usp29-1116洁净室和其它受控环境的微生物评估中文稿

《usp29-1116洁净室和其它受控环境的微生物评估中文稿》由会员分享，可在线阅读，更多相关《usp29-1116洁净室和其它受控环境的微生物评估中文稿（17页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、1 洁净室和其他受控环境的微生物学评估 本章信息旨在综述与散装原料药、剂型以及某些医疗用具无菌操作相关的各种问题；并对控 制环境进行制定、保持和控制其微生物学特性。 本章包括的讨论有关以下方面：(1) 基于颗粒计数限制上的洁净室分级；(2)控制环境的微生 物学评估程序；(3) 人员培训；(4) 设计和实施微生物学评估程序中的关键因素；(5) 取样 策略的制定；(6) 建立微生物警告和行动标准；(7) 应用于微生物取样的方法学和仪器操作； (8) 培养基和稀释剂；(9) 微生物隔离群的鉴别；(10) 经培养基填充的操作评估；以及 (11) 词汇表。本章以外的讨论是有执照药房制备家用无菌产品应用控

2、制环境的问题，其包含在药 用配方无菌制备（Pharmaceutical CompoundingSterile Preparations）797 中。 对于无菌操作的控制环境中微生物状况的控制和评估存在方法选择性。本章中的数字评估并 非有意代表绝对的评估或规范，而仅是一种信息上的表示。考虑到微生物取样设备和方法的 多样性，不能说达到这些值就能保证微生物控制的需求标准，或者与本章这些值有偏差、高 于本章的值就认为是失去控制。微生物取样和分析应用不当，可能会引起显著的差异和不慎 污染的潜在性。本章标明的取样培养基、设备和方法，不是特定的规范而只是一种信息参考。 通过无菌操作可产生高比率的无菌产品。因

3、为无菌操作依赖的是流程中微生物的排除和阻止 包装过程中微生物进入敞口容器，制造环境中的微生物负担和产品的生物负担对于保证这些 产品的无菌水平来说，是相关的重要因素。 洁净室分级的确立 洁净室和控制环境的设计和构建，在联邦标准 209E 中被提及。此空气洁净标准通过空气播 散颗粒绝对浓度定义。其中包括用于控制环境空气级别分配和监测空气播散颗粒的方法。这 一联邦文件仅适用于控制环境内的空气播散颗粒，且并非有意的强调颗粒的活性与非活性属 性特征。 制药工业中的洁净室和其他控制环境的联邦标准 209E 已经被洁净室制造商所采用，以提供 这些设施的组装、试车和维护的规范。然而，制药工业中的有效数据并不能

4、给非活性颗粒数 量和活性微生物浓度之间的关系提供科学的一致性。 2 电子工业的非活性颗粒数量的关键程度使得应用联邦标准 209E 成为必需，虽然制药工业在 与联邦标准中特定的总颗粒相比较而言，更关心的是活性颗粒(即微生物) 。制药行业中对 注射制剂中的总颗粒数有明确规定。(见 注射品中的颗粒物质（Particulate Matter in Injections）788)。 洁净室的颗粒数越少，空气播散微生物的可能性越小。这一理论是经认可的，且能够为制药 生产商和洁净室及受控环境的建造者提供功能设施建造方面的工程学标准。 应用在制药工业的连邦标准 209E，是以所有颗粒大小的限定为依据的，即，大

5、小等于或大 于 0.5 m 的。 表1 描述了联邦标准 209E 适用于制药工业的空气播散颗粒洁净级别。制 药工业适用 M3.5 以及更高级别。M1 级别和 M3 级别相关于电子工业，表 1 所示仅为出 于比较目的。通常认为，假设不存在气流、温度和湿度的改变，则使用中的洁净室或其他控 制环境中存在的颗粒越少，操作条件下的微生物计数将会越少。 洁净室被维持在以动态的 (运作的)数据为根据的操作控制状态下。 表 1. 空气播散颗粒洁净级别* 级别名等于或大于 0.5 m 的颗粒 SIU.S.习惯(m3)(ft3) M1 10.00.283 M1.51 35.31.00 M2 1002.8 M2.5

