猪瘟耐热冻干保护剂活疫苗

猪瘟耐热冻干保护剂活疫苗王王王王 栋栋栋栋 研究员研究员研究员研究员中国兽医药品监察所中国兽医药品监察所中国兽医药品监察所中国兽医药品监察所一一. .耐热冻干保护剂基质的分类耐热冻干保护剂基质的分类 二二. . 耐热冻干保护剂作用机理耐热冻干保护剂作用机理三三. . 耐热保护剂在耐热保护剂在配制配制过程中注意事项过程中注意事项四四. . 耐热保护剂耐热保护剂冻干工艺的优化冻干工艺的优化五五. .耐热冻干保护剂活疫苗在冻干过程中常见耐热冻干保护剂活疫苗在冻干过程中常见 异常现象的处理异常现象的处理1. 1. 耐热保护剂特性耐热保护剂特性–有免疫活性但无药理活性有免疫活性但无药理活性–能在冻干和保存时维持疫苗的稳定性能在冻干和保存时维持疫苗的稳定性–在初次干燥时适宜的温度下疫苗不倒塌在初次干燥时适宜的温度下疫苗不倒塌–低成本易获取低成本易获取–易灭菌易灭菌–可溶性可溶性–外形美观外形美观—. . 耐热冻干保护剂基质的分类耐热冻干保护剂基质的分类2. 2. 按相对分子量分类按相对分子量分类n低分子化合物低分子化合物——提高微生物存活率形成均一悬液。

提高微生物存活率形成均一悬液 ① ①酸性物质：谷氨酸、天冬氨酸、乳酸酸性物质：谷氨酸、天冬氨酸、乳酸 ② ②中性物质：乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇中性物质：乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇 ③ ③碱性物质：精氨酸、组氨酸碱性物质：精氨酸、组氨酸n高分子化合物高分子化合物——对微生物保护作用，促进升华形对微生物保护作用，促进升华形成耐热骨架阻断热传导和热辐射如：白蛋白、成耐热骨架阻断热传导和热辐射如：白蛋白、明胶、蛋白胨、脱脂奶粉明胶、蛋白胨、脱脂奶粉明胶明胶ØSigma公司：公司：175、、225、、325Ø水解明胶：德国、美国水解明胶：德国、美国Ø国产明胶（北京、上海）国产明胶（北京、上海）脱脂奶粉脱脂奶粉ØDifco脱脂奶粉脱脂奶粉Ø国产脱脂奶粉国产脱脂奶粉Ø制备酸奶用，无抗生物素制备酸奶用，无抗生物素Ø食品用脱脂奶粉食品用脱脂奶粉Ø 工业用，沉淀剂、絮凝剂工业用，沉淀剂、絮凝剂u脱脂奶粉、明胶（脱脂奶粉、明胶（175175、、225225、、325325）在冻干过程中）在冻干过程中的作用的作用Ø促进升华促进升华Ø易取得均质产品易取得均质产品Ø加热灭菌加热灭菌Ø扩大细胞相互间的距离扩大细胞相互间的距离3. 按保护剂功能和性质分类按保护剂功能和性质分类 （（1）耐热冻干保护剂）耐热冻干保护剂 疫苗在冻结和干燥过程中，防止活性组分发生变疫苗在冻结和干燥过程中，防止活性组分发生变性。

如：海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯酮（性如：海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯酮（PVP）等）等 （（2）填充剂）填充剂 防止组分随水蒸气一起升华逸散如：甘露醇、明防止组分随水蒸气一起升华逸散如：甘露醇、明胶等胶等（（3 3）抗氧化剂）抗氧化剂Ø自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧Ø阻断冻干样品中氧化链式反应阻断冻干样品中氧化链式反应Ø抑制氧化酶的活性，防止样品在冷冻干燥及储藏过抑制氧化酶的活性，防止样品在冷冻干燥及储藏过程中氧化变质如硫代硫酸钠程中氧化变质如硫代硫酸钠 、维生素、维生素E E、维生素、维生素C C （（4 4）酸碱调整剂）酸碱调整剂 将生物制品将生物制品pHpH调整到活性物质的最稳定范围进行冷调整到活性物质的最稳定范围进行冷冻、干燥如：磷酸二氢钾、磷酸氢二钠冻、干燥如：磷酸二氢钾、磷酸氢二钠4. 4. 按物质的种类分类按物质的种类分类 n糖糖/ /多元醇类多元醇类 n聚合物类聚合物类n表面活性剂类表面活性剂类n其它添加剂类其它添加剂类n糖糖/ /多元醇类多元醇类① ① 单糖：葡萄糖、半乳糖单糖：葡萄糖、半乳糖 ② ② 低聚糖：蔗糖、海藻糖低聚糖：蔗糖、海藻糖③ ③ 多元醇：甘露醇多元醇：甘露醇 、山梨醇、山梨醇 、丙三醇、丙三醇功能和作用功能和作用: :Ø糖与生物制品活性组分的分子形成氢键而代替了糖与生物制品活性组分的分子形成氢键而代替了原有水的位置起保护作用原有水的位置起保护作用Ø低聚糖：低温保护功能和脱水保护作用低聚糖：低温保护功能和脱水保护作用Ø多元醇和糖一样，官能团也是羟基多元醇和糖一样，官能团也是羟基Ø海藻糖海藻糖①①具有相对较高的玻璃化转变温度。

具有相对较高的玻璃化转变温度海藻糖海藻糖—蛋蛋白质白质—水微冰晶的形成而提高，有效防止了水水微冰晶的形成而提高，有效防止了水对玻璃化态的增塑作用对玻璃化态的增塑作用②②较弱的吸湿性较弱的吸湿性③③内部氢键少，有利于蛋白质分子之间形成氢键内部氢键少，有利于蛋白质分子之间形成氢键④④化学活性非常低化学活性非常低Ø甘露醇甘露醇①①白色白色 结晶粉末，无臭、味甜，水中易溶结晶粉末，无臭、味甜，水中易溶②②无菌滤液稳定，不易被氧化无菌滤液稳定，不易被氧化③③提供支持结构提供支持结构④④不与活性组分发生反应不与活性组分发生反应⑤⑤1.4%PVP%PVP冻干样品脆断力为冻干样品脆断力为142g142g，有收缩迹象，与，有收缩迹象，与甘露醇联合使用，抗断裂的强度可提高甘露醇联合使用，抗断裂的强度可提高3 3～～2525倍，倍，保证冻干物料的颜色和质地均匀，没有收缩保证冻干物料的颜色和质地均匀，没有收缩Ø山梨醇山梨醇 ①① 山梨醇是甘露醇的同分异构体，但其溶解度比山梨醇是甘露醇的同分异构体，但其溶解度比甘露醇大，在常温下黏稠状透明液体，有旋光性；甘露醇大，在常温下黏稠状透明液体，有旋光性；略有甜味，具有吸湿性，高温下不稳定。

