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1、第八章 血浆蛋白质的测定第一节 概 述一、血浆蛋白质的组成及功能血浆蛋白质是血浆固体成份中含量最多、组成复杂、功能广泛的一类化合物。占血浆固体成份 90%左右，目前已经研究的血浆蛋白质有 300 多种，分离出的纯品约 100 来种，除免疫球蛋白外，主要由肝细胞合成，主要功能有以下几方面：1. 维持血浆胶体渗透压；清蛋白。2. 作为某些物质的载体，起运输作用；如清蛋白能与多种物质结合（FA、胆红素） ，某些球蛋白具特异地运输某些物质的功能，运铁蛋白、运皮质醇蛋白。3. 维持体液 pH 恒定；血浆蛋白 pI 一般都小于 7.4 是弱酸，一部分以弱酸盐形式存在，构成缓冲对。4. 免疫功能；血浆中许多
2、具有免疫功能的球蛋白，主要由浆细胞合成，电泳时位于 区带，如 IgG、IgA、IgM、IgD、IgE，此外，还有具有免疫作用的非特异球蛋白，如补体。5. 凝血与纤溶作用；凝血与纤溶是一对矛盾的统一、凝血因子与纤溶因子绝大部分是血浆蛋白质，它们促进血液凝固，防止血液流失和溶解血栓，防止重要脏器的动脉栓塞。6. 营养作用；血浆蛋白质可分解成 AA，用于合成组织蛋白或氧化供能。7. 催化作用；血浆中有许多酶类，其中部分在血浆中发挥作用，称血浆功能性酶，如凝血酶原、纤溶酶原、铜蓝蛋白、LPL 、LCAT、肾素等。二、血浆中几种主要的蛋白质（一）前白蛋白（prealbumin，PA ）分子量 54kD，
3、由肝细胞合成，电泳时移动速度较白蛋白快，位于其前方面得名，半寿期短为 12h。PA 是一类运载蛋白，一种能与甲状腺素结合，称为甲状腺结合蛋白，一种能与 VitA 结合，称为VitA 结合蛋白，常用测定方法是免疫学方法，正常参与范围 0.20.4g /L，急性炎症，恶性肿瘤，肝硬化或肾炎时下降。（二）白蛋白（albumin，Alb）分子量 66458，由肝实质细胞合成，半寿期1519 天，是血浆中含量最多的蛋白质，占 40%60%，主要功能，维持血浆胶体渗透性，缓冲作用，运输作用，营养作用，调节某些激素或药物活性。白蛋白可微量地通过肾小球，约 0.04%，但大部分被血小管重吸收。白蛋白的测定方法
4、目前主要是溴甲酚绿（BCG）法，正常参考范围3555g/L ，血浆白蛋白增高临床少见，主要见于严重失水引起血液浓缩，血浆白蛋白降低临床常见。 合成障碍急；慢性肝炎。 丢失过多；肾病综合症、慢性肾小球、肾炎、糖尿病、系统性斑狼疮等。 分解过多；营养不良，慢性胃肠道疾病。（三） 1-酸性糖蛋白（ 1-acid glycoprotein，AAG） 、分子量约 4 万，含糖约 45%，pI2.73.5，主要由肝细胞合成，某些肿瘤组织也可合成。AAG 是主要的急性时相反应蛋白，急性炎症时上升，与免疫防御功能有关。AAG 测定方法，使用 AAG 抗体，进行免疫扩散法或免疫比浊法检测，正常参考范围 0.51
5、.5g/L,主要作为急性时相反应的指标，风湿病、恶性肿瘤、心肌梗塞患者上升，营养不良、严重肝病下降。（四） 1-抗胰蛋白酶（ 1-antitrypsin， 1AT 或 AAT） ，分子量 5.5 万，pI4.8，含糖 10%12%，电泳时位于 1 区带，占 90%左右，由肝细胞合成，能抑制多种酶活性，尤其是蛋白酶，占血清中抑制蛋白酶活力的 90%左右，抑制作用有明显的 pH 依赖性，在中性和弱碱性中活力最大。AAT 也是一种急性时相反应蛋白，主要功能是对抗多形核白细胞吞噬作用时释放的溶酶体蛋白水解酶。AAT 测定方法，目前主要采用免疫化学法，正常参考范围，新生儿血清1.452.7g/L，成人