6、10 35310.0 M3 1,00028.3 M3.5100 3,530100 M4 10,000283 M4.51,000 35,3001,000 M5 100,0002,830 M5.510,000 353,00010,000 M61,000,00028,300 M6.5100,000 3,530,000100,000 M7 10,000,000283,000 * 来自 U.S. 联邦标准 209E, 1992 年 9 月 11 日“洁净室及洁净区内空气播散颗粒洁 净级别。” 控制环境中微生物学评估程序的重要性 监测控制环境中总颗粒计数，甚至应用连续电子仪器计数，仍不能提供关于环境中微生

7、物含 量的信息。颗粒计数器的基本限制在于它们测量颗粒为 0.5 m 或者更大的。而空气播散微 3 生物并不是自由浮动的或是单细胞的，它们经常联合成 10 到 20 m 的颗粒。控制环境中的 颗粒计数和微生物计数是随着取样位置和取样期间采取的活动而改变的。监测环境中的非活 性颗粒和微生物是一项重要的控制措施，因为它们对达到颗粒物质（Particulate Matter）和 注射（Injections）1 条件下无菌（Sterility）的产品要求来说，都是重要的。 控制环境的微生物监测程序应当对人员的以及由人员执行的可能对控制环境造成生物负担影 响的清洁卫生处理的实行以及洁净效应予以评估。不管系

8、统多么复杂，微生物监测将不再、 也不需要对这些控制环境中存在的所有微生物污染进行鉴别和定量。然而，常规的微生物监 测应该提供用以确定控制环境是在适当的控制状态下运作的有效信息。 具备资格人员对环境微生物监测和数据分析，应该在容许洁净室和其他受控环境保持在控制 状态下进行。考虑到有意义数据的收集，则应当在环境正常运行过程中取样。微生物取样应 当发生在原料在场、加工处理在进行中且操作人员在岗时。 适当的时候，洁净室和一些其他控制环境的微生物监测应当包括室内空气以及进入关键区域、 表面、设备、清洁卫生处理容器、地板、墙壁和人员着装(如工作服和手套)的压缩空气的微 生物含量定量。微生物监测程序的目的对

9、环境生物负载来说具有代表性的评估。当数据被收 集和分析时，受过训练的人员应对任何趋势进行评估。尽管以推荐和特定的频率为根据来考 查环境的结果是重要的，可是考查扩展时期的结果对于确认趋势是否为目前的也同样的关键。 趋势可以通过构建包括警告和行动标准的统计检验图表而形象化。控制环境的微生物控制可 以以这些趋势数据为根据，进行部分的评估。应当做定期报告或总结借以警示责任管理人员。 当受控环境中特定微生物水平超标时，应当进行文件性的综述和调查。在调查的细节上可能 会有所不同，这要根据室内制造产品的类型和加工过程的不同来确定。调查应当包括区域维 护文件考查；清洁卫生处理文件；固有物理的或操作的参数，如环

10、境温度和相对湿度的改变； 以及相关人员的培训状况。调查之后，采取的行动可能会包括加强人员培训以强调微生物控 制的重要性；增加频率添加取样；添加清洁卫生处理；添加产品测试；鉴定微生物污染及其 可能来源；如果必要的话，需对现有标准化操作规程进行再评价并使其重新生效。 根据调查综述和结果测试，微生物水平超标的显著性和在那种条件下操作或产品处理的可接 受性可能是需要查明的。任何对于行动过程的调查和理论都应当通过文件证明，且应作为整 个质量管理系统的一部分。 控制环境，如洁净区或洁净室，是依照相关洁净室运行标准证明确定的。评估参数包括过滤 的完整性、空气流速、通风模式、换气以及压力差别。这些参数能够影响

11、洁净室运行中的微 生物生物负载。洁净室的设计、构建以及运行存在多样性，这使得对这些参数的泛化变得 4 困难。 Ljungquist 和 Reinmuller1发展了通过增加邻近关键工作区域和设备的周围粒子浓度 对系统进行颗粒激发测试的方法。首先，烟的产生使得洁净室或一个控制环境的各处空气流 动成为可见。旋涡或紊流区段的存在能够完全可见，且气流模式可以微调到消除或最小化不 良影响的状态。然后，颗粒物质就产生于关键区和无菌区的附近了。此评估是在模拟生产条 件下进行的，但是设备和人员均在场。 在微生物监测程序生效之前，完成适当的测试和优化洁净室或控制环境的物理特征是必要的。 确保适当的控制环境并依照