在冷冻略有甜味，具有吸湿性，高温下不稳定在冷冻干燥配方中，山梨醇用作填充剂干燥配方中，山梨醇用作填充剂 ②② 与与PVPk30PVPk30合用减少产品裂纹，易碎性合用减少产品裂纹，易碎性n聚合物类聚合物类如：聚乙烯毗咯烷酮、葡聚糖、牛血清白蛋白如：聚乙烯毗咯烷酮、葡聚糖、牛血清白蛋白Ø聚合物类具有以下的性质：聚合物类具有以下的性质：①① 聚合物在冻结过程中优先析出聚合物在冻结过程中优先析出②② 具有一定的表面活性具有一定的表面活性③③ 在蛋白质分子之间产生位阻在蛋白质分子之间产生位阻④④ 提高溶液黏度提高溶液黏度⑤⑤ 显著提高玻璃化转变温度显著提高玻璃化转变温度⑥⑥ 抑制小分子赋形剂（如蔗糖）的结晶抑制小分子赋形剂（如蔗糖）的结晶⑦⑦ 抑制溶液抑制溶液pHpH值变化值变化Ø聚乙烯毗咯烷酮（聚乙烯毗咯烷酮（PVP K30PVP K30））①① 常被用作澄清剂、色素稳定剂和胶体稳定剂常被用作澄清剂、色素稳定剂和胶体稳定剂②② PVPPVP对生物材料的低温保存和冷冻干燥，都是很对生物材料的低温保存和冷冻干燥，都是很好的保护剂好的保护剂③③ 它在脱水干燥过程中又是很好的填充剂，对生物它在脱水干燥过程中又是很好的填充剂，对生物制品起到很强的支撑作用制品起到很强的支撑作用④④ 在含有缓冲剂的乳酸脱氢酶配方中，在含有缓冲剂的乳酸脱氢酶配方中，1010％的％的PVPPVP因能抑制磷酸氢二钠的结晶，从而抑制了系统的因能抑制磷酸氢二钠的结晶，从而抑制了系统的pHpH降低降低n表面活性剂类表面活性剂类 降低界面的张力，亲水、亲油基组成的化合物。

降低界面的张力，亲水、亲油基组成的化合物Ø表面活性剂在冻结和脱水过程中降低冰表面活性剂在冻结和脱水过程中降低冰- -水界面水界面张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂和重褶皱剂的作用中对活性组分起到润湿剂和重褶皱剂的作用Ø表面活性剂可分为离子型和非离子型凡是溶于表面活性剂可分为离子型和非离子型凡是溶于水时能电离成离子的，称为离子型表面活性剂，水时能电离成离子的，称为离子型表面活性剂，否则，称为非离子型表面活性剂否则，称为非离子型表面活性剂Ø在冻干生物制品测定长期储藏中，表面活性剂并在冻干生物制品测定长期储藏中，表面活性剂并没有保护作用没有保护作用 n氨基酸类保护剂氨基酸类保护剂Ø氨基酸是蛋白质的基本构成单位，其中最主要的氨基酸是蛋白质的基本构成单位，其中最主要的是是α-α-氨基酸它是由一个氨基（氨基酸它是由一个氨基（-NH2-NH2）、一个）、一个羧基（羧基（-COOH-COOH）、一个氢原子（）、一个氢原子（-H-H）和一个）和一个R R基团基团（（-R-R）连接在一个）连接在一个αα碳原子所组成碳原子所组成 Ø常用的氨基酸类的保护剂：甘氨酸、谷氨酸、精常用的氨基酸类的保护剂：甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、组氨酸氨酸、组氨酸Ø甘氨酸是最好的填充剂甘氨酸是最好的填充剂Ø氨基酸氨基酸①① 甘氨酸、谷氨酸或谷氨酸钠甘氨酸、谷氨酸或谷氨酸钠②② L-L-半胱氨酸半胱氨酸③③ L-L-组氨酸组氨酸④④ L-L-精氨酸精氨酸 ⑤⑤ 复合氨基酸（复合氨基酸（199、、MEM））Ø甘氨酸甘氨酸①①低浓度甘氨酸可通过抑制低浓度甘氨酸可通过抑制1010或或100mol/L100mol/L磷酸缓冲磷酸缓冲盐结晶，所致盐结晶，所致pHpH值的改变而阻止蛋白质药物变性值的改变而阻止蛋白质药物变性②②可阻止冻干过程中重组人生长激素的聚集可阻止冻干过程中重组人生长激素的聚集③③能升高成品的塌陷温度，阻止因塌陷而引起的蛋能升高成品的塌陷温度，阻止因塌陷而引起的蛋白质药物的破坏白质药物的破坏n不同氨基酸对微生物的保护不同氨基酸对微生物的保护Ø甘氨酸、谷氨酸钠－病毒、细菌、甘氨酸、谷氨酸钠－病毒、细菌、HVTØL L－精氨酸－－精氨酸－POX、、HVT、、PPVØL-L-半胱氨酸－半胱氨酸－ND、、IBD、、IBVØL-L-组氨酸－组氨酸－MD、、IBD、、IBVn其它添加剂类其它添加剂类 （（1 1）抗氧化剂）抗氧化剂 （（2 2）缓冲剂）缓冲剂 （（3 3）冻干加速剂）冻干加速剂Ø抗氧化剂抗氧化剂①①自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧，使自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧，使冻干样品物料不被氧化冻干样品物料不被氧化②② 给出电子或氢原子，阻断冻干样品中的氧化链给出电子或氢原子，阻断冻干样品中的氧化链式反应式反应③③ 通过抑制氧化酶的活性而防止冻干样品的氧化通过抑制氧化酶的活性而防止冻干样品的氧化。

