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1、PRRS的现状及其的现状及其免疫免疫曾亮明福州大北农生物技术有限公司福州大北农生物技术有限公司Fuzhou Da Bei Nong Biotech Co.Ltd主要内容主要内容一、PRRS的防控现状二、PRRSV的免疫机制三、佐剂改良PRRSV疫苗的研究一、PRRS的防控现状1、母猪繁殖障碍十分严重、母猪繁殖障碍十分严重uu急性流产流产率可达流产率可达10%10%以上，有时可致母猪共济失调、以上，有时可致母猪共济失调、转圈等神经症状，可导致转圈等神经症状，可导致1 14%4%的死亡率的死亡率uu不规律的发情和不孕通常出现在急性流产期通常出现在急性流产期1 1周后，维持周后，维持1 14 4个月
2、个月uu不正常分娩妊娠妊娠100100118118产仔，产出弱仔、死胎、木乃伊产仔，产出弱仔、死胎、木乃伊胎胎2、哺乳仔猪极高的死亡率uu早产弱仔由母猪妊娠后期发生经胎盘感染所致由母猪妊娠后期发生经胎盘感染所致uu死亡率可达60%uu伴有沉郁、消瘦、呼吸困难、眼结膜水肿uu个别病例出现震颤或划桨运动，水样腹泻3、保育和育肥猪疾病复杂化uu急性期表现为厌食、沉郁、呼吸困难、皮肤发红、生长减缓uu极易继发链球菌、副猪嗜血杆菌、肺炎支原体uu继发感染后，药物难以控制，死亡率高达1220%4、PRRSV引起的引起的PRDC异常严重异常严重uuPRRSV是引起猪呼吸道疾病综合征的原发病原之一uuPRRS
3、V感染可导致呼吸困难、发热和咳嗽等临床症状，严重影响猪群的生长速度和饲料转化率5、 PRRSV导致其它疫苗（特别导致其它疫苗（特别是猪瘟）免疫效果差是猪瘟）免疫效果差uuPRRSV影响猪瘟抗体水平的现象早已有报道uu针对PRRSV影响猪瘟抗体水平的现象，应着眼于群体，若仅关注个体的对号入座与现实不符PRRSVPRRSV阳性猪，猪瘟抗体不一定低阳性猪，猪瘟抗体不一定低uuPRRS活跃的猪群，猪瘟抗体合格率低福州大北农技术服务检测中心对全国福州大北农技术服务检测中心对全国200200多个多个规模化猪场的母猪群跟踪调查发现，母猪群规模化猪场的母猪群跟踪调查发现，母猪群PRRSPRRS抗体不符合稳定标
4、准，且抗体不符合稳定标准，且S/PS/P值离散度大值离散度大于于40%40%（变异系数），其猪瘟抗体合格率普遍（变异系数），其猪瘟抗体合格率普遍低于低于60%60%母猪群ELISA S/P值稳定性标准稳定性标准稳定性标准非免疫猪非免疫猪稳定稳定S/P1.0S/P1.0者比例者比例10%10%不稳定不稳定S/PS/P1.01.0者比例者比例10%10%免疫猪免疫猪稳定稳定S/P2.0S/P2.0者比例者比例10%10%不稳定不稳定S/PS/P2.02.0者比例者比例10%10%二、PRRSV的免疫机制1、体液免疫uuIgM感染后57d出现，23周降至检测限以下uuIgG感染后710天出现，4周达
5、高峰uu中和抗体（NAs）感染后3周出现，60d达高峰，并以较低水平长期存在特异性体液免疫的局限性uu许多抗体在感染后一周左右出现并持续存在数月，许多抗体在感染后一周左右出现并持续存在数月，但与保护作用无关但与保护作用无关uu中和性抗体产生延迟，并以较低水平长期存在中和性抗体产生延迟，并以较低水平长期存在免疫后免疫后3 3周才出现周才出现低水平的中和性抗体不仅不能控制病毒的复制，反而低水平的中和性抗体不仅不能控制病毒的复制，反而增强增强PRRSVPRRSV在肺泡巨噬细胞中的复制（抗体依赖性增在肺泡巨噬细胞中的复制（抗体依赖性增强作用，强作用，ADEADE）uuPRRSVPRRSV灭活疫苗临床应
6、用的全面溃败，能给我们灭活疫苗临床应用的全面溃败，能给我们更多现实的启示更多现实的启示抗体依赖性增强作用（ADE）uu低滴度的PRRSV中和抗体（亚中和水平抗体）可引起ADEuuPRRSV的ADE现象在体外和体内都已被证实在培养物中加入一定滴度的在培养物中加入一定滴度的PRRSVPRRSV抗体，可抗体，可使使PRRSVPRRSV的增殖滴度提高的增殖滴度提高10-10010-100倍倍在病毒中加入加入一定量在病毒中加入加入一定量PRRSVPRRSV抗体，再注抗体，再注射妊娠中期的胎儿，结果比单独注射射妊娠中期的胎儿，结果比单独注射PRRSVPRRSV的的致病性显著增强致病性显著增强2、特异性细胞