6、0.782.0g/L，AAT 下降见于胎儿呼吸窘迫症，AAT 缺陷所致的肺气肿、肝硬化等，AAT 上升见于急性炎症、外科手术后，长期服用可的松药物，妊娠及服用避孕药物。（五）甲胎蛋白（ 1-fetoprotein，AFP）分子量 6.57 万，pI4.75 含糖量 4%，主要由胎儿肝合成，妊娠 1315 周血清 AFP 含量最高，以后逐渐下降，出生时仅为高峰期的 1%0.1%，周岁时接近成人水平，仅 1030g /L，功能不详。AFP 作为肿瘤标志物，对原发性肝 Ca 的诊断很有价值，80%以上原发性肝Ca 患者血清 AFP 上升，但无特异性，肺 Ca、胰腺 Ca，肝硬化患者血清 AFP亦升高
7、，此外，羊水 AFP 含量测定可用于胎儿产前监测，AFP提示胎儿畸形（神经管缺损、脊柱裂、无脑儿） ，死胎。AFP 测定方法，火箭电泳放射自显影，放射免疫分析法，灵敏度特异性很高，有放射污染。反向间接血凝法（RPHA） ，操作简便，定量不够精细，适合于普查、筛选。酶联免疫法（ELISA） ，灵敏度接近放免，且操作简便，无放射污染，便于推广。（六）结合珠蛋白（haptoglobin，Hp）又名触珠蛋白，是一种糖蛋白，主要由肝合成，电泳时位于 2 区带，是一种急性时相反应蛋白，为两对肽链组成的四聚体（ 22） ， 链有 1 和 2 两种，其中 1 有两种遗传变异体。Hp 的主要功能与血浆中游离血红
8、蛋白结合， （不可逆结合） ，并送至肝细胞内降解，因此 Hp 在溶血后含量急剧下降。血浆 Hp 测定方法，测定 Hp-Hb 复合物中过氧化物酶活性。 在血浆中加入过量 Hb，生成 Hp-Hb 复合物，凝胶层折法收复合物分离，测定结合的Hb。电泳法。 免疫分析法，正常参考范围 0.32.15g/L，个体间变异较大。急性时相反应中血浆 Hp 上升，烧伤、肾病综合征引起 Alb 丢失时 Hp 上升，血管内溶血 Hp 下降。（七） 2-巨球蛋白（ 2-macroglobulin， 2MG 或 AMG） 是血浆中分子量最大的蛋白质，分子量为 62.580 万，含糖量 8%。AMG 最突出的特性能与多种分
9、子和离子结合，特别是它能与不少蛋白水解酶结合而影响这些酶的活性，有选择地保护某些蛋白酶活性的作用。AMG 由肝细胞与单核吞噬细胞系统合成，半寿期 5 天。AMG 测定方法，免疫化学法，正常参考范围 1.254.10g /L，在低 Alb 血症，AMG 上升，妊娠、服用避孕药时 AMG 上升。（八）铜蓝蛋白（ceruloplasmin ，CER） 含铜的糖蛋白，分子量约1216 万，含糖量约 10%，因含铜而呈蓝色，故名铜蓝蛋白。CER 具有氧化酶活性，使血液中 Fe2+氧化成 Fe3+，故又称亚铁氧化酶。CER 还起着抗氧化剂的作用。防止组织中脂质过氧化物和自由基的生成，CER属于急性时相反应
10、蛋白，血浆 CER 在感染、创伤、肿瘤上升，Wilson 病（肝点状核变性）CER 下降。CER 测定方法，根据其氧化酶活性或免疫化学法，成人正常参考范围0.20.5g/L。（九）转铁蛋白（transferrin，TRF） 血浆中主要含铁蛋白质，分子量 7.7万，含糖约 6%，由肝及网状皮系统合成，半寿期 7 天。主要运载由消化道吸收的铁和 RBC 降解释放的铁，此外还可逆地结合多价金属离子，如 Ca、Zn、Cu 等。TRF 测定方法，扩散法、放免法、散射比浊法，成人正常参考范围2.24.0g/L。TRF 在急性时反应中下降，如炎症、恶性病变时、TRF、Alb、PA 同时下降，慢性肝病，营养不
11、良亦下降，妊娠、口服避孕药，注射雌激素 TRF 上升。（十） 2-微球蛋白（ 2-microglobulin，BMG） 分子量 11800，存在于所有有核细胞的表面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞并由此释放入血，半寿期107mim。作为人类淋巴细胞抗原 链交部分。BMG 测定方法，由于含量很低，常采用放免法，正常参考范围1.02.5mg/L。主要用于监测肾小管功能，特别是肾移植后，如有排斥反应，BMG 在尿中排出量上升，肾功能衰竭，炎症、肿瘤血浆 BMG 上升。（十一）C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP） ，是一种能结合肺炎双球菌细胞壁 C-多糖的蛋白质，分子量 11.514