如：维生素如：维生素E E、维生素、维生素C C、硫代硫酸钠、硫脲、硫代硫酸钠、硫脲. .Ø缓冲剂缓冲剂蛋白质具有两性电解质性质，既能和酸又能和碱作蛋白质具有两性电解质性质，既能和酸又能和碱作用在中性环境中，大多数蛋白质是稳定的用在中性环境中，大多数蛋白质是稳定的①① 由于由于蛋白质溶液在冻结过程中，溶液的浓度逐渐蛋白质溶液在冻结过程中，溶液的浓度逐渐升高在高浓度时可改变溶液的升高在高浓度时可改变溶液的PHPH，，pHpH值变化值变化4 4个单个单位导致蛋白质变性，使生物制品失活位导致蛋白质变性，使生物制品失活②②在冻干保护剂配方中，需添加适量缓冲剂如：在冻干保护剂配方中，需添加适量缓冲剂如：磷酸二氢钾、磷酸氢二钠磷酸二氢钾、磷酸氢二钠Ø冻干加速剂冻干加速剂冷冻干燥过程耗时长、耗能多，迫切需要对冻干冷冻干燥过程耗时长、耗能多，迫切需要对冻干循环进行优化，降低生产成本如：叔丁醇循环进行优化，降低生产成本如：叔丁醇叔丁醇是一种小分子醇，与水完全互溶，具有低叔丁醇是一种小分子醇，与水完全互溶，具有低毒性、高蒸气压毒性、高蒸气压叔丁醇在药品水溶液中能起到以下作用：叔丁醇在药品水溶液中能起到以下作用：①①可以降低干燥层阻力，从而加速干燥过程，缩短可以降低干燥层阻力，从而加速干燥过程，缩短干燥时间干燥时间②②溶解难溶于水的药品溶解难溶于水的药品③③使产品具有高的比表面积、好外观，并易于复水使产品具有高的比表面积、好外观，并易于复水④④可提高药品溶液和冻干品的稳定性可提高药品溶液和冻干品的稳定性⑤⑤有一定的抑菌作用有一定的抑菌作用=. 耐热冻干保护剂作用机理耐热冻干保护剂作用机理1 1 冻结过程中低温保护的机理冻结过程中低温保护的机理2 2 干燥过程中的保护机理干燥过程中的保护机理3 3 储藏过程中的保护机理储藏过程中的保护机理1 1 冻结过程中低温保护的机理冻结过程中低温保护的机理““优先作用优先作用””机理认为，蛋白质溶液在达到最大冻机理认为，蛋白质溶液在达到最大冻结浓度之前，优先与水作用（优先水合），而保护结浓度之前，优先与水作用（优先水合），而保护剂优先被排斥在蛋白质区域外（优先排斥）。

这是剂优先被排斥在蛋白质区域外（优先排斥）这是由于保护剂的加入，增大了水分子的表面张力，促由于保护剂的加入，增大了水分子的表面张力，促使了蛋白质分子优先与水分子相互作用在这种情使了蛋白质分子优先与水分子相互作用在这种情况下，蛋白质分子外表面比其体相中有相对较多的况下，蛋白质分子外表面比其体相中有相对较多的水分子和相对较少的保护剂分子，从而也就保护了水分子和相对较少的保护剂分子，从而也就保护了蛋白质的天然构象蛋白质的天然构象 ““优先作用优先作用””机理并不能完全解释用聚合物或蛋机理并不能完全解释用聚合物或蛋白质自身在高浓度时保护蛋白质的现象因此，白质自身在高浓度时保护蛋白质的现象因此，必然存在其他保护作用机理表面张力减小的机必然存在其他保护作用机理表面张力减小的机理可以用于解释表面活性剂对蛋白质溶液冻结过理可以用于解释表面活性剂对蛋白质溶液冻结过程的保护限制蛋白质分子扩散的机理认为，许程的保护限制蛋白质分子扩散的机理认为，许多保护剂都能够提高溶液的黏度，抑制活性分子多保护剂都能够提高溶液的黏度，抑制活性分子的扩散的扩散 2 2 干燥过程中的保护机理干燥过程中的保护机理（（1 1）玻璃态假说）玻璃态假说 在含有保护剂溶液的干燥过程中，当浓度足够大且在含有保护剂溶液的干燥过程中，当浓度足够大且保护剂不发生结晶时，保护剂与活性组分混合物就会保护剂不发生结晶时，保护剂与活性组分混合物就会形成形成Ø玻璃态分为强玻璃、弱玻璃玻璃态分为强玻璃、弱玻璃在玻璃化转变温度以下进行降温，弱玻璃黏度的增加在玻璃化转变温度以下进行降温，弱玻璃黏度的增加比强玻璃来的快。

因此，赋形剂形成弱玻璃要比形成比强玻璃来的快因此，赋形剂形成弱玻璃要比形成强玻璃的保护效果要好得多蔗糖和海藻糖就是因为强玻璃的保护效果要好得多蔗糖和海藻糖就是因为能够形成一种弱玻璃而具有很好的保护作用能够形成一种弱玻璃而具有很好的保护作用 （（2 2）水替代假说）水替代假说 在蛋白质分子中存在大量的氢键，结合水通过氢键在蛋白质分子中存在大量的氢键，结合水通过氢键与蛋白质分子联接当蛋白质在冷冻干燥过程中失与蛋白质分子联接当蛋白质在冷冻干燥过程中失去水分后，保护剂的羟基能够替代蛋白质表面上水去水分后，保护剂的羟基能够替代蛋白质表面上水的羟基，使蛋白质表面形成一层的羟基，使蛋白质表面形成一层““水合层水合层””，这样，这样就可以保护氢键的联结位置不直接暴露在周围环境就可以保护氢键的联结位置不直接暴露在周围环境中，从而保持了蛋白质天然结构和功能的完整性中，从而保持了蛋白质天然结构和功能的完整性 “水替代水替代”假说，当冷冻干燥时，保护剂可与生假说，当冷冻干燥时，保护剂可与生物大分子的失水部位形成氢键，替代保持生物大物大分子的失水部位形成氢键，替代保持生物大分子空间结构和生物活性所必须的水分子，从而分子空间结构和生物活性所必须的水分子，从而减轻了生物大分子冻干损伤减轻了生物大分子冻干损伤 n保护剂对细菌细胞膜的保护保护剂对细菌细胞膜的保护 水分子可通过氢键与细胞膜中磷脂的极性端相连，水分子可通过氢键与细胞膜中磷脂的极性端相连，而且每个磷脂的极性端与其他磷脂分子的极性端而且每个磷脂的极性端与其他磷脂分子的极性端被水分子隔开。

