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1、医学检验专业的毕业论文 医学检验是运用现代物理化学方法、手段进行医学诊断的一门学科主要研究如何通过实验室技术、医疗仪器设备为临床诊断、治疗提供依据下面小编为大家分享医学检验专业的毕业论文希望对大家有所帮助 摘要：基于石墨烯量子点(GQDs)的荧光性能建立了一种非标记荧光方法用于灵敏和选择性测定抗坏血酸(AA).GQDs溶液在紫外光激发下发出很强的蓝色荧光当向溶液中加入AA后GQDs溶液的荧光被猝灭猝灭机理可能为在弱酸性介质中AA与GQDs发生氧化还原反应AA转移电子给GQDs.荧光猝灭强度与AA浓度在5.01067.5105mol/L范围内呈良好的线性关系检出限低至1.0106mol/L.该体
2、系成本低、操作简单并且在多种可能干扰的物质存在下对AA表现出很高的选择性本方法应用于生物样品中AA的检测回收率在95.2%115.3%之间 关键词：石墨烯量子点;荧光探针;非标记方法;抗坏血酸 Abstract:Alabelfreefluorescencemethodbasedonthefluorescencepropertyofgraphenequantumdots(GQDs)wasdevelopedforsensitiveandselectivedetectionofascorbicacid(AA).TheinitialstrongbluefluorescenceoftheGQDsinaq
3、ueoussolutionwaseffectivelyquencheduponadditionofAA.ThequenchingmechanismmayinvolvetransferofelectronsfromAAtoGQDsviatheredoxreactionofAAandGQDsinweakacidsolution.ThequenchingefficiencywaslinearlyproportionaltotheconcentrationofAAwithintherangeof5.01067.5105mol/Lwithalowdetectionlimitdownto1.0106mol
4、/L.Theproposedsensingsystemissimpleandlowcostwithfacileexperimentaloperations,andhasahighselectivityforAAoveranumberofpossibleinterferingspecies.Additionally,thismethodwassuccessfullyappliedtothedeterminationofAAinbiologicalsampleswithsatisfactoryrecoveries(95.2%115.3%). Keywords:graphenequantumdots
5、;fluorescenceprobe;labelfreemethod;ascorbicacid. 1引言 石墨烯量子点(GQDs)是最近发现的粒径小于100nm具有0维结构的石墨烯纳米片13.与石墨烯类似GQDs也有大的表面积和共轭网状结构作为一种新的碳纳米荧光材料GQDs由于其优越的光稳定性、优良的光学和电化学性能、高的荧光活性、抗光漂白能力和低细胞毒性48,已经在化学、材料、物理学和生物学领域引起较大关注并成为当前的研究热点之一目前已用于氯离子9、磷酸10、三磷酸腺苷11、三价铁离子12、过氧化氢13、葡萄糖1415、免疫球蛋白G16、生物巯基化合物1718、脱氧核糖核酸19和胰蛋白酶12
6、0的检测以及用于药物释放21和生物成像2224等领域 抗坏血酸(AA)是一种重要的抗氧化剂在人体平衡氧化压力中起重要作用AA在人体液中存在的浓度相对较高例如人血液中AA的浓度为615g/mL25.AA是治疗坏血病、药物中毒、肝脏疾病、过敏反应和动脉粥样硬化的药物并能帮助促进健康细胞的发展、钙的吸收和正常组织的生长在制造果汁和饮料时AA也作为一种抗氧化剂使用因此AA的检测对制药、临床和食品工业均具有重要意义26.目前检测AA的方法主要有电化学方法27、化学发光法28、高效液相色谱法29、分光光度法30、毛细管电泳法31和荧光分析法32等电化学方法由于灵敏度高是检测AA的主要方法但是与AA具有相似
7、还原性质的分子如尿酸(UA)和多巴胺(DA)对该方法造成的干扰较大而且AA的氧化产物会吸附在电极表面影响体系的稳定性和重现性荧光分析法具有简单、方便和快速等优点因此本工作以GQDs作为荧光探针建立了基于GQDs的荧光猝灭检测AA的新方法 2实验 2.1仪器与试剂 LS55型发光光度计(PerkinElmer,USA);Cary60型紫外可见分光光度计(AgilentTechnologies,USA);PHSJ4A型pH计(上海精密科学仪器有限公司);XW80A型漩涡振荡混合器(上海医科大学仪器厂);TGL16GA型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)等;SZCL3B数显智能控温磁力搅拌器(巩义
8、市予华仪器有限责任公司);781磁力加热搅拌器(常州国华电器有限公司);BS110S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);FL3PTCSPC时间分辨荧光仪(HORIBAJOBINJVON,France);JEM2100F场发射透射电子显微镜(JEOL);Multimode8原子力显微镜(Bruker,USA). 抗坏血酸(AA)、人血清白蛋白(HSA)购于美国SigmaAldrich公司;多巴胺(DA)购于AlfaAesar公司;D色氨酸(DTrp)、DL苏氨酸(DLThr)、L丙氨酸(LAla)、L组氨酸(LHis)、D丝氨酸(DSer)、L赖氨酸(LLys)、L亮氨酸(LLeu)、L苯丙氨
