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1、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离血清蛋白【实验目的实验目的】 1.学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 2.掌握聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的操作技术掌握聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的操作技术【实验原理实验原理】 聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺是是由由单单体体丙丙烯烯酰酰胺胺（简简称称Acr）和和交交联联剂剂N,N -甲甲叉叉双双丙丙烯烯酰酰胺胺（简简称称Bis）在在催催化化剂剂过过硫硫酸酸铵铵（简简称称AP）和和加加速速剂剂N,N,NN-四四甲甲基基乙乙二二胺胺 (简简称称TEMED)的的作作用用下下,聚聚合合交交联联而而成成的的三三维维网网状状结结构构的凝胶的凝胶 。
2、 2021/4/261聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理1.分分子子筛筛效效应应：分分子子量量或或分分子子大大小小和和形形状状不不同同的的蛋蛋白白质质通通过过一一定定孔孔径径分分离离胶胶时时，受受阻阻滞滞的的程程度度不不同同而而表表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。2.电荷效应：电荷效应：电荷量不同，迁移率不同。电荷量不同，迁移率不同。3.浓缩效应浓缩效应2021/4/262【实验器材实验器材】样品：样品：血清血清凝胶储备液：凝胶储备液：1号液：号液：pH8.9 TrisHCl缓冲液缓冲液+TEMED2号液：号液：Acr + Bis3号液
3、：号液：AP电泳缓冲液电泳缓冲液 ：pH8.3 的的Tris-Gly 缓冲液缓冲液染色液：染色液：氨基黑溶液氨基黑溶液 脱色剂：脱色剂：冰乙酸冰乙酸 2021/4/263【实验器材实验器材】电泳仪、电泳仪、圆盘电泳槽圆盘电泳槽、电泳玻璃管、青霉素小瓶盖、电泳玻璃管、青霉素小瓶盖、微量注射器微量注射器 、长针头注射器、烧杯、移液管、长针头注射器、烧杯、移液管、ParaFilm膜。膜。2021/4/264【实验步骤实验步骤】1.凝胶的制备凝胶的制备 （1）准准备备工工作作 ：用用ParaFilm膜膜密密封封细细橡橡皮皮塞塞的的一一端端，塞塞入入放放到到木木质质试试管管架架上上的的小小瓶塞中；瓶塞中
4、；2021/4/265（2）制备小孔胶（分离胶）制备小孔胶（分离胶） 凝胶浓度凝胶浓度: 7.5%试试试试 剂剂剂剂用用用用 量量量量蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水1号液号液2号液号液 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 2 mL 2 mL 混匀混匀3号液号液4 mL4 mL2021/4/2662. 灌胶，装胶灌胶，装胶l l用滴管吸取凝胶用滴管吸取凝胶用滴管吸取凝胶用滴管吸取凝胶沿管壁沿管壁装入玻璃管中，检查管内装入玻璃管中，检查管内装入玻璃管中，检查管内装入玻璃管中，检查管内无气泡无气泡，加完凝胶后沿管壁缓缓注入几滴蒸馏水，加完凝胶后沿管壁缓缓注入几滴蒸馏水，加完凝胶后沿管壁缓缓注入几滴蒸馏
5、水，加完凝胶后沿管壁缓缓注入几滴蒸馏水，聚合约聚合约聚合约聚合约40-6040-60分钟；分钟；分钟；分钟；l l时间到后，轻轻取下管底部的橡皮塞和时间到后，轻轻取下管底部的橡皮塞和时间到后，轻轻取下管底部的橡皮塞和时间到后，轻轻取下管底部的橡皮塞和ParaFilmParaFilm膜，用滤纸吸取凝胶上方水层，将凝胶管垂直插膜，用滤纸吸取凝胶上方水层，将凝胶管垂直插膜，用滤纸吸取凝胶上方水层，将凝胶管垂直插膜，用滤纸吸取凝胶上方水层，将凝胶管垂直插入电泳槽圆孔中并尽量使各管高度一致，其余孔入电泳槽圆孔中并尽量使各管高度一致，其余孔入电泳槽圆孔中并尽量使各管高度一致，其余孔入电泳槽圆孔中并尽量使各
6、管高度一致，其余孔用胶塞堵住，电泳槽内加注电泳液；用胶塞堵住，电泳槽内加注电泳液；用胶塞堵住，电泳槽内加注电泳液；用胶塞堵住，电泳槽内加注电泳液；2021/4/2673. 加样：加样： 用用微微量量注注射射器器吸吸取取20/50m ml 的的样样品品（含含溴溴酚酚蓝蓝），沿沿内内壁壁缓缓慢慢加加入入，注注意意观观察察样样品品的的状状态态变化；变化；4. 电泳：电泳：负负极极在在上上，正正极极在在下下，电电流流调调节节到到2mA/管管，开开通通电电源源；2min后后，电电流流调调节节到到5mA/管管，电电泳泳约约1h左左右右，直直到到溴溴酚酚蓝蓝跑跑到凝胶底部。到凝胶底部。2021/4/2685
7、. 剥胶剥胶 2021/4/2696. 固定与染色：固定与染色：将取下的胶条放入染色液中，在室将取下的胶条放入染色液中，在室温下，固定染色温下，固定染色10min。7. 脱色：脱色：将染色完毕的胶条用自来水冲洗后将染色完毕的胶条用自来水冲洗后浸泡在脱色液中；浸泡在脱色液中；8. 观察并图示记录实验结果观察并图示记录实验结果。2021/4/2610l9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/252024/9/25Wednesday, September 25, 2024l10、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/252024/9/252024/9/259/25/2024 2:
8、15:50 AMl11、人总是珍惜为得到。2024/9/252024/9/252024/9/25Sep-2425-Sep-24l12、人乱于心，不宽余请。2024/9/252024/9/252024/9/25Wednesday, September 25, 2024l13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/252024/9/252024/9/252024/9/259/25/2024l14、抱最大的希望，作最大的努力。25 九月 20242024/9/252024/9/252024/9/25l15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月 242024/9/252024/9/2520
9、24/9/259/25/2024l16、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/252024/9/2525 September 2024l17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/252024/9/252024/9/252024/9/25l9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。25-9月-2425-9月-24Wednesday, September 25, 2024l10、低头要有勇气，抬头要有低气。*9/25/2024 2:15:50 AMl11、人总是珍惜为得到。25-9月-24*Sep-2425-Sep-24l12、人乱于心，不宽余请。*Wednesday, Sep
10、tember 25, 2024l13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。25-9月-2425-9月-24*25 September 2024l14、抱最大的希望，作最大的努力。25 九月 2024*25-9月-24l15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月 24*25-9月-24*25 September 2024l16、业余生活要有意义，不要越轨。*9/25/2024l17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。*25-9月-24谢谢大家谢谢大家2021/4/2612l9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/252024/9/25Wednesday, September
11、25, 2024l10、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/252024/9/252024/9/259/25/2024 2:15:50 AMl11、人总是珍惜为得到。2024/9/252024/9/252024/9/25Sep-2425-Sep-24l12、人乱于心，不宽余请。2024/9/252024/9/252024/9/25Wednesday, September 25, 2024l13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/252024/9/252024/9/252024/9/259/25/2024l14、抱最大的希望，作最大的努力。25 九月 20242024/9/252024/9/252024/9/25l15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月 242024/9/252024/9/252024/9/259/25/2024l16、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/252024/9/2525 September 2024l17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/252024/9/252024/9/252024/9/25谢谢大家谢谢大家2021/4/2613