冻干保护剂特别是糖类保护剂分被水分子隔开冻干保护剂特别是糖类保护剂分子上的羟基具有与膜磷脂上的磷酸集团连接形成子上的羟基具有与膜磷脂上的磷酸集团连接形成氢键的能力，从而阻止和限制细胞膜因脱水而融氢键的能力，从而阻止和限制细胞膜因脱水而融合，降低相变温度，使脂膜不易向凝胶相转变而合，降低相变温度，使脂膜不易向凝胶相转变而保持液晶相，增加膜的流动性保持液晶相，增加膜的流动性  n保护剂对蛋白质的保护保护剂对蛋白质的保护 由于蛋白质分子中存在大量的氢键，结合水通过由于蛋白质分子中存在大量的氢键，结合水通过氢键与蛋白质分子联结当蛋白质在冷冻干燥过氢键与蛋白质分子联结当蛋白质在冷冻干燥过程中失去水分后，保护剂的羟基能够替代蛋白质程中失去水分后，保护剂的羟基能够替代蛋白质表面上水的羟基，使蛋白质表面形成一层表面上水的羟基，使蛋白质表面形成一层““水合水合层层””，这样就可以保护氢键的连结位置不直接暴，这样就可以保护氢键的连结位置不直接暴露在周围环境中，从而保持了蛋白质天然结构和露在周围环境中，从而保持了蛋白质天然结构和功能的完整性功能的完整性3 3 储藏过程中的保护机理储藏过程中的保护机理 干燥过程中出现的引起蛋白质变质的时间尺度为小干燥过程中出现的引起蛋白质变质的时间尺度为小时，而对于储藏而言，时间尺度为月或年。

在正确时，而对于储藏而言，时间尺度为月或年在正确冷冻干燥工艺中，要求产品温度接近于其玻璃化转冷冻干燥工艺中，要求产品温度接近于其玻璃化转变温度，而在正确的储藏条件下，环境温度应当比变温度，而在正确的储藏条件下，环境温度应当比其玻璃化转变温度低得多，以获得很长的松弛时间其玻璃化转变温度低得多，以获得很长的松弛时间 n保护剂指导原则保护剂指导原则Ø蛋白质、二糖、氨基酸和缓冲盐水蛋白质、二糖、氨基酸和缓冲盐水Ø疫苗块的倒塌温度由赋形剂组成的相对浓度决定疫苗块的倒塌温度由赋形剂组成的相对浓度决定Ø保护剂应在抗原收获或冻干前加入抗原中保护剂应在抗原收获或冻干前加入抗原中Ø它应含有中和羧基活性的物质它应含有中和羧基活性的物质Ø电解质成分应含量最少电解质成分应含量最少n影响保护剂的因素影响保护剂的因素Ø种类、浓度、配制方法种类、浓度、配制方法Ø灭菌方法灭菌方法ØpHpH值值Ø制品表面积制品表面积四四. . 耐热保护剂在耐热保护剂在配制配制过程中注意事项过程中注意事项1.1. 保护剂在配制过程中注意事项保护剂在配制过程中注意事项n水的标准水的标准n称量的准确度和误差称量的准确度和误差n溶解顺序溶解顺序n大分子物质与小分子物质混合大分子物质与小分子物质混合n保护剂贮存温度保护剂贮存温度① ① 配制过程中水的要求配制过程中水的要求配制用水为注射用水或去离子水，水的电导率＜配制用水为注射用水或去离子水，水的电导率＜1μs/cm1μs/cm（相当于（相当于100100万万ΩΩ）。

② ② 保护剂的称量保护剂的称量在配制过程中，用量筒准确量取所需注射用水量，在配制过程中，用量筒准确量取所需注射用水量，准确称取各保护剂成分逐次加入，一种成分完全准确称取各保护剂成分逐次加入，一种成分完全溶解后再加入另一种成分，直至完全加完操作溶解后再加入另一种成分，直至完全加完操作必须由必须由2 2个人来完成，个人来完成，1 1人称量、人称量、1 1人复核）人复核）③ ③ 按照保护剂配方中的先后顺序依次加入溶解按照保护剂配方中的先后顺序依次加入溶解④ ④ 大分子物质与小分子物质混合时，边摇边加，大分子物质与小分子物质混合时，边摇边加，使二者充分混匀，混合后观察有无沉淀，如有沉使二者充分混匀，混合后观察有无沉淀，如有沉淀应停止使用淀应停止使用⑤ ⑤ 耐热保护剂均应按保护剂质量标准要求进行保耐热保护剂均应按保护剂质量标准要求进行保存，不合理的保存也会影响保护剂的耐热性能存，不合理的保存也会影响保护剂的耐热性能 2. 2. 耐热保护剂的灭菌耐热保护剂的灭菌n大分子部分（高压部分）大分子部分（高压部分）Ø高压温度高，时间过长高压温度高，时间过长高压瓶子的大小也会影响保护剂的性能，同是一批高压瓶子的大小也会影响保护剂的性能，同是一批保护剂，使用保护剂，使用1000ml1000ml装量瓶与装量瓶与8000ml8000ml装量瓶高压后装量瓶高压后保护剂的性能有明显差异，装液体多的瓶子上温时保护剂的性能有明显差异，装液体多的瓶子上温时间较慢，这样在达到某一温度就需要很长时间，导间较慢，这样在达到某一温度就需要很长时间，导致保护剂中各成分分解变性致保护剂中各成分分解变性Ø高压后闷锅现象高压后闷锅现象保护剂在高压后不及时打开高压锅门，致使保保护剂在高压后不及时打开高压锅门，致使保护剂在同一温度停留的时间比较长，影响保护护剂在同一温度停留的时间比较长，影响保护剂中各成分性能，导致保护剂在冻干过程中起剂中各成分性能，导致保护剂在冻干过程中起不到保护作用不到保护作用解决方法：解决方法：按耐热保护剂灭菌的要求时间、温度进行操作按耐热保护剂灭菌的要求时间、温度进行操作（（121℃15121℃15分钟）分钟）, ,建议使用适当的容器，装量不建议使用适当的容器，装量不宜过大（达到上温快、降温快）。

高压后，仪表宜过大（达到上温快、降温快）高压后，仪表降至零，应立即打开高压锅门，不要把保护剂闷降至零，应立即打开高压锅门，不要把保护剂闷在锅里等冷却后取出，更不要在高压锅里过夜在锅里等冷却后取出，更不要在高压锅里过夜n小分子部分（过滤部分）小分子部分（过滤部分）不匹配的滤芯也会影响保护剂的质量不合理滤芯不匹配的滤芯也会影响保护剂的质量不合理滤芯对耐热保护剂中各物质分子吸附过多，致使保护剂对耐热保护剂中各物质分子吸附过多，致使保护剂各成分的最终含量低于保护剂配方的要求含量影各成分的最终含量低于保护剂配方的要求含量影响耐热保护剂活疫苗的产品质量响耐热保护剂活疫苗的产品质量解决方法：解决方法：要求吸附性小的滤芯，最好是进口的进口滤芯要求吸附性小的滤芯，最好是进口的进口滤芯（（MilliporeMillipore）即可以增加使用次数，除菌效果）即可以增加使用次数，除菌效果又好国产滤芯吸附性大，而且使用次数少，又又好国产滤芯吸附性大，而且使用次数少，又不稳定，影响保护剂的质量不稳定，影响保护剂的质量3. 3. 耐热保护剂保存与使用耐热保护剂保存与使用n按耐热保护剂质量标准要求保存大分子部按耐热保护剂质量标准要求保存。

