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1、1.2 基因工程的基本操作程序,岳阳县一中高二生物备课组,第一课时,原核细胞的基因结构,原核细胞基因,原核细胞的基因结构,RNA聚合酶的作用是催化DNA转录为RNA。它能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并与DNA分子的一条链为模板合成RNA。,启动子与终止子,启动子是在非编码区内紧靠转录起点，调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列，它能引导RNA聚合酶与正确的基因部位结合，使转录从起点开始，沿编码区进行。 终止子是在非编码区内紧靠转录终点，调控遗传信息表达的脱氧核苷酸序列，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。,注意
2、：与起始密码、终止密码的区别,真核细胞的基因结构,真核细胞基因,真核细胞的基因结构,与原核细胞比较，真核细胞基因结构的主要特点是： 编码区是间隔的、不连续的。也就是说，能够编码蛋白质的序列被不能够编码蛋白质的序列分隔开来，成为一种断裂的形式。 其中，能够编码蛋白质的序列叫做外显子，一般不能够编码蛋白质的序列叫做内含子。,原核细胞与真核细胞的基因结构比较,非编码序列,基因工程的基本操作流程,第一步：获取目的基因,从基因文库中获取利用PCR技术扩增利用化学方法人工合成,1、基因组文库和部分基因文库,基因组文库,部分基因文库(如cDNA文库),将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体
3、中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。,cDNA合成过程,第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解，使之变成单链的DNA。第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。,基因组文库和部分基因文库,1.2 基因工程的基本操作程序,岳阳县一中高二生物备课组,第二课时,2、利用PCR技术扩增目的基因,原理:DNA双链复制前提:要有一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列，以便合成引物。,教材P9：寻根问底,3、利用化学方法人工合
4、成,如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可以通过DNA合成仪用化学方法直接合成。,真核细胞内的基因编码区含有不能表达的内含子，因此，不能用于基因的扩增和表达。获得真核细胞中目的基因时，一般用人工合成的方法。,第二步：构建表达载体（基因工程的核心）,表达载体的组成目的基因启动子终止子标记基因,教材P15：思考与探究T1,第三步：将目的基因导入受体细胞 （植物细胞）,农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法,教材P15：思考与探究T2,将目的基因导入受体细胞（动物细胞）,显微注射法,将目的基因导入受体细胞（微生物细胞）,Ca2+处理,教材P11：寻根问底,第四步：目的基因的检测与鉴定,检测:是否插入目的基因是否转录是否翻译鉴定:功能活性鉴定抗性鉴定,分别提取什么进行检测,归纳步骤,教材P15：思考与探究T3、T4,归纳: 基因工程的基本操作程序,获取目的基因从基因文库利用PCR化学方法人工合成构建基因表达载体目的基因、启动子、终止子、标记基因将目的基因导入受体细胞农杆菌转化法、显微注射法目的基因的检测与鉴定检测：是否插入、转录、翻译,基因操作的基本步骤,
