后 (log-rank test, 4.19; P=0.041)，但在 HER2+患者中 (n =169)则没有。 在基底样肿瘤中 (n=261), CD8+细胞总数显著相关于较好的BCSS (log-rank test, 6.31; P=0.012),而非基底样肿瘤中则没有(n=991)。,讨论,对从1334名长期随访的患者获得的乳腺癌标本制成的组织芯片，进行免疫组化染色来评估肿瘤浸润CD8+细胞毒性淋巴细胞，其在肿瘤巢（肿瘤内）、肿瘤细胞邻近的基质中以及远离肿瘤细
14、胞的基质中的数量被记录下来。结果是：CD8+细胞的总量与肿瘤级别正相关(rs 0.20; P=0.001)并与患者的诊断年龄、雌激素受体-a (ER-a),以及黄体酮受体表达(PgR)负相关 (Mann-Whitney U test, P=0.001). 所有患者在进行单变量生存分析前被随机分成探索和验证的两群，CD8+淋巴细胞的总量与远离肿瘤细胞基质的CD8+淋巴细胞与更好的患者生存率相关 (P=0.041 、P0.001) 在探索与对照组的多变量分析中，CD8+T细胞总量都是一个独立的预测因子。 这些结果提示了肿瘤浸润CD8+T淋巴细胞是具有抗肿瘤活性的，因为它们可以有效提高患者的生存率并
15、可潜在地被用于乳腺癌的治疗。,在大量乳腺癌患者身上，肿瘤浸润CD8+淋巴细胞密度与临床结果的预后显著相关。并独立于标准诊断及预测因素：肿瘤级数、淋巴结进展阶段、肿瘤大小、静脉侵袭与HER2状态。 （这是第一篇大标本量研究预后与肿瘤浸润CD8+淋巴细胞的文章） 细胞介导的免疫应答在乳腺癌中扮演重要角色。 肿瘤可能因为不能产生足够多的危险信号而不能在早期激活免疫应答。大家普遍认为抗肿瘤免疫应答主要发生于滤过淋巴结中。 此文证明，这种应答也可发生在肿瘤区域,他们的结果证明：,总结,总而言之，他们的结果为用在乳腺癌中的细胞毒性T细胞群来诊断预后提供了依据 表明了细胞毒性T细胞对人类乳腺癌有显著的临床抗肿瘤功效（除免疫编辑以外） 虽然对乳腺癌免疫疗法的研究结果仍然是让人沮丧的，但是此文的结果为今后继续探索介入疗法提供了支持,
