选修一2.1微生物的实验室培养上新课用

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1、微生物的类群微生物的类群微微生生物物原核类原核类: :真核类真核类非细胞类：非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌真菌：真菌：原生生物：原生生物： 显微藻类、原生生物显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）如：草履虫、变形虫等）如：草履虫、变形虫等）如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒病毒、类病毒、朊病毒微生物的共同特点：微生物的共同特点：基础知识基础知识1.1.细菌的形态细菌的形态细菌的外形与大小细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞微小而透明微

2、小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染染色色后显微镜观察后显微镜观察图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌细菌的构造细菌细胞由外向里依次有鞭毛鞭毛鞭毛鞭毛、菌菌（纤）毛纤）毛纤）毛纤）毛、荚膜荚膜荚膜荚膜、细胞壁细胞壁细胞壁细胞壁、细胞膜、细胞膜、细胞膜、细胞膜、细胞质细胞质细胞质细胞质，细胞质细胞质细胞质细胞质中又有液泡、储中又有液泡、储中又有液泡、储中又有液泡、储存性颗粒、核质存性颗粒、核质存性颗粒、核质存性颗粒、核质等等等等。图图图图1-3 1-3 细菌的结构细菌的结构细菌的结构细菌的结构*细胞壁结构特点：坚韧且有弹性结构特点

3、：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？ 固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；w w 保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；w w 阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞； 使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休有些

4、细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌. .SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）病毒的结构病毒的结构2、病毒的增殖：、病毒的增殖：真菌真

5、菌如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生殖生殖直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖放线菌放线菌链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用应用: :学学习目目标1说出出培培养养基基的的类型型、用用途途和和基基本本成分成分2举例例说明常用的消毒与明常用的消毒与灭菌方法。菌方法。3阐明明培培养养基基配配制制的的方方法法和和接接种种的的方法方

6、法。学习重点学习重点培养基的营养成分、无菌操作的基本培养基的营养成分、无菌操作的基本方法、配制培养基的基本步骤、常用方法、配制培养基的基本步骤、常用的微生物的接种方法。的微生物的接种方法。学习难点学习难点配制培养基的基本步骤、常用的微生配制培养基的基本步骤、常用的微生物的接种方法。物的接种方法。(1)根据你所掌握的知识，分析导致生产失败的根据你所掌握的知识，分析导致生产失败的根源是什么根源是什么? (2)由此可见，研究和应用微生物的前提是什由此可见，研究和应用微生物的前提是什么？么？根源在于发酵物中混入了杂菌根源在于发酵物中混入了杂菌 防止杂菌入侵，获得防止杂菌入侵，获得纯净的培养物纯净的培养

7、物 教材教材14页页-背景知识背景知识课题课题1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养微生物的实验微生物的实验室培养室培养条件条件：（1）为培养的微生物）为培养的微生物提提供合适的营养和环境供合适的营养和环境条条件件（2）确保其他微生物无法确保其他微生物无法混入混入研究和应用研究和应用微生物的微生物的前前提提防止杂菌入侵，获得纯净的培养物一、培养基作用、种类一、培养基作用、种类二、无菌技术二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌四、纯化大肠杆菌主要内容主要内容一、培养基一、培养基微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.1.基本成分：基本成

8、分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3- -牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含注：含CHONCHON的的有机物有机物是是异异养型微生物的养型微生物的碳源碳源、氮源氮源、能源能源一、培养基一、培养基微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、

9、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3- -牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含注：含CHONCHON的的有机物有机物是是异异养型微生物的养型微生物的碳源碳源、氮源氮源、能源能源1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐2.2.特殊营养：特殊营养：维生素、碱基等维生素、碱基等（牛肉膏

10、、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH3.pH、氧气的需求：、氧气的需求：4.4.种类：种类：固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有无无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂分离分离 鉴定鉴定工业工业 生产生产化学成分：化学成分：物理性质：物理性质：天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基一、培养基一、培养基液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊均匀混浊生长生长沉淀生长沉淀生长固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基划分划分标准准培养基种培养基种类特点特点用途用途物理性物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基培养基培养基