9、酸(LPhe)由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供;尿酸(UA)购于上海生工生物有限公司;半乳糖(Gal)、果糖(Fru)、甘露糖(Man)购于比利时AcrosOrganics公司;柠檬酸购于广州化学试剂厂 实验所用其他化学试剂均为国产分析纯实验用水为18.2Mcm的超纯水 实验所用的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液(1.0102mol/L,pH4.07.5):称取0.78gNaH2PO42H2O,溶于450mL超纯水中定容至500mL,用H3PO4和NaOH溶液调节pH值 2.2人血清样品的预处理 人血清样品取自桂林市第五人民医院取200L人血清置于1.5mL离心管中加入400L乙腈漩涡震荡混合5
10、min,在高速冷冻离心机上以1.2104r/min的速度离心20min,取上层清液用氮气吹干残留物用1000L超纯水溶解试液置于冰箱中4保存备用 2.3GQDs的合成 GQDs的合成方法参照文献33.称取2.0g柠檬酸加入试管中加热至200,当柠檬酸全部融化后开始计时20min后溶液颜色变为橘红色在磁力搅拌作用下将橘红色液体用滴管逐滴加入100mL含10mgNaOH的溶液中用HCl调节pH至7.0,得到GQDs水溶液浓度为14mg/mL,于4下避光保存 2.4实验方法 在一系列0.6mL的离心管中依次加入10L1.4mg/mLGQDs、10L不同浓度的AA以及80LpH=4.5的磷酸盐缓冲液充
11、分混匀后在37下孵育4h.冷却后采用LS55型发光光度计(PerkinElmer,USA)记录样品在453nm处的荧光强度设置电压为750V,激发、发射狭缝宽度均为15nm,扫描速度为1000nm/min,激发波长为367nm. 3结果与讨论 3.1GQDs的表征 所合成的GQDs的透射电子显微镜和原子力显微镜图像、红外光谱、紫外吸收光谱和荧光光谱均参见文献34.本实验合成的GQDs的粒径为1721nm,平均厚度为1.5nm.GQDs表面存在羧基和羟基这些官能团赋予了GQDs优良的水溶性GQDs在紫外区有较强的吸收在360nm处有一吸收峰并且在365nm紫外灯照射下可观察到蓝色荧光GQDs具有
12、对称的激发和发射光谱其最大激发波长为367nm,最大发射峰波长为453nm. 3.2荧光猝灭机理 GQDs的荧光猝灭机理GQDs本身在激发光照射下发出蓝色荧光已有研究证明氧化石墨烯(Grapheneoxide,GO)能被AA还原35.因为本实验合成的GQDs表面带有COOH,与GO具有相似的表面基团因此加入AA后AA与GQDs发生氧化还原反应AA被氧化为脱氢抗坏血酸(dehydroAA)并转移电子给GQDs,GQDs的荧光被猝灭 3.2.1紫外吸收光谱 猝灭机理也可通过紫外光谱来证明加入AA后GQDs在360nm处的特征峰消失说明GQDs与AA反应生成了其他物质 3.2.2荧光寿命 为了进一步
13、证实AA对GQDs的猝灭机理实验测定了体系的荧光寿命是AA加入前后GQDs的荧光衰减曲线 表1是GQDs猝灭前后的荧光寿命值从表中可以看到AA加入前后体系的荧光寿命发生了明显变化说明猝灭过程是动态猝灭3637.动态猝灭是碰撞过程因此AA猝灭GQDs的荧光机理可解释如下： GQDs+h*GQDs+AA*GQDsAA(碰撞复合物)GQDs+AA+(还原态的电子转移)38 激发态分子*GQDs遇到AA,两者相互作用导致电子和能量的转移最终导致*GQDs的荧光猝灭 3.3可行性验证 为了考察本方案的可行性我们对GQDs与AA反应前后的样品溶液进行了荧光光谱扫描AA加入后GQDs在453nm的荧光强度降
14、低荧光被猝灭了79.6%,说明该方法能用于AA的检测 3.4AA与GQDs作用时间的优化 实验考察了AA加入后GQDs溶液的荧光强度随时间的变化见体系的荧光强度随时间的延长而逐渐下降在大约4h以后荧光强度降低速度减慢之后荧光强度变化不大为了保证测定的灵敏度同时缩短分析时间实验选择4h作为AA与GQDs的作用时间 3.5pH值的优化 实验以磷酸盐为缓冲液考察其pH值对AA猝灭GQDs荧光的影响结果GQDs本身的荧光会受pH的影响当pH在4.07.5之间时GQDs的荧光随pH的升高而增强但体系在pH=4.5时有最高的信噪比因此实验选择pH=4.5的磷酸盐缓冲液作为AA与GQDs的反应缓冲液 3.6
15、线性范围和检出限 在上述优化的条件下实验对一系列不同浓度的AA进行了检测实验结果可以看出随着AA浓度的增大体系在453nm处的荧光强度逐渐降低并且荧光强度值的比值F0/F(F0为GQDs的荧光强度F为加入AA之后体系的荧光强度)与AA的浓度在5.01067.5105mol/L范围内呈现良好的线性关系其线性方程为F0/F=0.0537C+0.7467,R=0.9971(C为AA的浓度单位106mol/L),检测限(3=S0/S,S0为空白溶液多次测量的标准偏差S为标准曲线的斜率)为1.0106mol/L.我们将本方法与其他检测AA的方法做了对比见表2.从表2中可以看出该方法与其他方法相比具有较高的灵敏度 为了考察该方法的精密度实验将7.5105mol/LAA与GQDs反应进行了11次平行测定得到荧光强度的相对标准偏差(RSD)为3.4%.3.7特异性考察