大分子部 分与小分子部分按比例混合后置分与小分子部分按比例混合后置2 2～～8℃8℃保存，一保存，一 般不要超过般不要超过1010日日n每一种保护剂在使用过程中禁止单一加入每一种保护剂在使用过程中禁止单一加入( (如：将小分子加入抗原后，再加入大分子物质如：将小分子加入抗原后，再加入大分子物质) )，，应将小分子物质与大分子物质按比例混合均匀后应将小分子物质与大分子物质按比例混合均匀后与抗原混合，进行分装与抗原混合，进行分装五五. . 冻干工艺的优化冻干工艺的优化n n冻干过程冻干过程1 1 预预预预 冻冻冻冻2 2 一次干燥（冰升华）一次干燥（冰升华）一次干燥（冰升华）一次干燥（冰升华）3 3 二次干燥（解吸附作用）二次干燥（解吸附作用）二次干燥（解吸附作用）二次干燥（解吸附作用）1.1.预预冻冻Ø预冻速度：控制在每分钟下降预冻速度：控制在每分钟下降1℃左右左右Ø产品降至－产品降至－40℃或冻干机所能降的温度，确保或冻干机所能降的温度，确保箱内所有疫苗瓶内都降到共熔点箱内所有疫苗瓶内都降到共熔点以下以下 2 2. .一次干燥一次干燥Ø一般以每小时一般以每小时2～～5℃℃为宜为宜Ø板层温度应控制在板层温度应控制在-10℃-10℃至至3℃3℃之间之间Ø兽用活疫苗在兽用活疫苗在-30℃-30℃或以下温度进行或以下温度进行Ø真空应维持在真空应维持在100100－－120tor(13332120tor(13332－－1600016000帕斯卡）帕斯卡）Ø成品看不到冰，产品温度开始向板层温度靠近成品看不到冰，产品温度开始向板层温度靠近3. 3. 3. 3. 二次干燥二次干燥二次干燥二次干燥Ø以以5～～10℃/h 为宜，最终制品温度不能超过它的为宜，最终制品温度不能超过它的安全温度安全温度ØØ每步增加板层温度，每每步增加板层温度，每每步增加板层温度，每每步增加板层温度，每2 2小时升温小时升温小时升温小时升温10℃10℃成品温度成品温度成品温度成品温度应该迅速等于板层温度应该迅速等于板层温度应该迅速等于板层温度应该迅速等于板层温度ØØ最终板层温度在最终板层温度在最终板层温度在最终板层温度在2525－－－－35℃35℃之间，决定成品的水分之间，决定成品的水分之间，决定成品的水分之间，决定成品的水分含量含量含量含量ØØ病毒类产品要求病毒类产品要求病毒类产品要求病毒类产品要求25℃25℃，细菌类产品可达，细菌类产品可达，细菌类产品可达，细菌类产品可达35℃35℃在冻干过程中，真空度与产品温度相对应的压在冻干过程中，真空度与产品温度相对应的压在冻干过程中，真空度与产品温度相对应的压在冻干过程中，真空度与产品温度相对应的压力一致，冰上蒸汽压对应关系和优化冻干过程力一致，冰上蒸汽压对应关系和优化冻干过程力一致，冰上蒸汽压对应关系和优化冻干过程力一致，冰上蒸汽压对应关系和优化冻干过程见表见表见表见表1 1 1 1、表、表、表、表2 2 2 2。