11、的种类培养基的种类不加凝固不加凝固剂加凝固加凝固剂，如，如琼脂脂工工业生生产微生物分离、微生物分离、鉴定、定、活菌活菌计数、保藏菌数、保藏菌种种含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质工工业生生产培养基成分明确培养基成分明确分分类、鉴定定在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质, ,以抑制不需要的微生物的以抑制不需要的微生物的生生长, ,促促进所需要的微生物的所需要的微生物的生生长培养、分离出特培养、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示在培养基中加入某种指示剂或化学或化学药品品, ,用以用以鉴别不同种不同种类的微生物的微生物鉴别不同种不同种类微微生物生物选择培养基

12、培养基液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: :不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : 几种选择培养基举例：几种选择培养基举例：分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离固氮菌 分离自养型微生物分离自养型微生物唯一碳源为纤维素的培养基唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌分解纤维素的细菌选择培养基选择培养基加加入高浓度食盐的培养基入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基: : 分离导入了目的基因

13、的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核核苷的培养基苷的培养基: : 分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml4 4、右表是某微生物培、右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培）右表培养基可培养的微生

14、物类型养的微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 ，用用于培养金黄色葡萄球菌。于培养金黄色葡萄球菌。自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2O O），该培养），该培养基可用于培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是分装前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）右表中

15、各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是的成分是 。自生固氮微生物自生固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 复习1.按物理形态、化学成分、用途分培养基有哪些种类？2.各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基基。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5

16、g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g分析营养构成？各成分主要提供何种营养成分析营养构成？各成分主要提供何种营养成分分各种培养基的具体配方不同，但一般都包各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？括哪些成分？(1)水水(2)碳源碳源 ：CO2、糖类、脂肪酸、牛、糖类、脂肪酸、牛肉膏等，构成微生物的结构物质和肉膏等，构成微生物的结构物质和代谢物，并提供能量。代谢物，并提供能量。 (3)氮源氮源：N2、氨盐、硝酸盐、蛋白、氨盐、硝酸盐、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。及含氮代谢物等。(4)无机盐无机盐一一、培养基、培养基（小

17、结）（小结） 人们按着微生物对营养物质的不同需求，人们按着微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。配制出供其生长繁殖的营养基质。1、概念、概念2、培养基的营养构成及所需其它条件、培养基的营养构成及所需其它条件1）、一般都含有水、碳源水、碳源、氮源氮源、和、和无机盐。无机盐。2）、还需要满足微生物生长对pHpH、特、特殊营养物质以及氧气的要求殊营养物质以及氧气的要求碳源氮源（nitrogen source） 生长因子生长因子 微生物生长不可缺少的微量有机物质叫生微生物生长不可缺少的微量有机物质叫生长因子。长因子。维生素维生素 氨基酸氨基酸 碱碱 基基 无机盐（mineral s

18、alts） 水（wahtor） Cncnc-micro 凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质都称为碳源的营养物质都称为碳源 。 凡凡是是能能为为微微生生物物提提供供所所需需氮氮元元素素的的营营养养物质都称为氮源。物质都称为氮源。3 3. . 配制原则配制原则（补充补充）目的明确：目的明确：营养全面、浓度适宜、比例恰当营养全面、浓度适宜、比例恰当适宜的适宜的pHpH值：值：有机碳源有机碳源异养型：异养型：根据微生物的根据微生物的种类、培养目的种类、培养目的选择原料选择原料自养型：自养型： 不加碳源不加碳源加入缓冲剂加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸细菌偏碱，真

19、菌偏酸。细菌培养基细菌培养基pHpH中性或偏碱性中性或偏碱性pHpH为：为：6.5-7.56.5-7.5，霉菌培，霉菌培养基呈酸性养基呈酸性pHpH为：为：5.0-6.05.0-6.0。放线菌。放线菌pHpH为：为：7.5-8.57.5-8.5。（COCO2 2碳源）碳源）生产生产科研科研二二 、无菌技术：无菌技术：（看教材15页回答）1.获得纯净培养物的关键是什么获得纯净培养物的关键是什么？2.无菌技术包括哪四大方面？无菌技术包括哪四大方面？3.消毒与灭菌有什么区别？消毒与灭菌有什么区别？二二 无菌技术无菌技术：1.无菌技术主要围绕着如何避免杂菌污染展开无菌技术主要围绕着如何避免杂菌污染展开