12、 万，五条肽链组成，肝细胞合成。CRP 能激活补体，促进粒细胞巨噬细胞的运动和吞噬，具有调理素样作用。CRP 测定方法，免疫扩散法，火箭免疫电泳法，ELISA 法，放免法，正常参考范围：成人 0.425.2mg/L。作为急性时相反应的一个极灵敏指标，急性心肌梗死，创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润迅速上升。血浆蛋白质的组成与含量组成 分子量 功能 正常参考值 临床意义前白蛋白（PA） 5.4 万 运载 T3、T 4、 VitA 0.2-0.4g/L营养不良、肿瘤、急性炎症、肝病白蛋白（Alb） 6.6 万维持胶渗、缓冲作用、运输作用 35-55g/L慢性肝炎、肝硬化、肾炎1-酸性糖蛋白（ A
13、AG） 4 万 与免疫功能有关 0.5-1.5g/L风湿病、恶性肿瘤、心肌梗塞1-抗胰蛋白酶（AAT ） 5.5 万对抗溶酶体蛋白水解酶 0.78-2g/L胎儿呼吸窘迫症、肺气肿、急性炎症、妊娠甲胎蛋白（AFP） 6.5-7 万 10-30g/L原发性肝癌羊水 AFP 胎儿产前监测结合珠蛋白 8-40 万 与血浆中游离 Hb 结合 0.3-2.05g/L Alb 丢失时、溶血时1-巨球蛋白（AMG） 62.5-80 万与蛋白水解酶结合影响其活性 1.25-401g/L低 Alb、妊娠、口服避孕药铜蓝蛋白（CER） 12-16 万使 Fe2+Fe 3+，抗氧化剂 0.2-0.5g/L感染、创伤、
14、肿瘤、Wilson 病转铁蛋白 (TRF) 7.7 万 运载 Fe3+ 2.2-4.0g/L 炎症、恶性病变、慢性肝病妊娠、口服避孕药2-微球蛋白（BMG） 1.18 万 淋巴细胞抗原一部分 1-2.6mg/L肾小管功能监测，肾衰、炎症、肿瘤C-反应蛋白（ CRP） 10.5-14 万激活补体、促进粒C、巨噬 C 的运动和 0.42-5.2mg/L急性心肌梗塞、创伤、感染、炎症、手术后、妊娠吞噬 上述蛋白质除 PA、Alb、BMG 外都属于糖蛋白，含糖量最高的是AAG、 45%，除 BMG 外都主要由肝细胞合成。三、疾病时的血浆蛋白质的变化（一）炎症、创伤 在炎症、创伤、感染、心肌梗塞、肿瘤等
15、情况下其血浆浓度会发生明显改变的蛋白质称为急性时相反应蛋白（acute phcse reactante，APR） ，主要包括 AAG、AAT、Hp、CER 、C 3、C 4、纤维蛋白原、CRP 升高；PA 、Alb、TRF 下降。（二）肝脏疾病 血浆蛋白质大多数是由肝细胞合成，因此肝脏疾病会导致多种血浆蛋白质发生变化。如乙肝活动期 AAT、 IgM 升高；而 Hp、PA 、Alb降低。肝硬化时 AAT、IgA、AMG 明显升高；IgG 升高；CER 、CRP 轻度升高；而 AAG、Hp、C3 降低；PA、Alb、TRF 明显降低。（三）肾脏疾病 肾脏疾病早期可因蛋白尿而导致血浆蛋白质丢失，丢失
16、的蛋白质与其分子量有关，小分子蛋白质丢失明显，而大分子量蛋白质因肝细胞代偿性合成增加。主要表现是 Alb 明显降低，PA、AAG 、AAT、TRF 降低；而 AMG、Hp、-LP 升高。第二节 血浆蛋白质测定临床生化检验中测定蛋白质的方法很多，主要利用蛋白质的分子组成，结构或性质进行。一、测定蛋白质特征元素氮 如凯氏定氮法，是测定蛋白质的经典方法，1883 年 Kjeldahl 首创，精密度准确度高，但操作复杂、费时、技术性强，不适合临床常规检测，一般用于标准血清的标定和校正。二、利用重复的肽链结构 如双缩脲法，1914 年首创，操作简便，重复性好，各种蛋白产生的颜色反应相近，但灵敏度较低，是目前临床上测定总蛋白的常规方法。三、利用酪氨酸、色氨酸残基与试剂的反应或紫外吸收 如：1. 酚试剂法 1921 年， Folim 首创，后又经改进，1951 年 Low
