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1、第十二章第十二章 钙、磷、镁和微钙、磷、镁和微量元素检验量元素检验第一节第一节 概概 述述 第二节第二节 钙、磷、镁和钙、磷、镁和 微量元微量元素测定素测定第一节第一节 概概 述述一、钙、磷代谢及调节一、钙、磷代谢及调节（一）含量与分布一）含量与分布钙钙是是体体内内含含量量最最多多的的无无机机盐盐，占占体体重重的的1.5%2%，总总量量约约7001400g，其其次次是是磷磷，占占体体重重0.8%1.2%，总总量量约约400800g。99%以以上上的的钙钙和和86%以以上上的的磷磷是是以以羟磷灰石形式沉积于骨、牙。羟磷灰石形式沉积于骨、牙。（二）吸收与排泄（二）吸收与排泄吸吸收收：在在pH较较低
2、低的的小小肠肠上上段段，钙钙的的吸吸收收率率随随年年龄龄的的增增长长而而降降低低，每每增增加加10岁岁减减少少5%10%，婴婴儿儿吸吸收收率率可可达达50%以以上上，儿儿童童40%，成成人人20%左左右右，故故老老人人易易发发生生骨骨质质疏疏松症。松症。磷的吸收率约磷的吸收率约70%，低磷时可达，低磷时可达90%。排泄：排泄：主要通过肠道和肾脏。主要通过肠道和肾脏。钙：钙：80%肠道肠道20%肾脏肾脏磷：磷：30%肠道肠道70%肾脏肾脏（三）血钙与血磷（三）血钙与血磷血血液液中中钙钙几几乎乎全全部部存存在在于于血血浆浆，正正常常 血血 清清 钙钙 2.25 2.75mmol/L（ 911mg/
3、dl）。）。离子钙离子钙50%可扩散钙可扩散钙血钙血钙H+HCO3柠檬酸钙柠檬酸钙碳酸氢钙碳酸氢钙结合钙结合钙50%蛋白结合钙蛋白结合钙非扩散钙非扩散钙发发挥挥生生理理作作用用的的是是离离子子钙钙，但但临临床床实实验验室室测测定定的的大大多多数数是是总总钙钙。血血浆浆中中Ca2、H、HCO3的关系可用下式表示。的关系可用下式表示。血血磷磷是是指指血血液液中中的的无无机机磷磷酸酸盐盐（HPO42、 H2PO4） 正正 常常 人人 血血 清清 无无 机机 磷磷 0.97 1.61mmol/L（35mg/dl），儿童稍高。），儿童稍高。HHCO3Ca2KCaP=3540大大于于40骨骨盐盐沉沉积积，
4、有有利利于于骨骨钙钙化化。小小于于35骨盐溶解。骨盐溶解。（四）钙、磷生理功能（四）钙、磷生理功能钙：钙：1.参与血液凝固。参与血液凝固。2.参与肌肉收缩。参与肌肉收缩。3.维持神经肌肉应激性。维持神经肌肉应激性。4.作为第二信使。作为第二信使。磷：磷：1.作为核酸、磷脂、磷蛋白合成的作为核酸、磷脂、磷蛋白合成的原料。原料。2.参与高能磷酸化合物的合成。参与高能磷酸化合物的合成。3.构成核苷酸辅酶。构成核苷酸辅酶。4.构成磷酸盐缓冲对。构成磷酸盐缓冲对。（五）钙、磷代谢调节（五）钙、磷代谢调节1.维生素维生素D3（VitD3）D325-OHD31，25-（OH）2D3促促进进肠肠道道对对钙钙、
5、磷磷的的吸吸收收；促促进进肾肾小小管管对对钙钙、磷的重吸收；协同磷的重吸收；协同PTH促进骨重建。促进骨重建。肝肝肾肾1-羟化酶羟化酶25-羟化酶羟化酶2.甲甲状状旁旁腺腺素素（PTH）甲甲状状旁旁腺腺主主细细胞胞分分泌泌的的84肽肽。促促进进溶溶骨骨作作用用，促促进进间间充充质质细细胞胞转转化化成成破破骨骨细细胞胞，抑抑制制破破骨骨细细胞胞转转化化为为成成骨骨细细胞胞；促促进肾小管对钙的重吸收，抑制磷的重吸收。进肾小管对钙的重吸收，抑制磷的重吸收。3.降降钙钙素素（CT）甲甲状状腺腺滤滤泡泡旁旁细细胞胞分分泌泌的的32肽肽，与与PTH拮拮抗抗。促促进进成成骨骨作作用用，抑抑制制间间充充质质细