20、,主要包括以下主要包括以下几个方面几个方面:1）对实验操作空间、操作者的衣着和）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行手进行 清洁和消毒清洁和消毒 ；（2）将培养器皿、接种用具和培养基）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行等器具进行 灭菌灭菌 ；（3）为避免周围微生物污染，实验操）为避免周围微生物污染，实验操作应在作应在 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 旁进行；旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与）避免已灭菌处理的材料用具与 周周围物品围物品 相接触。相接触。耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的 物品，物品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具7075

21、、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为较为温和温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1530min防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染2 2. .消毒与灭菌：消毒与灭菌：二、无菌技术二、无菌技术1 1、

22、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法: :用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒; ;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)消毒的方法消毒的方法：3 3. .常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、

23、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.(2)灭菌的方法：灭菌的方法：思考:1)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？生物污染外，还有什么目的？ 2)消毒和灭菌有何不同？消毒和灭菌有何不同？3) 消毒牛奶要用什么消毒法消毒牛奶要用什么消毒法?4)请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。需要，请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶、

24、接种针玻棒、试管、烧瓶、接种针实验操作者的双手实验操作者的双手消毒消毒灭菌灭菌条件条件温和温和强烈强烈作用作用范围范围物体表面或内部一部物体表面或内部一部分分,不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子物体内外所有微生物物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。灭菌灭菌 灭菌灭菌 消毒消毒巴氏消毒法，营养成分不被破坏巴氏消毒法，营养成分不被破坏2.2.无菌范围：无菌范围：实验操作空间消毒实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验用具灭菌实验操作过程实验操作过程二二. .无菌技术：无

25、菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：酒精灯旁操作酒精灯旁操作超净工作台超净工作台1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化4.4.灭菌灭菌5.5.倒平板倒平板三、实验操作步骤三、实验操作步骤（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1 1. .计算计算：（根据微生物生长时对营养物质的需求）：（根据微生物生长时对营养物质的需求）物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至1000mL1000mL2.2.称量称量 准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在准

26、确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称称量纸上量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮吸潮，称取时，称取时动作动作要迅速，称后及时盖上瓶盖要迅速，称后及时盖上瓶盖。三、实验操作三、实验操作思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几种营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？几种营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？1 1计算计算 2 2。称称量量操作步骤操作步骤3溶化溶化补补（调调pH：pH76）（加塞、包扎）灭菌（加塞、包扎）灭菌高压蒸气灭菌 3.3.溶化溶化：先将先将牛肉膏连同称量纸一起牛肉膏连同称量纸一起放入烧放入烧杯，加少

27、量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用分离后，用玻璃棒玻璃棒取出称量纸取出称量纸。加入蛋白胨和。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂琼脂，不断用玻璃棒搅拌，不断用玻璃棒搅拌，原因：防止琼脂糊底而导原因：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂致烧杯破裂。待溶解后，加自来水定溶至待溶解后，加自来水定溶至100mL100mL。（熔化后灭菌前应该调节（熔化后灭菌前应该调节PHPH) ) 4. 4.灭菌灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（加棉塞，包上

28、牛皮纸），连同培养皿（3 35 5套，用套，用几层报纸包好）一起放到高压蒸汽灭菌锅内灭菌。几层报纸包好）一起放到高压蒸汽灭菌锅内灭菌。 5.5.倒平板倒平板：待培养基冷却到待培养基冷却到5050O OC C左右左右时倒平板。时倒平板。思考思考3溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热热? 加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么?可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中溶于水中,减少误差减少误差作为凝固剂作为凝固剂倒平板倒平板约约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止

29、瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基思考思考4 在灭菌前在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？的锥形瓶的目的是什么？ 培养皿能否用高压蒸汽灭菌？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞；在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞；在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用菌污染的作用不能不能,因为培养皿要保持干燥因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌应该用干热灭菌倒平板操作的讨论 1.1.培养基灭菌后要冷却到培养基灭菌后要冷却到5050O OC C时倒平板。用什时倒平

30、板。用什么办法来估计培养基的温度？么办法来估计培养基的温度？ 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。即可开始倒平板。 2.2.为什么需要使锥形瓶的为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。基。 3.3.平板冷凝后，为什么要将平板冷凝后，为什么要将平板倒置平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发