7、免疫uuT T细胞对细胞对PRRSVPRRSV的初次反应弱的初次反应弱PRRSVPRRSV特异性的特异性的IFN-IFN- 分泌分泌细细胞最早在接种后胞最早在接种后3 3周后出周后出现现，之后，之后1010周在周在5050100100万单位万单位/ /每百万外周血单核细每百万外周血单核细胞（胞（PBMCsPBMCs）范围内不规律地波动）范围内不规律地波动uu感染感染1 1年后年后T T细胞反应逐步增强细胞反应逐步增强在接种后在接种后4848周周IFN-IFN- 分泌分泌细细胞胞增长到增长到400400500500万单位万单位/ /每百万每百万PBMCsPBMCsuu一般，如一般，如PRVPRV
8、，接种后，接种后3 3周周IFN-IFN- 分泌分泌细细胞数量在胞数量在200200300300万单位万单位/ /每百万每百万PBMCsPBMCs间波动间波动这是这是PRVPRV疫苗免疫有效的根源疫苗免疫有效的根源3、巨噬细胞默许感染的改变uu巨噬细胞默许感染的改变是针对PRRSV弱毒疫苗免疫假定赋予的功能有限的研究表明是免疫调节所致，但其完整机有限的研究表明是免疫调节所致，但其完整机制尚未明了制尚未明了uu实验室和田间表明，这种机制对PRRS的防控作用是极其脆弱的免疫过的猪群仍然感染异源毒株发病免疫过的猪群仍然感染异源毒株发病PRRSV免疫特性的现实启示uu有效的体液免疫产生延迟，加上有效的
9、体液免疫产生延迟，加上ADEADE现象的存在现象的存在使使PRRSVPRRSV抗体临床保护意义不确定抗体临床保护意义不确定uu细胞免疫延迟且长期处于较低水平，使细胞免疫延迟且长期处于较低水平，使PRRSVPRRSV特特异性细胞免疫的临床保护只能成为奢望异性细胞免疫的临床保护只能成为奢望uu巨噬细胞默许感染的改变巨噬细胞默许感染的改变是目前大多数是目前大多数PRRSPRRS弱弱毒疫苗免疫的主要功能，保护力很脆弱毒疫苗免疫的主要功能，保护力很脆弱 特异性免疫的缺席，免疫只能让猪群统一感特异性免疫的缺席，免疫只能让猪群统一感染，这是多年来染，这是多年来PRRS弱毒疫苗临床免疫的尴尬。弱毒疫苗临床免疫
10、的尴尬。三、三、佐剂改良佐剂改良PRRSVPRRSV疫苗的研究疫苗的研究福建省农业科学院畜牧兽研究所P3实验室福州大北农生物技术有限公司1、试验概况、试验概况2、细胞免疫特性研究、细胞免疫特性研究细胞因子细胞因子细胞亚型细胞亚型1、试验概况、试验概况uu实验材料实验材料“ “蓝定抗蓝定抗” ”抗原（抗原（CH1-RCH1-R株弱毒）株弱毒） ：产品批号产品批号 2011002201100210106.06.0TCIDTCID5050/ /头头“ “蓝定抗蓝定抗” ”专用佐剂专用佐剂专用佐剂专用佐剂 （稀释液）：批号（稀释液）：批号 20110022011002PRRSVPRRSV强毒（强毒（T
11、JTJ株）：株）：5 5代，代，4 48 8周龄抗原抗体阴性猪，肌注周龄抗原抗体阴性猪，肌注10105.05.0TCIDTCID5050/ /头，观察头，观察21d21d应应5/55/5发病，致少发病，致少3/53/5死亡（死亡（4545，5/55/5， 4/54/5）uu实验动物实验动物同一母猪生产的，同一母猪生产的，30-3530-35日龄断奶仔猪日龄断奶仔猪, ,没有免疫过任何其他疫苗没有免疫过任何其他疫苗实验前帅选项目：实验前帅选项目：CSFVCSFV抗原抗原AgAg、抗体、抗体AbAb、PRRSVPRRSV抗原、抗体抗原、抗体，PRVPRVgEgE抗体抗体，PCV-2PCV-2抗体、
12、抗原抗体、抗原uu实验动物房：福州大北农质检中心无菌动物房实验动物房：福州大北农质检中心无菌动物房阴性猪筛选结果阴性猪筛选结果时间时间时间时间采血日龄采血日龄采血日龄采血日龄蓝耳蓝耳蓝耳蓝耳抗原抗原抗原抗原蓝耳蓝耳蓝耳蓝耳抗体抗体抗体抗体（LSILSI）猪瘟猪瘟猪瘟猪瘟抗原抗原抗原抗原猪瘟猪瘟猪瘟猪瘟抗体抗体抗体抗体伪狂犬伪狂犬伪狂犬伪狂犬gEgE抗体抗体抗体抗体圆环圆环圆环圆环抗体抗体抗体抗体6.276.272323日龄日龄( (阴性猪筛选阴性猪筛选) )/ /16/1616/16（）16/16 16/16 （）16/16 16/16 （）16/16 16/16 （）15/1615/16（+
13、 +）1/161/16（ ）7.57.53131日龄日龄( (试验前试验前3 3天复检天复检) )16/16 16/16 （）16/16 16/16 （）16/16 16/16 （）16/16 16/16 （）16/16 16/16 （）16/1616/16（+ +）试验猪分组试验猪分组uu将将将将1616头头头头3434日龄仔猪随机分为日龄仔猪随机分为日龄仔猪随机分为日龄仔猪随机分为A A、B B、C C、D D四组，每四组，每四组，每四组，每组分别饲养于相对独立的猪栏组分别饲养于相对独立的猪栏组分别饲养于相对独立的猪栏组分别饲养于相对独立的猪栏 试验试验A A组组5 5头：肌注头：肌注 蓝