n n 冻干过程优化冻干过程优化冻干过程优化冻干过程优化温度温度（（℃℃））真空度真空度（（mbarmbar））温度（温度（℃℃））真空度真空度（（mbarmbar））温度温度（（℃℃））真空度真空度（（mbarmbar））温度（温度（℃℃））真空度真空度（（mbarmbar））0 06.116.11-20-201.031.03-40-400.120.12-60-600.0110.011-1-15.625.62-21-210.940.94-41-410.110.11-61-610.0090.009-2-25.175.17-22-220.850.85-42-420.10.1-62-620.0080.008-3-34.764.76-23-230.770.77-43-430.090.09-63-630.0070.007-4-44.374.37-24-240.70.7-44-440.080.08-64-640.0060.006-5-54.024.02-25-250.630.63-45-450.070.07-65-650.00540.0054-6-63.693.69-26-260.570.57-46-460.060.06-66-660.00470.0047-7-73.383.38-27-270.520.52-47-470.0550.055-67-670.00470.0047-8-83.013.01-28-280.470.47-48-480.050.05-68-680.00350.0035-9-92.842.84-29-290.420.42-49-490.0450.045-69-690.0030.003-10-102.562.56-30-300.370.37-50-500.040.04-70-700.00260.0026-11-112.382.38-31-310.340.34-51-510.0350.035-71-710.00230.0023-12-122.172.17-32-320.310.31-52-520.030.03-72-720.00190.0019-13-131.981.98-33-330.280.28-53-530.0250.025-73-730.00170.0017-14-141.811.81-34-340.250.25-54-540.0240.024-74-740.00140.0014-15-151.651.65-35-350.220.22-55-550.0210.021-75-750.00120.0012-16-161.511.51-36-360.20.2-56-560.0180.018-76-760.0010.001-17-171.371.37-37-370.180.18-57-570.0160.016-18-181.251.25-38-380.160.16-58-580.0140.014-19-191.141.14-39-390.140.14-59-590.0120.012表表1 冰上蒸汽压表冰上蒸汽压表步步步步骤骤骤骤方法方法方法方法举举举举例例例例1.1.测测测测量共晶点（凝固点）量共晶点（凝固点）量共晶点（凝固点）量共晶点（凝固点）T TEPEP通通通通过过过过共晶点共晶点共晶点共晶点测试测试测试测试探探探探头头头头和和和和记录软记录软记录软记录软件件件件测测测测定（当定（当定（当定（当样样样样品品品品从液从液从液从液态过态过态过态过渡到固渡到固渡到固渡到固态时电态时电态时电态时电阻率会增加，阻率会增加，阻率会增加，阻率会增加，样样样样品温度品温度品温度品温度与与与与电电电电阻率曲阻率曲阻率曲阻率曲线线线线交叉点即交叉点即交叉点即交叉点即为为为为共晶点）共晶点）共晶点）共晶点）T TEPEP= -17.5℃= -17.5℃2.2.确定确定确定确定预冻预冻预冻预冻温度温度温度温度T T预冻预冻预冻预冻≈ ≈T TEP EP – 10℃ – 10℃ ～～～～ T TEP EP – 20℃– 20℃T T预冻预冻预冻预冻≈ ≈-17.5℃ – 10℃=-27.5℃-17.5℃ – 10℃=-27.5℃（～（～（～（～-37.5℃-37.5℃））））备备备备注：注：注：注：预冻预冻预冻预冻1L1L体体体体积积积积的水（从的水（从的水（从的水（从20℃20℃～～～～ -20℃-20℃）每一步需要的能量：）每一步需要的能量：）每一步需要的能量：）每一步需要的能量： A A：：：：20℃20℃～～～～0℃=84KJ B0℃=84KJ B：：：：0℃0℃～～～～-0℃=335KJ-0℃=335KJ（（（（结结结结晶晶晶晶过过过过程）程）程）程） C C：：：：-0℃-0℃～～～～-20℃=42KJ -20℃=42KJ 3.3.确定一次干燥确定一次干燥确定一次干燥确定一次干燥压压压压力力力力根据冰上蒸汽根据冰上蒸汽根据冰上蒸汽根据冰上蒸汽压压压压表表表表选择选择选择选择温度相温度相温度相温度相对应对应对应对应的的的的压压压压力力力力值值值值：：：：T T一次干燥一次干燥一次干燥一次干燥≈ ≈T T预冻预冻预冻预冻≈ ≈T TEP EP – 10℃ – 10℃ 相相相相对应对应对应对应的的的的压压压压力力力力值值值值P P一次干燥一次干燥一次干燥一次干燥T T一次干燥一次干燥一次干燥一次干燥= -17.5℃–10℃=-27.5℃ = -17.5℃–10℃=-27.5℃ P P一次干燥一次干燥一次干燥一次干燥= 0.520 mbar = 0.520 mbar 4.4.选择选择选择选择安全安全安全安全压压压压力（到达此力（到达此力（到达此力（到达此压压压压力后力后力后力后搁搁搁搁板会自板会自板会自板会自动动动动停止加停止加停止加停止加热热热热））））T T安全安全安全安全≈ ≈T TEPEP– 5℃ – 5℃ 相相相相对应对应对应对应的的的的压压压压力力力力值值值值P P安全安全安全安全T T安全安全安全安全≈ ≈ -17.5℃–5℃= -22.5℃-17.5℃–5℃= -22.5℃P P安全安全安全安全=0.850mbar=0.850mbar5.5.干燥干燥干燥干燥过过过过程初始的程初始的程初始的程初始的搁搁搁搁板温度控制板温度控制板温度控制板温度控制对对对对于敏感于敏感于敏感于敏感样样样样品，干燥初始的品，干燥初始的品，干燥初始的品，干燥初始的搁搁搁搁板温度板温度板温度板温度应该应该应该应该与安全与安全与安全与安全压压压压力一致力一致力一致力一致△△△△T T搁搁搁搁板板板板=5℃=5℃T T搁搁搁搁板板板板=-27.5℃ + 5℃=-22.5℃=-27.5℃ + 5℃=-22.5℃备备备备注：冰表面温度与蒸汽温度是一致的注：冰表面温度与蒸汽温度是一致的注：冰表面温度与蒸汽温度是一致的注：冰表面温度与蒸汽温度是一致的6.6.冷阱温度的控制冷阱温度的控制冷阱温度的控制冷阱温度的控制一次干燥一次干燥一次干燥一次干燥时时时时冷阱温度可冷阱温度可冷阱温度可冷阱温度可设设设设定定定定为为为为-50℃-50℃，二次干燥，二次干燥，二次干燥，二次干燥时为时为时为时为了提高捕水力可了提高捕水力可了提高捕水力可了提高捕水力可设设设设定定定定为为为为-60℃-60℃7.7.共晶点控制共晶点控制共晶点控制共晶点控制检测检测检测检测对对对对于敏感的于敏感的于敏感的于敏感的冻冻冻冻干干干干样样样样品（病毒品（病毒品（病毒品（病毒/ /细细细细菌），在干燥菌），在干燥菌），在干燥菌），在干燥过过过过程中如程中如程中如程中如R RX X降低降低降低降低说说说说明明明明样样样样品已品已品已品已经经经经融化；融化；融化；融化；对对对对于不敏感的于不敏感的于不敏感的于不敏感的样样样样品，微小的品，微小的品，微小的品，微小的变变变变化是允化是允化是允化是允许许许许的的的的8.8.一次干燥一次干燥一次干燥一次干燥过过过过程中程中程中程中搁搁搁搁板温度控制板温度控制板温度控制板温度控制逐步增加逐步增加逐步增加逐步增加搁搁搁搁板温度要求：板温度要求：板温度要求：板温度要求：R RX X为为为为常数且常数且常数且常数且T T冷阱冷阱冷阱冷阱<-60℃<-60℃时时时时，可以快速升高，可以快速升高，可以快速升高，可以快速升高搁搁搁搁板温度板温度板温度板温度一次干燥温度上升速度一次干燥温度上升速度一次干燥温度上升速度一次干燥温度上升速度为为为为2 2～～～～5℃/h5℃/h9.9.一次干燥一次干燥一次干燥一次干燥结结结结束和二次干燥开始束和二次干燥开始束和二次干燥开始束和二次干燥开始如如如如样样样样品温度和品温度和品温度和品温度和搁搁搁搁板温度的差板温度的差板温度的差板温度的差值值值值在在在在2℃2℃左右，左右，左右，左右，可以使用很低的真空度可以使用很低的真空度可以使用很低的真空度可以使用很低的真空度进进进进行二次干燥行二次干燥行二次干燥行二次干燥最佳的真空度很大程度上受冷阱温度的影响最佳的真空度很大程度上受冷阱温度的影响最佳的真空度很大程度上受冷阱温度的影响最佳的真空度很大程度上受冷阱温度的影响表表2 2 冻干过程的优化冻干过程的优化n n包装物指示包装物指示包装物指示包装物指示Ø管管制玻璃制玻璃瓶和配套胶塞：瓶和配套胶塞：45℃45℃水浴水浴2424小时瓶是否小时瓶是否进水进水Ø成品成品45℃45℃水浴水浴2424小时疫苗是否变形小时疫苗是否变形Ø胶塞应该在胶塞应该在135℃135℃干燥干燥4 4小时小时n胶塞灭菌胶塞灭菌Ø含饱和水分含饱和水分Ø冻干品水分由冻干品水分由2 2％升至％升至5 5％以上％以上n冻干产品质量控制冻干产品质量控制Ø冻干损失量，效检前后测定冻干损失量，效检前后测定Ø样品瞬间放电实验测定真空样品瞬间放电实验测定真空Ø测定产品水分测定产品水分1 1～～1.51.5％％Ø37℃37℃耐老化试验是产品工艺中关键一步耐老化试验是产品工艺中关键一步n冻干产品保存冻干产品保存ØØ通常在通常在通常在通常在2 2 2 2～～8℃8℃8℃8℃保存保存保存保存ØØ－－－－20℃20℃20℃20℃或以下胶塞失弹性导致失真空或以下胶塞失弹性导致失真空或以下胶塞失弹性导致失真空或以下胶塞失弹性导致失真空1 1 1 1 外观差外观差外观差外观差2 2 2 2 喷瓶喷瓶喷瓶喷瓶3 3 3 3 制品冷爆脱底制品冷爆脱底制品冷爆脱底制品冷爆脱底4 4 4 4 制品温度上升制品温度上升制品温度上升制品温度上升5 5 5 5 剩余水分偏高剩余水分偏高剩余水分偏高剩余水分偏高6 6 6 6 制品的厚度制品的厚度制品的厚度制品的厚度六六. .耐热保护剂活疫苗在冻干过程中耐热保护剂活疫苗在冻干过程中异常现象的处理异常现象的处理n 异常现象异常现象（（1 1）塌陷）塌陷Ø原因原因①①升华过程中，搁板温度过高，系统真空度下降，已升华过程中，搁板温度过高，系统真空度下降，已干燥部分因处于水蒸气浓度较高的环境中潮解而发干燥部分因处于水蒸气浓度较高的环境中潮解而发生塌陷生塌陷②②停电或因设备故障中断真空和制冷系统运转，也会停电或因设备故障中断真空和制冷系统运转，也会导致样品塌陷，在升华高峰阶段，设备停机导致样品塌陷，在升华高峰阶段，设备停机10min10min以上即可导致产品全部报废以上即可导致产品全部报废1. 1. 外观差外观差Ø措施措施①①在升华阶段，搁板温度应低于制品共熔点在升华阶段，搁板温度应低于制品共熔点5 5～～10℃10℃，同时保证干燥箱内真空度不高于，同时保证干燥箱内真空度不高于0.2mbar=20p0.2mbar=20p②②在升华过程中突遇停电或其它原因停机，应立在升华过程中突遇停电或其它原因停机，应立即关上真空蝶阀，使制品处于真空状态，并尽快即关上真空蝶阀，使制品处于真空状态，并尽快修复开机继续升华修复开机继续升华（（2 2）分层）分层Ø原因原因①①分装后的样品久置，溶液中的一些不溶物沉淀分装后的样品久置，溶液中的一些不溶物沉淀析出，导致分层析出，导致分层②②停机停机10min10min以上或干燥箱漏气导致分层以上或干燥箱漏气导致分层Ø措施措施①①可采用速冻方法，使液态制品在沉淀发生之前可采用速冻方法，使液态制品在沉淀发生之前冻结实，保证沉淀物在制品中均匀分布，同时尽冻结实，保证沉淀物在制品中均匀分布，同时尽可能提高进箱效率，缩短沉淀时间可能提高进箱效率，缩短沉淀时间②②提高供电系统的安全性和冻干设备的可靠性及提高供电系统的安全性和冻干设备的可靠性及设备操作人员素质，是解决问题的唯一途径设备操作人员素质，是解决问题的唯一途径（（3 3）起壳）起壳Ø原因：产品进箱温度过高、分层，预冻过程中样原因：产品进箱温度过高、分层，预冻过程中样品冻结不坚实所致品冻结不坚实所致Ø措施：产品进箱温度控制在措施：产品进箱温度控制在0 0～～5℃5℃为宜。