31、，又可以防止皿盖上培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。的水珠落入培养基，造成污染。 4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在皿盖与皿底皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。四、大肠杆菌的纯化培养四、大肠杆菌的纯化培养分散成单个细胞分散成单个细胞, ,形成单个菌落形成单个菌落

32、3.3.功能：功能：单个单个或少数菌体或少数菌体2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体1.1.定义：定义：菌落菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 平板划线法：菌种菌种划划3

33、 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种：接种：接种环接种环防止划破培养基防止划破培养基（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）四、大肠杆菌的纯化培养四、大肠杆菌的纯化培养 平板划线的操作方法平板划线的操作方法连续划线法连续划线法 平板划线时不能划破培养基，为什么？平板划线时不能划破培养基，为什么？一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。个条状的

34、菌落。1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到

35、菌落。减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。环境和感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？上一次划线的末端开始划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目

36、随着每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。繁殖而来的菌落。6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移液器移液器稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个

37、不涂布作空白对照滴滴灼灼试试涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍稀释涂布平板法获取的菌落稀释涂布平板法获取的菌落平板划线法：平板划线法：1.1.接种：接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.2.培养：培养：将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h24h24h后，后，观察并记录观察并记录四、大肠杆菌的纯化培养四、大肠杆菌的纯化培养涂布平板操作讨论涂布平板操作讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无

38、菌操作要求，想一想，合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均放到放到37370 0C C的恒温箱中，培养的恒温箱中，培养121224h24h后进行观察并后进行观察并记录结果。记录结果。 1.1.未接种的培养基表面是否有

39、菌落生长？如未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？果有菌落生长，说明了什么？ 未接种的培养基在恒温箱中保温未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。要重新制备。 2.2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？ 如果接种成功的话，在培养基的表面可观察如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。到大小、形状、颜色相似的菌落。五五

40、、结果分析与评价、结果分析与评价 3.3.培养培养12h12h和和24h24h后，观察到的实验结果相同后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？吗？如果不同，请分析产生差异的原因？ 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。使菌落不断增大。 4.4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。请分析其可能的原因。 无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不无菌操作未达到要求：可能是

41、培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染养的过程中受到了污染。五、五、（补）（补）课题成果评价课题成果评价 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求如果

42、培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录1.1.临时保藏：临时保藏： 试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上442.2.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘

43、油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020六、课题延伸（菌种的保藏）六、课题延伸（菌种的保藏）本课题知识小结本课题知识小结微微生生物物的的实实验验室室培培养养培养基培养基无菌技术无菌技术制备牛肉蛋白胨固制备牛肉蛋白胨固体培养基体培养基纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌结果分析与评价结果分析与评价培养基的类型培养基的类型培养基的营养物质培养基的营养物质避免杂菌污染的方法避免杂菌污染的方法实验室常用的消毒方法实验室常用的消毒方法实验室常用的灭菌方法实验室常用的灭菌方法平板划线法平板划线法稀释涂布法稀释涂布法（步骤）（步骤）【典例解析】【典例解析】例例例例1:1:1:1:关于微生物营养物质

44、的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( )( )( )( ) A. A. A. A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B. B. B. B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C. C. C. C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D. D. D. D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮

45、源也能提供能量解析：解析：解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于A A A A、B B B B选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有

46、的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NHNHNHNH4 4 4 4HCOHCOHCOHCO3 3 3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C C C选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养

47、型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；源；源；源；NaHCONaHCONaHCONaHCO3 3 3 3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaClNaClNaCl则则则则只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于D D D D选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是选项，

48、无机氮源提供能量的情况还是选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如存在的，如存在的，如存在的，如NHNHNHNH3 3 3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。D D例例2 2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( )( ) A. A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B. B.消灭杂菌消灭杂菌 C. C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D. D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。

49、解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A A A说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B B B是错误是错误是错误是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染

50、，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C C C是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物

51、是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。把所接菌种也杀死。B B编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例

52、3 3右表是某微生物右表是某微生物培养基成分，请据此回培养基成分，请据此回答：答：（1 1）右表培养基可培）右表培养基可培养的微生物类型是养的微生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 。自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加（，加（CH2OCH2O），），该培养基可用于培养该培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行是溶化后分装前，要进行是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）右表中各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是该增加的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）