14、定抗抗原蓝定抗抗原1 1头份头份头份头份专用佐剂专用佐剂专用佐剂专用佐剂2ml2ml试验试验B B组组5 5头：肌注头：肌注 蓝定抗抗原蓝定抗抗原1 1头份头份头份头份常规稀释液常规稀释液2ml2ml试验试验C C组组5 5头：空白对照组头：空白对照组试验试验D D组组1 1头：肌注头：肌注专用佐剂专用佐剂专用佐剂专用佐剂2ml2ml组别组别组别组别专专专专-1-1专专专专-2-2专专专专-3-3专专专专-4-4专专专专-5-5普普普普-1-1普普普普-2-2普普普普-3-3普普普普-4-4普普普普-5-5空空空空-1-1空空空空-2-2空空空空-3-3空空空空-4-4空空空空-5-5D D6
15、2日龄，日龄，攻毒攻毒TJ株株34日龄，日龄，分组免疫分组免疫31日龄，日龄，采血检测采血检测核定阴性核定阴性猪猪23日龄，日龄，采血检测采血检测确定阴性确定阴性猪猪免疫后免疫后1、3、5、7、14、21、28天采血检测天采血检测攻毒后攻毒后1、3、5、7、14、21、28天采血检测天采血检测攻毒后至第攻毒后至第28d试验猪死亡时间试验猪死亡时间组别组别组别组别汇总汇总汇总汇总发病猪死亡时间发病猪死亡时间发病猪死亡时间发病猪死亡时间专专专专-1-1死亡死亡死亡死亡19d19d死死死死专专专专-2-2存活存活存活存活专专专专-3-3存活存活存活存活专专专专-4-4存活存活存活存活专专专专-5-5
16、死亡死亡死亡死亡16d16d死死死死普普普普-1-1存活存活存活存活普普普普-2-2死亡死亡死亡死亡16d16d死死死死普普普普-3-3死亡死亡死亡死亡17d17d死死死死普普普普-4-4存活存活存活存活普普普普-5-5死亡死亡死亡死亡16d16d死死死死空空空空-1-1死亡死亡死亡死亡11d11d死死死死空空空空-2-2死亡死亡死亡死亡13d13d死死死死空空空空-3-3死亡死亡死亡死亡21d21d死死死死空空空空-4-4死亡死亡死亡死亡 14d14d死死死死空空空空-5-5死亡死亡死亡死亡11d11d死死死死 D D死亡死亡死亡死亡25d25d死死死死攻毒保护率攻毒保护率空白组专用佐剂组普
17、通稀释液组20%80%40% 3倍剂量倍剂量TJ株攻毒：株攻毒：3105.0TCID50/头头 无菌室内饲养，没有使用抗生素无菌室内饲养，没有使用抗生素2、“蓝定抗蓝定抗”细胞免疫特性研细胞免疫特性研究究细胞因子细胞因子检测检测细胞亚型检测细胞亚型检测uuIL-4 (pg/ml)IL-4 (pg/ml)uuIFN-IFN-uuIL-18IL-18uuIL-12/IL-23 IL-12/IL-23 P40P40uuNK (NK (个个/ /ulul) )uuCD3+(T) CD3+(T) uuCD3CD3+ +CD4CD4+ +CD8CD8- -(Th)(Th)uuCD3+CD4CD3+CD4-
18、 -CD8CD8+ +(Tc+Ts)(Tc+Ts)uuTh/(Tc+TsTh/(Tc+Ts) )CD3+T细胞细胞CD3+CD4+CD8-（Th）CD3+CD4-CD8+（Tc+Ts）CD3+CD4-CD8-CD3+CD4+CD8+Th0Th1Th2T细胞亚群的分布细胞亚群的分布CD3+CD4+CD8-（Th）细胞增殖与分化细胞增殖与分化IL-12,IL-18,IFN-IL-4Th0Th1:介导细胞免疫介导细胞免疫Th2:介导体液免疫介导体液免疫 (促进抗体产生促进抗体产生)竞争竞争竞争竞争细胞因子细胞因子检测方法：检测方法：ELISAuuIL-4 IL-4 uuIFN-IFN-uuIL-18
19、IL-18uuIL-12/IL-23 IL-12/IL-23 P40P40uuinvitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(2.0pg/ml)uuinvitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(2.0pg/ml)uuinvitrogen(23.1pg/ml)invitrogen(23.1pg/ml)uuR&D (9.0pg/ml)R&D (9.0pg/ml)细胞因子检测免疫前免疫前免疫前免疫前免疫后免疫后免疫后免疫后攻毒后攻毒后攻毒后攻毒后IL-4(pg/ml)IL-4(pg/ml)IL-4(pg/ml)IL-4(pg/ml)前前前前3 3 3 3天天天天3 3