6、细胞胞转转化化为为破破骨骨细细胞胞，促促进进破破骨骨细细胞胞转转化化为为成成骨骨细胞；抑制肾小管对钙、磷的重吸收细胞；抑制肾小管对钙、磷的重吸收。PTH间充质细胞间充质细胞破骨细胞破骨细胞成骨细胞成骨细胞CT二、镁代谢和生理功能二、镁代谢和生理功能（一）镁代谢（一）镁代谢1.镁镁的的含含量量与与分分布布占占体体重重的的0.03%，正正常常成成人人镁镁的的总总量量2028g，其其中中60%存存在在于于骨骨骼骼，20%30%存存在在于于骨骨骼骼肌肌，其其余余10%存存在在于于其其它它组组织织中中。体体液液中中细细胞胞内内液液镁镁的的含含量量占占总总量量的的39%，而细胞外液仅占，而细胞外液仅占1%
7、。2.血镁血镁血浆镁的浓度约血浆镁的浓度约0.671.23mmol/L，存在形式主要有三种，存在形式主要有三种。离子镁离子镁55%血镁血镁碳酸氢镁、柠檬酸镁、磷酸镁等碳酸氢镁、柠檬酸镁、磷酸镁等15%蛋白结合镁蛋白结合镁30%发挥生理作用的是离子镁。发挥生理作用的是离子镁。3.吸吸收收与与排排泄泄食食物物镁镁含含量量丰丰富富，人人体体每每天天需需要要量量300350mg，镁镁的的吸吸收收主主要要在在小小肠肠，吸吸收收率率只只有有30%40%，吸吸收收率率与与肠肠腔腔中中镁镁的的含量成反比。体内镁的排泄主要通过肾脏。含量成反比。体内镁的排泄主要通过肾脏。（二）镁的生理功能（二）镁的生理功能1.作
8、作为为酶酶的的辅辅助助因因子子体体内内约约300种种酶酶的的辅辅助因子是助因子是Mg2+。2.维持神经肌肉的应激性维持神经肌肉的应激性Mg2+能降低神能降低神经肌肉的应激性。经肌肉的应激性。三、微量元素与疾病三、微量元素与疾病（一）体内化学元素组成和分类（一）体内化学元素组成和分类人体约含有人体约含有50多种元素。多种元素。主要元素主要元素含量含量0.1g/kg体重体重C、H、O、N、S、P、Ca、K、Na、Cl、Mg等等必需的必需的Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Ni、Se、I、F等等14种种微量元素微量元素含量含量0.1g/kg体重体重非必需的非必需的Si、As、Rb、B、Al等等有害的有害
9、的Bi、Hg、Pb、Be等等人体元素人体元素（二二）必必需需微微量量元元素素对对人人体体各各种种生生命命活活动动的的影响影响1.促促进进机机体体的的生生长长发发育育铁铁、铜铜、锌锌、锰锰、钴、碘等，作为酶和激素的重要组成成分。钴、碘等，作为酶和激素的重要组成成分。2.对对神神经经系系统统结结构构和和功功能能的的影影响响铁铁、铜铜、锌锌、锰锰、钴钴、碘碘等等缺缺乏乏时时可可导导致致神神经经系系统统结结构构和功能的异常，智力低下。和功能的异常，智力低下。3.对对内内分分泌泌系系统统的的影影响响铜铜、铁铁、锌锌、锰锰、铬等元素的缺乏或过量可引起内分泌功能失常。铬等元素的缺乏或过量可引起内分泌功能失常
10、。4.对对免免疫疫系系统统的的影影响响铁铁、铜铜、锌锌等等缺乏时可降低机体的免疫力。缺乏时可降低机体的免疫力。5.对心血管疾病及创伤的影响对心血管疾病及创伤的影响适量的适量的锌、锰、铬、硒等元素有利于心血管的结锌、锰、铬、硒等元素有利于心血管的结构和功能。如食物中的锌构和功能。如食物中的锌/镉比与高血压的镉比与高血压的发生和预后密切相关。多种微量元素还能发生和预后密切相关。多种微量元素还能影响核酸和蛋白质的生物合成，故有利于影响核酸和蛋白质的生物合成，故有利于创伤的愈合和疾病的恢复。创伤的愈合和疾病的恢复。一、钙的测定一、钙的测定血钙测定方法很多。血钙测定方法很多。化学法化学法滴定法（氧化还原