12、其工程规范运作，将会更高效的确保控制环境中对于无菌操作而 言能有适当的生物负载。在洁净室或受控环境的日常确认过程中，应当重复进行这些测试； 在进行如人员流动、加工过程、操作过程、原料流程、空气处理系统或设备布局等显著性的 操作改变时，也应当重复进行这些测试。 人员的培训 无菌处理产品需要生产商密切关注人员管理的细节，保持严格的纪律以及对其进行严格的监 督，以确保维持适当的环境质量水平，并确保最终产品的无菌性。 对控制环境中工作人员进行培训是个关键。这种培训对微生物监测程序的责任人员同样也是 重要的，因为微生物取样过程如不注意操作，很容易引起洁净工作区域污染的发生。 在高 度自动化的操作中，监测

13、人员可能是加工处理区域内与关键区带有最直接联系的人员。在加 工处理区域内工作前和工作后，都应当对人员进行监督检查。 微生物取样是导致微生物污染的潜在因素，如果取样方法不当，会导致微生物污染的发生。 正式有效的人员培训计划会使这种危险性因素减到最小。这一正式有效培训应当是针对所有 进入受控环境的人员的，并形成文件性规定。 对于设备的管理必须保证洁净室和控制环境内所有的相关操作人员能够很好的精通相关微生 物学原理。培训应当包括无菌处理基本原则以及对产品潜在污染源处理过程的关联训练。此 培训应当包括微生物基本原则、微生物生理学、消毒和卫生、培养基选择和制备、分类学以 及灭菌等指导，这些对涉及无菌操作

14、的人员本身都是必需的。涉及微生物鉴别的人员，还需 要进行实验室所需方法的专业培训。此外，还必须给相关人员提供所收集环境数据的管理方 面的附加培训。对应用标准化操作规程的认识和理解是很关键的，尤其是那些与当环境条件 这样要求时采用的纠偏措施相关的标准操作规程。了解关于生产质量管理规范 (GMPs) 中 每一个体责任以及顺应性调整政策，同指导调研和分析数据的培训一样，都应该作为整体培 训计划的一部分来实行。 5 控制环境中微生物污染的主要污染源是工作人员。微生物可以通过人体传播而引起污染的发 生，尤其是那些处于活动传染期个体。因此控制环境只能准许健康的个体进入。 由这些事实来看，良好的个人卫生以及

15、对个人进入控制环境所用的无菌衣处理过程细节上的 注意都显得十分重要。这些人员一旦穿戴整齐，包括完全的面部覆盖处理，就必须在整个期 间内小心的保持他们手套和制服的完整性。由于无菌处理过程中产品的主要污染威胁来自操 作人员，使得控制与这些人员相关联的微生物污染成为环境控制程序中一个重要的因素。 包括无菌操作在内，对控制环境的工作人员进行彻底的培训是重要的，但是也不能去过分的 强调。因为环境监测程序仅通过自身是无法检测无菌操作的所有对环境微生物品质可能的妥 协事件的。因此，周期性的培养基填充或过程模拟研究，对于使方法重新生效以确保适当的 操纵管理和保持有效培训来说是必需的。 微生物学环境控制程序设计

16、和实施中的关键因素 一项环境控制程序应当具有实时检测微生物状态中逆变的能力，这样才能保证采取有意义并 有效的改善行动。厂商有责任制定、启动、执行这样的环境控制程序并使其成文件性规定。 尽管对于环境控制程序的一般性建议将被讨论，但对于特定设备和特殊条件，仍急需制定这 样的程序。一般的微生物菌株生长培养基，如大豆酪蛋白消化培养基，在大多数情况是适用 的。如果这些环境中使用或应用了消毒剂或抗生素，这种培养基可以通过补充添加剂来克服 消毒剂或抗生素的效应或使其效应最小化。酵母菌和霉菌的检测和定量应当给以考虑。一般 的真菌培养基，如萨布罗氏培养基、改良萨布罗氏培养基或抑制霉菌琼脂，都是可以接受的。 其它已经确证的促进真菌生长的培养基，如大豆-酪蛋白消化琼脂，也可以应用。一般而言， 对于专性厌氧菌，不进行常规的检测。然而，应当有适当的条件或研究做保证，比如无菌试 验装置中这些微生物的频繁检测证明的鉴别等。应当对选择性培养基检测和定量这些厌氧或 微需氧微生物的能力进行评估。 一旦选定适当的培养基，就要进行时间和孵育温度的选择。典型的孵育温度为 22.5 2.