20、3 3天天天天7 7 7 7天天天天14141414天天天天 21212121天天天天 28282828天天天天3 3 3 3天天天天7 7 7 7天天天天 14141414天天天天 21212121天天天天 28282828天天天天空空空空-1-1-1-10 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0空空空空-2-2-2-20 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0空空空空-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0
21、0 0 0 00 0 0 00 0 0 0空空空空-4-4-4-40 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0空空空空-5-5-5-50 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0D D D D0 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-1-1-1-10 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0
22、 00 0 0 0专专专专-2-2-2-20 0 0 00 0 0 08.588.588.588.580 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-4-4-4-40 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-5-5-5-50 0
23、 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0普普普普-1-1-1-10 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0普普普普-2-2-2-20 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0普普普普-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0普
24、普普普-4-4-4-40 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0普普普普-5-5-5-50 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0IFNIFNIFNIFN(pg/ml)(pg/ml)(pg/ml)(pg/ml)免疫前免疫前免疫前免疫前免疫后免疫后免疫后免疫后攻毒后攻毒后攻毒后攻毒后前前前前3 3 3 3天天天天3 3 3 3天天天天7 7 7 7天天天天14141414天天天天21212121天天天天
25、28282828天天天天3 3 3 3天天天天7 7 7 7天天天天14141414天天天天21212121天天天天28282828天天天天空空空空-1-1-1-10 0 0 00 0 0 00 0 0 06.96.96.96.90 0 0 00 0 0 00 0 0 052.952.952.952.9空空空空-2-2-2-211.11.11.11.6 6 6 60 0 0 00 0 0 00 0 0 025.825.825.825.80 0 0 00 0 0 032.232.232.232.2空空空空-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0
26、 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0空空空空-4-4-4-40 0 0 00 0 0 03.3.3.3.2 2 2 20 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 022.22.22.22.6 6 6 6空空空空-5-5-5-50 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 09.9.9.9.9 9 9 90 0 0 00 0 0 010.010.010.010.0D D D D102.0102.0102.0102.0 286.6286.6286.6286.60 0 0 0322.322.322.322.8 8 8 889.889.889.889.8256.256.
