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1、肉毒梭状芽孢杆菌检验肉毒梭状芽孢杆菌检验(jinyn)(jinyn)(jinyn)(jinyn)技术技术第一页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验肉毒杆菌(gnjn)(gnjn)简介一一 肉毒杆菌是一种生长在缺氧肉毒杆菌是一种生长在缺氧(qu yn)(qu yn)环境下的细菌，在环境下的细菌，在二二 罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能三三 力，是目前毒性最强的毒素之一。肉毒杆菌是力，是目前毒性最强的毒素之一。肉毒杆菌是四四 一种致命病菌，在繁殖过程中分泌毒素，是毒一种致命病菌，在繁殖过程中分泌毒素，是毒五五 性最强的蛋白质之一。军队常常将这种毒素用性最强
2、的蛋白质之一。军队常常将这种毒素用六六 于生化武器。人们食入和吸收这种毒素后，神于生化武器。人们食入和吸收这种毒素后，神七七 经系统将遭到破坏，出现头晕、呼吸困难和肌经系统将遭到破坏，出现头晕、呼吸困难和肌八八 肉乏力等症状。肉乏力等症状。第二页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验二二 肉毒棱菌（肉毒棱菌（cl.botulinum）为腐物寄生菌，）为腐物寄生菌， 广泛分布广泛分布(fnb)于土壤和动物粪便中。革兰氏阳于土壤和动物粪便中。革兰氏阳 性粗大杆菌。单独或成双排列，有时可见性粗大杆菌。单独或成双排列，有时可见 短链状。有周身鞭毛，无荚膜。芽胞椭圆短链状。有周身鞭毛，无荚膜。芽胞椭圆 形，大于
3、菌体，位于次极端，使菌体似网形，大于菌体，位于次极端，使菌体似网 球拍状，芽胞抵抗力甚强。严格厌氧，在球拍状，芽胞抵抗力甚强。严格厌氧，在 普通琼脂培养基上形成直径普通琼脂培养基上形成直径35mm不规不规 则的菌落，血液琼脂平板上有则的菌落，血液琼脂平板上有溶血。能溶血。能 消化肉渣，使之变黑，有腐败恶臭。分解消化肉渣，使之变黑，有腐败恶臭。分解 葡萄糖、麦芽糖及果糖，产酸产气。液化葡萄糖、麦芽糖及果糖，产酸产气。液化 明胶，产生明胶，产生hzs，不形成吲哚。，不形成吲哚。第三页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验三三 肉毒毒素肉毒毒素(d s)是一种神经毒素是一种神经毒素(d s)，能，能 透过机
4、体各部的透过机体各部的粘膜粘膜。肉毒毒。肉毒毒 素由胃肠道吸收后，经素由胃肠道吸收后，经淋巴淋巴和和 血行扩散，作用于颅脑神经核血行扩散，作用于颅脑神经核 和外周和外周神经肌肉接头神经肌肉接头以及植物以及植物 神经末梢，阻碍乙酰胆碱释放神经末梢，阻碍乙酰胆碱释放 ，影响神经冲动的传递，导致，影响神经冲动的传递，导致 肌肉的松弛性麻痹。肌肉的松弛性麻痹。第四页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验第五页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验第六页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验显微显微(xin wi)镜下镜下的肉毒肉毒杆菌杆菌(gnjn)第七页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验眼角植入肉毒杆菌(gnjn)(gnjn)
5、的对比图第八页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验肉毒素的检验(jinyn)(jinyn)程序 样品（食品） 消毒检测 增菌、产毒培养30度5天报告(bogo)（一） 毒素检测 观察生长性状、染色镜检 报告（二） 分离培养 增菌产毒培养30度5天 观察菌落性状，染色镜检 毒素检测 培养检查 报告（三）第九页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验培养基和试剂：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、培养基和试剂：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、 明教磷酸盐缓冲液、肉毒分型抗明教磷酸盐缓冲液、肉毒分型抗 毒诊断血清毒诊断血清(xuqng)、胰酶、革兰氏染色、胰酶、革兰氏染色 液等。液等。设备和器材：离心机及离心管、研波及细砂、
6、培设备和器材：离心机及离心管、研波及细砂、培 养箱、显微镜、厌氧培养装置、养箱、显微镜、厌氧培养装置、1ml 和和10ml吸管、吸管、1ml注射器、平皿、接注射器、平皿、接 种环、载玻片、小白鼠等。种环、载玻片、小白鼠等。第十页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验肉毒毒素肉毒毒素(d s)检检测测样品制备(zhbi) 检出实验 确证实验 毒力测定 定型试验 肉毒梭菌检验肉毒梭菌检验(jinyn)样品处理样品处理 增菌培养增菌培养 分离培养分离培养 第十一页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验1)典型的肉毒中毒，小白鼠会在46h内死亡，而且98%99%的小白鼠会在12h内死亡，因此，实验前24h内的观察是非
7、常重要的。2)24h后的死亡是可疑的，除非有典型症状出现(chxin)。3）如果小白鼠注射经1：2或1：5倍数稀释的样品后死亡，但注射更高稀释度的样品后未死亡，这也是非常可疑的现象，一般为非特异性死亡。4）小白鼠要用不会抹去的染料加以标记。5）小白鼠的饲料与水必须及时添加，充分供应。6）食物中发现毒素，表明未经充分的加热处理，可能引起肉毒中毒。7）检出肉毒梭菌，但未检出肉毒毒素，不能证明此食物会引起肉毒中毒。8）肉毒中毒的诊断必须以检出食物中的肉毒毒素为准。9）中和试验可以为毒素定型。第十二页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验内容(nirng)总结肉毒梭状芽孢杆菌检验技术。肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌，在。消毒检测 增菌、产毒培养30度5天。增菌产毒培养30度5天 观察菌落(jnlu)性状，染色镜检。毒素检测 培养检查。培养基和试剂：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、。毒诊断血清、胰酶、革兰氏染色。9）中和试验可以为毒素定型第十三页，共十三页。肉毒芽孢杆菌的检验
