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1、以丰抗8号小麦水培幼苗为材料,研究了-1.0MPaPEG6000水分胁迫下根系和叶片中过氧化物酶POD和脂氧合酶LOX同工酶活性和蛋白组分的变化,并通过Ca抑制剂EGTA和CaM抑制剂TFP的使用,探讨了水分胁迫下,Ca/CaM在干旱信与传递所引起的特异蛋白表达过程中的作用及其剂量效应.初步阐明了了Ca、CaM与小麦幼苗的保护酶POD、LOX同工酶的关系-全文目录摘要前言材料和方法结果与分析1干旱胁迫对小麦幼苗生长及POD、LOX的影响1.1对含水量和蒸腾速率的影响1.2对过氧化物酶POD和脂氧合酶LOX同工酶的影响2不同钙离子浓度对小麦幼苗生长及POD、LOX的影响2.1对小麦幼苗含水量和叶
2、片蒸腾速率的影响2.2对小麦幼苗POD同工酶的影响2.3对小麦幼苗LOX同工酶的影响3不同浓度CaM抑制TFP对小麦幼苗生长及POD、LOX的影响3.1对小麦幼苗含水量和蒸腾速率的影响3.2对小麦幼苗POD的影响3.3对小麦幼苗LOX的影响4分根旱胁迫处理对小麦幼苗生长及POD、LOX的影响4.1对小麦幼苗含水量和蒸腾速率的影响4.2对小麦幼苗POD的影响4.3对小麦幼苗LOX的影响讨论1干旱胁迫对小麦幼苗POD和LOX同工酶基因表达的影响2 CA2+对小麦幼苗POD、LOX同工酶的影响及在干旱信号转导中的作用3 CAM与小麦幼苗POD、LOX同工酶的关系及在干旱信号转导中的作用。4植株根系感
3、受干旱逆境信号能力的差异5应进一步研究的问题结论参考文献附图1附图2附图30中文摘要：在实验中先制作标准脯氨酸含量曲线，再分别提取干旱条件和正常条件下生长的小麦的游离脯氨酸，然后与标准曲线比较，得出每个样品中的脯氨酸含量，然后分析差异的显著程度。英文摘要：Intheexperiment,firstmakeastandardcurveofprolinecontent,andthenwereextractedundernormalconditionsofdroughtconditionsandthegrowthofwheatproline,andthencomparedwiththestandar
4、dcurveobtainedintheprolinecontentofeachsample,thensignificantleveldifferences.【实验原理】在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。用甲苯萃取红色产物后，在该波长下，吸光度与溶液中红色产物的含量成正比。【实验目的】通过分别测定正常处理的小麦和干旱处理的小麦中脯氨酸含量，验证在逆境条件下生长的小麦中脯氨酸含量高于正常条件下生长的小麦中脯氨酸含量。【实验器材和试剂】植物材料:正常供水和干旱条件下生长的小麦。实验器材:分光光度计、水浴锅、分析天平、容量瓶、研钵、滤纸、漏
5、斗、25ml具塞刻度试管15支、移液管。实验试剂:3%磺基水杨酸水溶液、甲苯、冰醋酸、2.5%酸性茚三酮显色液、脯氨酸标准溶液【实验步骤】一：标准曲线制作1、取7支25mL具塞试管并编号；2、按表1加入各试剂，混匀后，在沸水中加热30min；3、取出冷却后，向各管加入5.0mL甲苯，充分振荡，以萃取红色物质；4、避光静置2-3小时，待分层后用吸管吸取甲苯层，以“0”管为对照在波长520nm下比色5、以吸光度为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。-二、样品游离脯氨酸提取1、取正常供水和干旱条件下生长的小麦新鲜叶片0.20.5g各三份；2、分别置于研钵中，加入5mL3%磺基水
6、杨酸溶液及少许石英砂，研成匀浆，移入具塞试管中，加盖；3、将试管浸入沸水浴中浸提15min，过滤，滤液待测。三、样品测定1、每个处理取三个样本，在试管中加滤液0.5mL，加水1.5mL、2mL冰乙酸和2mL茚三酮，摇匀后于沸水浴中加热30min；2、冷却后，各加5.0mL甲苯，充分摇匀萃取，暗中静置2-3小时（参见表2）2四、结果处理从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。式中C提取液中脯氨酸浓度（g），由标准曲线求得；V提取液总体积（ml）；a测定时所吸取的体积（ml）；W样品重（g）一、 原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，
7、溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。二、材料、设备仪器及试剂（一）材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管1
8、0ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。3.1TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。定容到100ml。用时稀释至各需要的浓度。4. 磷酸缓冲液（115mol/L，pH7）。5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。三、实验步骤（1）TTC标准曲线的制作取0.
9、4TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25g、50g、100g、150g、200g的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。（2）称取根尖样品0.5g，放入10ml烧杯中，加入0.4TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37下暗保温13h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸
10、，再加根样品，其他操作同上）。（3）把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯34ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出甲月替。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。四、结果计算四氮唑还原强度（mg/g(根鲜重)/h）四氮唑还原量（mg）/根重（g）时间(h)电导率一、实验目的通过测定高温和低温处理来进行观察植物根系的抗逆性。二、实验原理植物细胞膜起调节控制细胞内外物质交换的作用，当膜受到损伤时，物质易从细胞中外渗到周围环境中。当细胞受到高温或低
11、温后，细胞膜差别透性就会改变或丧失，导致细胞内的物质(尤其是电解质)大量外渗，导致组织浸泡液电导率增大，通过测定外液电导率的变化即可反映出质膜受害程度和植物抗逆性的强弱。三、实验材料小麦四、设备与试剂电导率仪、电冰箱、温箱、恒温水浴锅、100mL量筒、0.5mL和2mL移液管、大试管和小试管、镊子、试管夹、愈创木酚，过氧化物酶，NaCl溶液五、实验步骤1.选取小麦在一定部位上生长叶龄相似的叶子若干，剪下后，先用纱布拭净，称取二份，各重2g。2.一份插入小杯中放在40恒温箱内萎蔫0.51h，另一份插入水杯中放在室温下做对照。处理后分别用蒸馏水冲洗二次，并用洁净滤纸吸干。然后剪成长约1cm小段放入
12、小玻杯中（大小以够容电极为度），并用玻棒或干净尼龙网压住，在杯中准确加入蒸馏水20ml，浸没叶片。3.放入真空干燥器，用抽气机抽气78min以抽出细胞间隙中的空气；重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶下沉。4.将抽过气的小玻杯取出，放在实验桌上静置20min，然后用玻棒轻轻搅动叶片，在2025恒温下，用电导仪测定溶液电导率。5.测过电导率的之后，再，放入100沸水浴中15min，以杀死植物组织，取出放入自来水冷却10min，在2025恒温下测其煮沸电导率。伤害率=%100-对照电导率煮沸电导率对照电导率处理电导率六实验结果电导率（S/cm）品种处理煮沸前-20度小麦根室温小麦根-20度七、注意事项1.2组处理的幼苗根选择要尽量一致，可相似的分别放入各组，则各组总体大致相同。2.一切用具，器皿，事前均须洗净，并用蒸馏水冲洗过。3.使用后要清理电极。4 / 4