27、256.256.2 2 2 241.141.141.141.110.10.10.10.7 7 7 70 0 0 00 0 0 0专专专专-1-1-1-10 0 0 00 0 0 046.846.846.846.80 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0104.104.104.104.8 8 8 80 0 0 0专专专专-2-2-2-20 0 0 00 0 0 055.55.55.55.5 5 5 50 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-3-3-3-30 0 0 00 0 0 098.98.98.
28、98.6 6 6 654.154.154.154.10 0 0 00 0 0 00 0 0 0114.114.114.114.9 9 9 90 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-4-4-4-40 0 0 00 0 0 012.12.12.12.1 1 1 10 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 09.39.39.39.30 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-5-5-5-50 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0277.6277.6277.6277.6普普普普-1-1-1-10 0
29、 0 01 1 1 18.08.08.08.033.33.33.33.6 6 6 614.14.14.14.3 3 3 30 0 0 00 0 0 00 0 0 01 1 1 18.08.08.08.0 945.4945.4945.4945.4 440.4440.4440.4440.4 127.6127.6127.6127.6普普普普-2-2-2-20 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0普普普普-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0
30、82.982.982.982.9 921.1921.1921.1921.1普普普普-4-4-4-40 0 0 00 0 0 032.32.32.32.2 2 2 20 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 06.06.06.06.00 0 0 0普普普普-5-5-5-58.08.08.08.00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0*#IFN-浓度变化曲线浓度变化曲线IL-18IL-18IL-18IL-18(pg/ml)(pg/ml)(pg/ml)(pg/ml)免疫前免疫前免疫前免疫
31、前免疫后免疫后免疫后免疫后攻毒后攻毒后攻毒后攻毒后前前前前3 3 3 3天天天天3 3 3 3天天天天7 7 7 7天天天天14141414天天天天21212121天天天天28282828天天天天7 7 7 7天天天天14141414天天天天21212121天天天天28282828天天天天空空空空-1-1-1-10 0 0 00 0 0 00 0 0 01116.11116.11116.11116.1 180.8180.8180.8180.80 0 0 0330.330.330.330.2 2 2 2空空空空-2-2-2-20 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0363.363
32、.363.363.8 8 8 80 0 0 0429.429.429.429.1 1 1 1空空空空-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0空空空空-4-4-4-424.24.24.24.7 7 7 70 0 0 0366.2366.2366.2366.20 0 0 00 0 0 00 0 0 0257.6257.6257.6257.6空空空空-5-5-5-50 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0819.819.819.819.2 2 2 2D D D D916
33、.916.916.916.4 4 4 4717171719.09.09.09.0 438.7438.7438.7438.7 2006.2006.2006.2006.9 9 9 9 206.206.206.206.1 1 1 1 821.4821.4821.4821.4181.1181.1181.1181.10 0 0 00 0 0 0专专专专-1-1-1-10 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0363.363.363.363.8 8 8 837.537.537.537.5专专专专-2-2-2-20 0 0 058.58.58.58.7 7 7 7