11、滴定，络合滴定）；滴定法（氧化还原滴定，络合滴定）；比色法（邻甲酚酞络合法，甲基麝香比色法（邻甲酚酞络合法，甲基麝香草酚蓝法）。草酚蓝法）。物理法物理法火焰光度法；火焰光度法；ISE法；法；原子吸收分原子吸收分光光度法；光光度法；同位素稀释质谱法。同位素稀释质谱法。血钙测定血钙测定第二节第二节 钙、磷、镁和微量元素测钙、磷、镁和微量元素测定定1.EDTA-Na2络络合合滴滴定定法法在在碱碱性性溶溶液液中中，血血清清钙钙与与钙钙红红指指示示剂剂结结合合成成可可溶溶性性的的复复合合物物，使使溶溶液液呈呈淡淡红红色色，EDTA-Na2对对钙钙有有很很大大的的亲亲和和力力，能能与与复复合合物物中中的的
12、钙钙络络合合，使使钙钙红红指指示示剂剂重重新新游游离离，溶溶液液变变蓝蓝色，根据色，根据EDTA-Na2滴定用量可计算出血清钙含量。滴定用量可计算出血清钙含量。钙钙钙红钙红钙钙-钙红复合物钙红复合物淡红色淡红色钙钙-钙红复合物钙红复合物EDTA-Na2EDTACa钙红钙红蓝色蓝色钙钙指指示示剂剂除除钙钙红红外外，还还有有依依地地铬铬黑黑T（红红蓝蓝），钙钙黄黄绿绿素素（黄黄绿绿），紫紫红红酸酸铵铵（红红紫紫）。钙钙红红指指示示剂剂终终点点明明显显，不不受受血血 清清 镁镁 干干 扰扰 ， 镁镁 在在 强强 碱碱 性性 条条 件件 下下 生生 成成Mg（OH）2，指指示示剂剂在在强强碱碱性性条条
13、件件下下不不稳稳定，加指示剂后应立即滴定。定，加指示剂后应立即滴定。操操作作简简便便，无无需需特特殊殊仪仪器器设设备备，适适合合于于基基层层医医院院，但但终终点点判判断断人人为为误误差差较较大大，溶溶血血、黄疸影响终点判断。黄疸影响终点判断。2.邻邻甲甲酚酚酞酞络络合合酮酮法法（O-CPC）邻邻甲甲酚酚酞酞络络合合酮酮是是一一种种金金属属络络合合染染料料，也也是是一一种种酸酸碱碱指指示示剂剂，在在碱碱性性溶溶液液中中能能与与钙钙和和镁镁螯螯合合，生生成成紫紫红红色色螯螯合合物物（吸吸收收峰峰575nm），作作钙钙测定时，加入测定时，加入8-羟基喹啉羟基喹啉消除镁的干扰。消除镁的干扰。Mg2+8
14、-羟基喹啉羟基喹啉可溶性络合物可溶性络合物Ca2+邻甲酚酞络合酮邻甲酚酞络合酮紫红色螯合物紫红色螯合物灵灵敏敏度度很很高高，试试管管、器器皿皿如如有有微微量量的的钙钙污污染染亦亦会会引引起起误误差差，最最好好使使用用一一次次性性试试管管，所所有试剂置塑料瓶中保存。有试剂置塑料瓶中保存。3.甲甲基基麝麝香香草草酚酚蓝蓝法法（MTB）血血清清钙钙 在在 碱碱 性性 溶溶 液液 中中 与与 甲甲 基基 麝麝 香香 草草 酚酚 蓝蓝（MTB）结结合合，生生成成一一种种蓝蓝色色络络合合物物，加加入入8-羟基喹啉消除镁干扰。羟基喹啉消除镁干扰。显显色色稳稳定定，线线性性范范围围大大，溶溶血血、黄黄疸疸无干
15、扰无干扰。4.离离子子选选择择电电极极法法（ISE）此此法法迅迅速速、简简便便、灵灵敏敏度度高高、重重复复性性好好，并并可可同同时时测测定定总总钙钙和和离离子子钙钙，离离子子钙钙测测定定最最好好用用血血清清，不不用抗凝剂，在急需检测结果时可用肝素抗凝。用抗凝剂，在急需检测结果时可用肝素抗凝。【正常参考值】【正常参考值】成人总钙成人总钙2.252.75mmol/L离子钙离子钙1.151.42mmol/L二、无机磷测定二、无机磷测定目目前前还还不不能能直直接接测测定定人人体体内内的的磷磷元元素素，各各种种方方法法都都是是直直接接地地分分析析两两种种磷磷酸酸盐盐阴阴离离子子（HPO42、H2PO4）
