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1、实验六实验六土壤中真菌分离、纯化和培养土壤中真菌分离、纯化和培养 一、目的要求一、目的要求 掌掌握握从从土土壤壤中中初初步步分分离离培培养养真真菌菌的的方方法法，从从而而获获得得真真菌菌纯纯培培养养技技能能；了了解解基基本本接接种技术。种技术。二、实验原理二、实验原理 土土壤壤是是微微生生物物生生活活的的大大本本营营，是是寻寻找找和和发发现现有有重重要要应应用用潜潜力力的的微微生生物物的的主主要要菌菌源源。不不同同土土样样中中各各类类微微生生物物数数量量不不同同，一一般般土土壤壤中中细细菌菌数数量量最最多多；其其次次为为放放线线菌菌和和霉霉菌菌。本次实验从土壤中分离真菌。本次实验从土壤中分离真
2、菌。三、仪器和材料三、仪器和材料样品：样品：新鲜土壤新鲜土壤培培养养基基：加加有有2ml2ml链链霉霉素素的的PDAPDA培培养养基基或或孟加拉红培养基。孟加拉红培养基。无菌水：无菌水：装有装有9mL无菌水的试管无菌水的试管4支支。其其它它：无无菌菌培培养养皿皿4皿皿、无无菌菌吸吸管管、酒酒精精灯、培养箱等灯、培养箱等 。四、真菌纯种分离的操作方法四、真菌纯种分离的操作方法u1 1、土壤稀、土壤稀释液的制液的制备 用用“ “稀稀释平板平板计数数法法” ”中的方法中的方法进行，行，将将土土样稀稀释至至10105 5。 将将1瓶土壤菌液（称取土样瓶土壤菌液（称取土样10g放入盛放入盛90mL无菌水
3、）和无菌水）和4管管9mL的无菌水排列好，的无菌水排列好，按按10-1、10-2、10-3、10-4及及10-5依次编号。依次编号。在无菌操作条件下，用在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管吸无菌移液管吸取取lmL10-1浓度的菌液于一管浓度的菌液于一管9mL无菌水无菌水中，将移液管吹洗三次，摇匀即为中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓浓度菌液。同样方法，依次稀释到度菌液。同样方法，依次稀释到10-5。 注意：注意：在土壤稀释过程中，吸取不同梯在土壤稀释过程中，吸取不同梯度的菌液需换用不同的吸管。度的菌液需换用不同的吸管。土壤稀释液的制备和稀释液的取样土壤稀释液的制备和稀释液的取样2、分离方
4、法、分离方法 采用稀释平板分离法。又可分为两种方采用稀释平板分离法。又可分为两种方法。法。 混菌法混菌法和和涂抹法涂抹法。混混菌菌法法涂涂抹抹法法u3 3、培、培养养 将将上述接上述接种种土壤土壤悬液的平板液的平板倒置于倒置于2828培培养养3-5d3-5d。u4 4、挑菌、挑菌纯化化u5 5、计数数u6 6、菌、菌种种保存保存 将将分离到的分离到的真真菌菌转接到接到PDAPDA斜面上培斜面上培养养，待，待长好后，置于冰籍中保存，必要好后，置于冰籍中保存，必要时进行深入行深入研研究。究。六、注意事项六、注意事项1、混菌法接种时温度不能过高，应低于、混菌法接种时温度不能过高，应低于45，如不用温度计，则以不烫脸、手为宜。如不用温度计，则以不烫脸、手为宜。2、涂布法接种时一定要涂抹均匀，否则就会无、涂布法接种时一定要涂抹均匀，否则就会无法记数。法记数。3、接种后的培养皿应静置、接种后的培养皿应静置15分钟以上，然后倒分钟以上，然后倒置培养。置培养。七、作业七、作业 题题1 在分离真菌时为什么需加链霉素（庆在分离真菌时为什么需加链霉素（庆大霉素或氯霉素），而不加青霉素？大霉素或氯霉素），而不加青霉素？2用用一一根根无无菌菌移移液液管管接接种种几几种种浓浓度度的的水水样时，应从哪个浓度开始？为什么？样时，应从哪个浓度开始？为什么？