延长为宜延长预冻时间，确保样品冻实预冻时间，确保样品冻实（（4 4）裂纹）裂纹Ø原因：制品中干物质含量过高或粘稠度不够原因：制品中干物质含量过高或粘稠度不够Ø措施：减少干物质含量，正常含量应控制在措施：减少干物质含量，正常含量应控制在2020～～25%25%左右左右（（5 5）萎缩）萎缩Ø原因原因药品内含有残留水分；样品浓度不宜太高或太低；药品内含有残留水分；样品浓度不宜太高或太低；升华时温度高于共熔点或解析温度升高过快，真空升华时温度高于共熔点或解析温度升高过快，真空密封不良；胶塞水分含量偏高，未作干烤处理，都密封不良；胶塞水分含量偏高，未作干烤处理，都能导致冻干品萎缩能导致冻干品萎缩Ø措施措施升华过程中严格控制样品温度低于共熔点，解析时升华过程中严格控制样品温度低于共熔点，解析时搁板升温速度不宜太快，一般控制在搁板升温速度不宜太快，一般控制在5℃/h5℃/h左右，左右，其产品温度不能超过崩解温度；产品出箱后严格检其产品温度不能超过崩解温度；产品出箱后严格检验真空度，确保良好的密封性；使用干烤过的胶塞验真空度，确保良好的密封性；使用干烤过的胶塞(6)(6)粗结晶粗结晶Ø原因原因粗结晶是在预冻阶段形成的，与后期干燥无关。