16、，常常用用的的方方法有磷钼酸法，染料法，酶法。法有磷钼酸法，染料法，酶法。1.磷磷钼钼酸酸法法以以三三氯氯醋醋酸酸沉沉淀淀蛋蛋白白，在在无无蛋蛋白白滤滤液液中中加加入入钼钼酸酸铵铵试试剂剂，与与无无机机磷磷结结合合成成磷磷钼钼酸酸，再再以以硫硫酸酸亚亚铁铁为为还还原原剂剂，还还原原成成钼蓝。钼蓝。（NH4）6Mo7O243H2SO44H2O7H2MoO43（NH4）2SO412H2MoO4H3PO412MoO3H3PO412H2O12MoO3H3PO4还原剂还原剂钼蓝钼蓝还还原原剂剂有有很很多多种种，1-氨氨基基-2-萘萘酚酚-4-磺磺酸酸，应应用用历历史史较较久久，试试剂剂不不太太稳稳定定，
17、显显色色时时间间长长，灵灵敏敏度度不不高高。氯氯化化亚亚锡锡，灵灵敏敏度度较较高高，颜颜色色强强度度随随显显色色时时间间时时间间而而改改变变，偏偏离离Beer定定律律。硫硫酸酸亚亚铁铁，显显色较稳定。色较稳定。2.孔孔雀雀绿绿直直接接显显色色法法血血清清经经浓浓尿尿素素溶溶液液稀稀释释后后，用用孔孔雀雀绿绿-钼钼酸酸试试剂剂显显色色，加加入入吐吐温温-20使使标标准准液液与与血血清清标标本本显显色色反反应应速速度度接近。接近。灵灵敏敏度度较较高高，但但影影响响因因素素多多，重重复复性性差，显色不稳定差，显色不稳定。3.酶法酶法GnH3PO4Gn1G-1-PG-1-PG-6-PG-6-PNADP
18、+6-磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖酸NADPH次黄苷次黄苷H3PO4次黄嘌呤次黄嘌呤R-1-P次黄嘌呤次黄嘌呤H2OO2尿酸尿酸H2O2H2O2N-乙基乙基-N-（3-甲基苯基）甲基苯基）-N-乙酰乙胺乙酰乙胺紫红色复合物紫红色复合物发色底物发色底物555nm糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶葡萄糖磷酸变位酶葡萄糖磷酸变位酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶嘌呤核苷磷酸化酶嘌呤核苷磷酸化酶黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶POD三、镁的测定三、镁的测定化学法化学法钙镁试剂比色法，达旦黄钙镁试剂比色法，达旦黄比色法，甲基麝香草酚蓝比色法，甲基麝香草酚蓝比色法。传统方法比色法。传统方法测定方法测定方法物理法物理法原子吸收
19、分光光度法，原子吸收分光光度法，（参考方法）同位素稀释中（参考方法）同位素稀释中子活化法（决定性方法）子活化法（决定性方法）酶法酶法新进展，将成为新的自动新进展，将成为新的自动方法方法1.钙钙镁镁试试剂剂（Calmagite）比比色色法法血血清清镁镁在在碱碱性性条条件件下下与与钙钙镁镁试试剂剂生生成成紫紫红红色色络络合合物物，颜颜色色深深浅浅与与镁镁浓浓度度成成正正比比。加加入入EGTA乙乙二二醇醇双双（-氨氨基基乙乙醚醚）-N，N，N，N-四四乙乙酸酸，可可消消除除钙钙的的干干扰扰。吸吸收收峰峰520nm。显色稳定，操作简便，快速，可手工显色稳定，操作简便，快速，可手工操作，也可用于自动化分