34、1686.81686.81686.81686.80 0 0 0149.3149.3149.3149.30 0 0 02352.22352.22352.22352.2 1465.1465.1465.1465.6 6 6 60 0 0 00 0 0 0专专专专-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 0536.536.536.536.1 1 1 1 324.324.324.324.3 3 3 30 0 0 0388.388.388.388.6 6 6 60 0 0 00 0 0 00 0 0 0专专专专-4-4-4-40 0 0 0184.184.184.184.3 3 3 30 0
35、 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0298.298.298.298.7 7 7 7146.0146.0146.0146.00 0 0 00 0 0 0专专专专-5-5-5-50 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0106.5106.5106.5106.5 2241.02241.02241.02241.0普普普普-1-1-1-10 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 065.65.65.65.7 7 7 72 2 2 290.090.090.090.0 527.527.527.527.8 8 8
36、80 0 0 0普普普普-2-2-2-20 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0普普普普-3-3-3-30 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 037.537.537.537.5301.301.301.301.6 6 6 6普普普普-4-4-4-40 0 0 030.30.30.30.4 4 4 4156.156.156.156.6 6 6 60 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0504.504.504.504.9 9 9 90 0 0 0普普普普-
37、5-5-5-5947.947.947.947.9 9 9 98.68.68.68.60 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0*#IL-18IL-18浓度变化浓度变化IL-12/23P40浓度变化#*细胞因子检测总结uu专用佐剂组，更多猪产生特异性细胞免疫专用佐剂组，更多猪产生特异性细胞免疫力，攻毒后，更少猪产生炎症反应力，攻毒后，更少猪产生炎症反应免疫免疫7 7天后，专用佐剂组，天后，专用佐剂组，80%80%的猪产生的猪产生IFN-IFN-，普通稀释液组，普通稀释液组，40%40%的猪产生的猪产生IFN-IFN-专用佐剂组，专用佐剂组，IL-18IL
38、-18产生速度快（产生速度快（3 37 7天），天），浓度高，适时消减浓度高，适时消减专用佐剂组专用佐剂组IL-12/23P40IL-12/23P40浓度变化平稳，表明浓度变化平稳，表明能维持稳定的细胞免疫状态能维持稳定的细胞免疫状态细胞亚型检测细胞亚型检测细胞亚型细胞亚型uuNK (NK (个个/ /ulul) )uuCD3+(T) CD3+(T) uuCD3CD3+ +CD4CD4+ +CD8CD8- -(Th)(Th)uuCD3+CD4CD3+CD4- -CD8CD8+ +(Tc+Ts)(Tc+Ts)uuTh/(Tc+TsTh/(Tc+Ts) )检测方法检测方法uu方法：流式细胞技术方法
39、：流式细胞技术uuFCMFCM：BD BD FASCaliburFASCaliburuu试剂：试剂：CD8a PECD8a PE、CD3 FITCCD3 FITC、CD4-CD4-Alexa Fluor647Alexa Fluor647、绝、绝对计数管：对计数管：BDBD公司公司机体的抗感染免疫因素机体的抗感染免疫因素NK细胞细胞T、Th、Ts、Tc细胞细胞*NK细胞浓度变化细胞浓度变化*T细胞浓度变化细胞浓度变化*Th细胞浓度变化细胞浓度变化*Th细胞浓度变化细胞浓度变化*Tc+Ts细胞浓度变化细胞浓度变化Th/(Ts+Tc)比值变化细胞亚型检测总结细胞亚型检测总结uu免疫蓝定抗，对猪群非特
40、异性免疫（免疫蓝定抗，对猪群非特异性免疫（免疫蓝定抗，对猪群非特异性免疫（免疫蓝定抗，对猪群非特异性免疫（NKNKNKNK）和细胞）和细胞）和细胞）和细胞免疫（免疫（免疫（免疫（T T T T、ThThThTh、TsTsTsTs、TcTcTcTc）没有抑制，没有免疫抑制）没有抑制，没有免疫抑制）没有抑制，没有免疫抑制）没有抑制，没有免疫抑制uu攻毒后，专用佐剂组非特异性免疫（攻毒后，专用佐剂组非特异性免疫（攻毒后，专用佐剂组非特异性免疫（攻毒后，专用佐剂组非特异性免疫（NKNKNKNK）和细胞）和细胞）和细胞）和细胞免疫（免疫（免疫（免疫（T T T T、ThThThTh、TsTsTsTs、TcTcTcTc）稳步回升）稳步回升）稳步回升）稳步回升uu专用佐剂组，更多猪更早获得更强的细胞免疫力，专用佐剂组，更多猪更早获得更强的细胞免疫力，专用佐剂组，更多猪更早获得更强的细胞免疫力，专用佐剂组，更多猪更早获得更强的细胞免疫力，攻毒后，更少炎症反应攻毒后，更少炎症反应攻毒后，更少炎症反应攻毒后，更少炎症反应谢谢！谢谢！