粗结晶是在预冻阶段形成的，与后期干燥无关入箱时板层温度和冻干过程中的降温速度是导致入箱时板层温度和冻干过程中的降温速度是导致样品产生粗结晶的主要因素样品产生粗结晶的主要因素Ø措施措施样品入箱时，板层温度控制在样品入箱时，板层温度控制在0 0～～10℃10℃，同时加快入，同时加快入箱速度；入箱后，立即将板层温度箱速度；入箱后，立即将板层温度降至样品共晶点温降至样品共晶点温度以下度以下1010～～15℃15℃，保证冻结过程一次性完成，即快速，保证冻结过程一次性完成，即快速预冻预冻2. 2. 喷瓶喷瓶Ø原因原因①①冻结不实，冻结不实，升华干燥时升温过快，局部过热，升华干燥时升温过快，局部过热，部分制品溶化成液体，在高真空度条件下，少量部分制品溶化成液体，在高真空度条件下，少量液体从已干燥固体表面穿过孔隙喷出而形成液体从已干燥固体表面穿过孔隙喷出而形成②② 分装样品时，液体流速较快，形成一定量的气分装样品时，液体流速较快，形成一定量的气泡存在瓶内液体中泡存在瓶内液体中Ø措施措施① ① 严格控制预冻温度在共熔点以下严格控制预冻温度在共熔点以下1010～～15℃ 15℃ ，并，并保持保持2 2小时以上，使药品冻实后再升温；升华干小时以上，使药品冻实后再升温；升华干燥时的供热量要控制好，适当放慢升温速度，且燥时的供热量要控制好，适当放慢升温速度，且控制温度不超过共熔点控制温度不超过共熔点②②当液体中有气泡时，将液体放置一定时间让气当液体中有气泡时，将液体放置一定时间让气泡充分逸出泡充分逸出③③放气速度不宜太快，否则会使箱内真空度突然放气速度不宜太快，否则会使箱内真空度突然大幅度变化，会形成一股湍流冲入容器内，使大幅度变化，会形成一股湍流冲入容器内，使制品变成絮状或粉末制品变成絮状或粉末 3. 3. 制品冷爆脱底制品冷爆脱底Ø原因原因①①制品在没有完全冻结实的情况下，系统就开始对制品在没有完全冻结实的情况下，系统就开始对箱体抽真空，当压力达到某一数值时，没有冻结好箱体抽真空，当压力达到某一数值时，没有冻结好的部分就开始蒸发沸腾，产生放热现象，而其本身的部分就开始蒸发沸腾，产生放热现象，而其本身温度急剧下降，到达共晶点温度时，产品冻结，随温度急剧下降，到达共晶点温度时，产品冻结，随之开始出现爆瓶脱底现象之开始出现爆瓶脱底现象②② 随着压力的继续下降，温度也相应下降。

冻随着压力的继续下降，温度也相应下降冻干机的真空泵达到干机的真空泵达到0.1mbar0.1mbar以下，样品温度达到以下，样品温度达到-40℃-40℃左右由于西林瓶底与下部的板层没有以左右由于西林瓶底与下部的板层没有以上的蒸发冷冻特性，在短时间内西林瓶承受不了上的蒸发冷冻特性，在短时间内西林瓶承受不了如此大的温度差而导致西林瓶冷爆脱底如此大的温度差而导致西林瓶冷爆脱底Ø措施措施   解决冷爆脱底问题需要生产人员严格执行预冻解决冷爆脱底问题需要生产人员严格执行预冻参数，确认将制品冻结实后再抽真空参数，确认将制品冻结实后再抽真空4. 4. 制品上升制品上升与箱体的真空度有关，在升华过程中，泵组真空与箱体的真空度有关，在升华过程中，泵组真空度很大时，突然打开大蝶阀，箱内真空度会突然度很大时，突然打开大蝶阀，箱内真空度会突然大幅度上升，从而导致制品上升大幅度上升，从而导致制品上升5. 5. 5. 5. 剩余水分剩余水分剩余水分剩余水分Ø剩余水分偏高的原因剩余水分偏高的原因（（1 1）样品的装量过多，样品层过厚）样品的装量过多，样品层过厚（（2 2）干燥过程中供热不足，使其蒸发量减少）干燥过程中供热不足，使其蒸发量减少（（3 3）真空度不够，水蒸气不能顺利排出）真空度不够，水蒸气不能顺利排出（（4 4）冷凝器温度偏高，不能有效地将水蒸气捕）冷凝器温度偏高，不能有效地将水蒸气捕 集下来集下来（（5 5）冻干周期较短）冻干周期较短（（6 6）压塞时制品温度低于箱体，真空度未达到）压塞时制品温度低于箱体，真空度未达到标准而出现制品吸潮标准而出现制品吸潮ØØ剩余水分对疫苗的影响剩余水分对疫苗的影响剩余水分对疫苗的影响剩余水分对疫苗的影响（（1 1）水分含量过高，样品可能碎裂，且在极微量）水分含量过高，样品可能碎裂，且在极微量的剩余水分存在的情况下，脱氨基的降解会继的剩余水分存在的情况下，脱氨基的降解会继续，促使蛋白失去活性的速度加快续，促使蛋白失去活性的速度加快（（2)2)水分含量过低，可能发生聚合、不适当的重水分含量过低，可能发生聚合、不适当的重组和活性损失组和活性损失（（3 3）疫苗质量的稳定在水分太多和太少之间需要）疫苗质量的稳定在水分太多和太少之间需要达到一个平衡，适宜的剩余水分（达到一个平衡，适宜的剩余水分（1 1～～2%2%））Ø措施：措施：（（1 1）按样品体积调整西林瓶规格，减少装液厚）按样品体积调整西林瓶规格，减少装液厚度，一般应控制在度，一般应控制在1010～～15mm15mm（（2 2）加强热量供给，促进水分蒸发）加强热量供给，促进水分蒸发（（3 3）检查真空度不高的原因，排除泄露点或真）检查真空度不高的原因，排除泄露点或真空系统的异常空系统的异常（（4 4）降低冷阱温度在）降低冷阱温度在-60℃-60℃以下以下（（5 5）延长二次干燥时间，确保制品含水量合格）延长二次干燥时间，确保制品含水量合格（（6 6）对放入箱内的气体要进行除菌及脱水干燥处）对放入箱内的气体要进行除菌及脱水干燥处理，尤其是易吸潮的制品更要注意理，尤其是易吸潮的制品更要注意（（7 7）制品压塞时的温度应与箱体温度一致）制品压塞时的温度应与箱体温度一致 6. 6. 制品厚度制品厚度 一般应为一般应为1010～～15mm 15mm 。

过厚，干燥时间过长，而且过厚，干燥时间过长，而且容易造成制品离壁、萎缩、结块以及致使病毒失容易造成制品离壁、萎缩、结块以及致使病毒失活活通过上述几方面的分析，影响疫苗的耐老化试验通过上述几方面的分析，影响疫苗的耐老化试验因素很多因素很多（（1 1）抗原制备与标准）抗原制备与标准（（2 2）原材料的选择、配制、灭菌、保存以及配苗等）原材料的选择、配制、灭菌、保存以及配苗等（（3 3）冻干曲线的优化和企业冻干机的性能）冻干曲线的优化和企业冻干机的性能（（4 4）标准操作程序）标准操作程序——SOPSOP。