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1、臭氧对水生真菌生长的作用学生：李平 丁灵伟指导老师：方羽生1. 实验目的：通过实验，掌握水生病原真菌的分离纯化培养及抑菌试验方法，探索臭氧对水生病原真菌的抑菌效果。如果臭氧能对水生病原菌有抑制作用，将是环保型的水培植物病害防治手段，希望通过试验探索臭氧作为水培植物病害防治手段的可行性。2 实验原理：水生病原真菌是蔬菜、水培作物、鱼类的重要病原。臭氧的分子式为 O3，亦即 O2O，除了提供两个氧 O2外，另外一个氧 O 的超强氧化力理论上能把水中的真菌、细菌、病毒、重金属、残留氧等消除或氧化为无害的氧化物沉淀，并将水分子团打散成小分子水，此外剩余的氧会还原成 O2溶于水中，增加了水中的含氧量。3
2、 实验仪器与材料：臭氧发生器、无菌工作台、摇床、打孔器（直径为 7cm） 、酒精灯、培养皿、锥形瓶（250mL） 、吸滤瓶、载玻片、盖玻片、烧杯、烘箱、玻璃管、镊子、解剖针、光学显微镜、培养箱等。菜园土（华南农业大学 1 号楼） 、黄瓜池塘水（华南农业大学树木园） 、蜜蜂供试菌：绵霉菌、水霉菌。4 培养液和固体培养基的制作：培养液配方：1000 mL 水 : 200g 马铃薯 : 20g 蔗糖。固体培养基配方：1000 mL 水 : 200g 马铃薯 : 20g 琼脂 : 20g 蔗糖。每瓶培养液或固体培养基的体积：200mL。5 供试菌的分离5.1 绵霉菌的分离：将菜园土取回后置于烧杯内捣碎
3、，加水混成泥浆。将一节黄瓜切面朝下放于淤泥上，烧杯盖上湿布，在室温下培养 45 天，待黄瓜上长出白色菌丝时，挑取少量菌丝转入 PDA 平板培养基上不断纯化培养。到完全纯化后，大量培养，以备后用。5.2 水霉菌的分离：将蜜蜂放入烧杯中，倒入池塘水，每天更换池塘水。待蜜蜂身上长出放射状的白色丝状孢子囊后，用无菌水泡洗，然后挑取少量菌丝转入 PDA 平板培养基上不断培养纯化，直到完全纯化为止。6 抑菌过程：6.1 选取长势较为一致的菌落，在无菌工作台上，用打孔器将其打成均匀的小圆块，然后放入盛有培养液的锥形瓶中（每瓶 7 块） 。将装有菌块的一半数量的锥形瓶中液体再倒入吸滤瓶中，作为处理组，另一半作
4、为对照组。吸滤瓶的通气口接臭氧发生器，通气口和出气口都用纱布包住。6.2 将装有菌块的锥形瓶和吸滤瓶放入摇床中室温培养，摇床转速为 107 转/分，处理组不断通入臭氧。6.3 约 80 小时后，菌块会长成棉花状的菌丝团，将菌丝取出用纱布过滤，过滤时挤出混有的培养基。最后烘干并称至恒重。7. 数据处理：对照组与处理组的数据经整理，结果如下表：表 1. 对照组和处理组菌丝干重编 号 对 照 处 理 1 0.53 0.292 0.50 0.293 0.38 0.224 0.43 0.205 0.35 0.196 0.32 0.13 7 0.25 0.068 0.12 0.059 0.09 0.031
5、0 0.08 0.03 表 2. 对照组与处理组的特征数项 目 对 照 处 理 平均值 0.31 0.15标准差 0.165 0.103标准误 0.052 0.033 对两个平均数进行 t检验（采用小样本不成对法）：H0: 1=2 H1： 1 2相关数据如下：表 3. t检验相关数据项 目 对 照 处 理 数据个数 10 10自由度 9 9平均数 0.305 0.149标准误 0.0436 0.0436 综合标准差 S0.138统计量 t2.593 t0.05（df=18）2.101 t 0.01（df=18）2.878t0.01tt0.05 这说明对照组和处理组的菌丝干重差异显著（p0.05
6、） 。对照处理 0.310.15抑制率（）10010051.6对 照 0.318. 玻片的制作：将对照和处理的菌丝分别放入清水中泡洗后，挑取少量菌丝于滴有乳酚油的载玻片中，用解剖针将菌丝尽量摊开。盖上盖玻片，然后放入烘箱中，一个星期后取出拍照并完成封片。9 完成项目：9.1 分离纯化水生病原真菌两种：绵霉、水霉。9.2 12 块绵霉玻片的制作（示菌丝差别，6 片对照，6 片处理） ，6 块水霉玻片的制作（示分生孢子器） 。9.3 将实验结果和数据整理成实验报告一份。9.4 照片 2 张（示绵霉对照组和处理组的菌丝差别） 。10 分析说明：10.1 绵霉菌的培养时间为 80 小时，摇床转速为 1
7、07 转/分。10.2 在不断通入臭氧的情况下，绵霉的生长会受到两方面的影响：臭氧抑制其生长，气体流动促进其生长，但抑制作用要表现得强些。10.3 从玻片观察中发现，对照组和处理组的绵霉菌丝在形态上有差别，对照组的菌丝细小且分枝多，处理组的菌丝粗而短，分枝少。10.4 对照组和处理组的菌丝干重差异显著，这说明了绵霉菌的生长受臭氧的抑制显著。导师评语：臭氧用于水源灭菌是近年发展较热的一项技术。为了了解臭氧对水培植物根部病原真菌的抑制作用，设计了本实验。李平和丁灵伟同学在老师指导下开展本项实验，独立地克服了实验中因环境洁净度差而出现的污染问题。分离病原菌、制做培养基等综合运用了普病、农病所掌握的基本操作技术，一丝不苟地完成了实验，达到了预定地实验目的。工作能力和专业操作技能得到较大的提高。成绩：94导师：方羽生