20、析。操作，也可用于自动化分析。2.原原子子吸吸收收分分光光光光度度法法血血清清经经酸酸性性氯氯化化镧镧溶溶液液作作50倍倍稀稀释释，直直接接用用原原子子吸吸收收分分光光光光度度计计检检测测285.2nm的吸光度。的吸光度。操操作作简简便便，准准确确，精精密密度度好好，可可同同时时进进行行钙钙的的测定测定422.7nm。3.酶法酶法右旋右旋-葡萄糖葡萄糖MgATP右旋右旋-葡萄糖葡萄糖-6-磷酸磷酸MgADP右旋右旋-葡萄糖葡萄糖-6-磷酸磷酸NADP+右旋右旋-葡萄糖内酯葡萄糖内酯-6-磷酸磷酸NADPH【正常参考值】【正常参考值】0.671.23mmol/LHKG6PD四、铁的测定四、铁的测
21、定血清铁测定血清铁测定血清铁测定血清铁测定血清总铁结合力（血清总铁结合力（TIBC）测定）测定TIBC是指可与血清运铁蛋白结合的铁的最大量。是指可与血清运铁蛋白结合的铁的最大量。血清铁和总铁结合力的百分比称为铁饱和度。血清铁和总铁结合力的百分比称为铁饱和度。铁饱和度铁饱和度100%测定方法，亚铁嗪比色法。测定方法，亚铁嗪比色法。血清铁血清铁总铁结合力总铁结合力运铁蛋白运铁蛋白-（Fe3+）2运铁蛋白运铁蛋白2Fe3+Fe3+还原剂还原剂Fe2+Fe2+3亚铁嗪亚铁嗪Fe2+-亚铁嗪（紫红色）亚铁嗪（紫红色）562nmTIBC测测定定，在在血血清清中中加加入入一一定定铁铁标标准准液液，使使之之与
22、与未未带带铁铁的的运运铁铁蛋蛋白白结结合合，多多余余的的铁铁用用轻轻质质碳碳酸酸镁镁粉末吸附除去，然后测定血清总铁含量。粉末吸附除去，然后测定血清总铁含量。【正常参考值】【正常参考值】1.血清铁血清铁男男11.631.3mol/L女女9.030.4mol/L2.血清总铁结合力血清总铁结合力48.371.6mol/L3.铁饱和度铁饱和度20%55%酸性酸性本章小结1.钙钙、磷磷代代谢谢和和调调节节（含含量量、分分布布及及生生理理功功能能，吸吸收收与与排排泄泄，PTH、CT、1，25-（OH）2-D3对钙磷代谢的调节）对钙磷代谢的调节）。2.微量元素与疾病（铁、锌、铜、硒）微量元素与疾病（铁、锌、
23、铜、硒）。3.血血清清钙钙测测定定离离子子钙钙的的测测定定（离离子子选选择择电电极极法法），总总钙钙测测定定（邻邻甲甲酚酚肽肽络络合合酮酮法法、甲甲基基麝麝香香草草酚酚蓝蓝法法、EDTA络络合合滴滴定定法法、原原子子吸吸收收分分光光光光度法）原理及方法评价度法）原理及方法评价。4.血血清清磷磷的的测测定定（磷磷钼钼酸酸还还原原法法、酶酶法法）原原理及方法评价理及方法评价。5.铁的测定（亚铁嗪比色法）原理。铁的测定（亚铁嗪比色法）原理。复习思考题复习思考题1.体内含量最多的无机盐是什么？体内含量最多的无机盐是什么？2.什么是微量元素？什么是微量元素？3.简简述述血血清清总总钙钙测测定定（邻邻甲甲
24、酚酚肽肽络络合酮法）原理及注意事项合酮法）原理及注意事项4.什么是铁饱和度？什么是铁饱和度？参考文献：参考文献：现代临床生物化学检验现代临床生物化学检验主编主编张秀明张秀明人民军医出版社人民军医出版社临床生物化学及生物化学检验临床生物化学及生物化学检验主编主编周周新新人民卫生出版社人民卫生出版社结束结束预习内容：预习内容：第十三章第十三章 肝功能检验肝功能检验OgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp
25、#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5
26、H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkV
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