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1、第四章第四章医医药生物制品生物制品第一第一节医医药生物制品的免疫学根底生物制品的免疫学根底第二第二节医医药生物制品的根本概念生物制品的根本概念第三第三节医医药生物制品的普通制造方法生物制品的普通制造方法第四第四节重要的医重要的医药生物制品生物制品第一节第一节医药生物制品的免疫学根底医药生物制品的免疫学根底、免疫学、免疫学检测体液免疫体液免疫测定法定法细胞免疫胞免疫测定法定法药物免疫分子的免疫物免疫分子的免疫测定法定法一、体液免疫测定法一、体液免疫测定法1、体液免疫、体液免疫测定法的原理定法的原理又称血清学又称血清学检查法，建立在抗原抗体反响特异性的根底上。法，建立在抗原抗体反响特异性的根底上。
2、抗原与其相抗原与其相应的抗体相遇，将的抗体相遇，将发生特异性生特异性结合，在体外的合，在体外的实验条件下，会出条件下，会出现凝集、沉淀、凝集、沉淀、补体体结合、溶解、中和合、溶解、中和等反响。等反响。各种微生物的各种微生物的鉴定、生物体内各种大分子物定、生物体内各种大分子物质、细胞外胞外表分子、各种半抗原物表分子、各种半抗原物质的的测定。定。2、体液免疫测定法的运用、体液免疫测定法的运用用知的抗原去用知的抗原去测定未知的抗体定未知的抗体用知的抗体去用知的抗体去鉴定或定或测定未知的抗原定未知的抗原有些疾病在感染早期，人体内曾有些疾病在感染早期，人体内曾经有病毒存在，但抗体有病毒存在，但抗体还未未
3、产生，或生，或产生量极少生量极少检测不出来，不出来，这个个时期就称期就称为窗口期。窗口期。3、抗原抗体反响的特征、抗原抗体反响的特征高度特异性二抗的含高度特异性二抗的含义？可逆性分子外表的可逆性分子外表的结合合可可见性适宜的分子比例性适宜的分子比例反响分反响分为两个两个阶段特异性段特异性结合合-快、出快、出现可可见反响反响-慢慢4、影响抗原抗体反响的要素、影响抗原抗体反响的要素电解解质生理生理盐水作水作为缓冲液冲液酸碱度酸碱度PH68温度温度375、常见的抗原抗体反响、常见的抗原抗体反响凝集反响凝集反响细胞性或胞性或颗粒性抗原与相粒性抗原与相应抗体在抗体在电解解质存在下，将出存在下，将出现细胞
4、或胞或颗粒的凝集景象称粒的凝集景象称为凝集反响。凝集反响。抗原称抗原称为凝集原，抗体称凝集原，抗体称为凝集素。凝集素。例如：例如：ABO血型的血型的测定！定！可溶性抗原与相可溶性抗原与相应抗体在有抗体在有电解解质存在下，可出存在下，可出现肉眼可肉眼可见的沉淀景象称的沉淀景象称为沉淀反响。沉淀反响。反响中的抗原称反响中的抗原称为沉淀原，抗体称沉淀原，抗体称为沉淀素。沉淀素。沉淀反响沉淀反响例如：免疫分散或免疫例如：免疫分散或免疫电泳的抗体泳的抗体组成、含量！成、含量！补体参与的反响体参与的反响溶血和溶菌反响溶血和溶菌反响补体体结合反响合反响待检系统：知抗体与待检抗原待检系统：知抗体与待检抗原/知
5、抗原与待检抗体知抗原与待检抗体指示系统：绵羊红细胞和溶血素指示系统：绵羊红细胞和溶血素补体：新颖豚鼠血清补体：新颖豚鼠血清结果判果判别：不溶血：不溶血阳性；溶血阳性；溶血阴性阴性抗体使相抗体使相应的毒素的毒性消逝的的毒素的毒性消逝的实验称称为中和中和实验。中和中和实验常用于毒素的常用于毒素的鉴定。定。中和中和实验免疫免疫标志志测定技定技术是指用是指用酶、荧光素或放射性同位素等光素或放射性同位素等标志抗体或抗原后志抗体或抗原后进展的抗原抗体反响。展的抗原抗体反响。用于定性、定量或定位检测用于定性、定量或定位检测标志物的敏感性标志物的敏感性+抗原抗体反响的特异性抗原抗体反响的特异性酶联免疫吸附分析
6、法酶联免疫吸附分析法免疫荧光技术免疫荧光技术放射免疫测定法放射免疫测定法酶联免疫吸附分析法酶联免疫吸附分析法根本原理根本原理关关键技技术ELISA的常用方法的常用方法ELISA的运用的运用间接法间接法双抗体夹心法双抗体夹心法竞争法竞争法根本原理根本原理经过酶标志技术，将抗原抗体反响的特异性和酶催化作用的高效性相结合，利用酶反响底物的颜色变化来判别结果。关关键技技术：固相包被技固相包被技术酶交交联技技术 常用聚苯乙烯微量反响板：固相包被技固相包被技术样品量少运用方便反复性好优点：酶交交联技技术常用的常用的酶：辣根：辣根过氧化物氧化物酶HRP碱性磷酸碱性磷酸酯酶AP交交联方法：戊二酸法、方法：戊二
7、酸法、过碘酸法碘酸法酶酶反响底物反响底物显色变化显色变化测定波长测定波长/nmHRPAP邻苯二胺苯二胺邻联甲苯胺甲苯胺对硝基苯磷酸硝基苯磷酸酯黄黄色色405桔桔红色色492蓝色色425ELISA的常用方法的常用方法间接法接法双抗体双抗体夹心法心法竞争法争法测定抗体定抗体测定抗原定抗原定量定量测定定间接法用于接法用于测定抗体定抗体包被加酶标抗体洗板加显色底物判别结果加样洗板双抗体双抗体夹心法心法测定抗原定抗原SandwichELISAAddsubstrateandmeasurecolorAntibodycoatedwellAddantigenAddenzymeconjugatedsecondar
8、yantibody竞争法定量争法定量测定定Y Y Y待待测测管管EEEY Y YE 样品 Y Y YE参参考考管管 Y Y YEEEY Y YEEEY Y YEEE 酶标抗原不加样品底物各种微生物的各种微生物的鉴定、生物体内大分子物定、生物体内大分子物质、细胞外表分胞外表分子的子的测定。定。ELISA的运用的运用用知的抗原去用知的抗原去测定未知抗体定未知抗体用知的抗体用知的抗体鉴定未知抗原定未知抗原药物的免疫物的免疫测定定例：胰例：胰岛素、干素、干扰素等素等1、T细胞胞总数的数的测定定2、T细胞胞亚群的群的测定定3、淋巴、淋巴细胞胞转化化实验4、NK细胞活性胞活性测定定5、IL-2的的测定定二
9、、细胞免疫测定法二、细胞免疫测定法三、药物的免疫测定法三、药物的免疫测定法免疫学免疫学预防防一、一、获得免疫力的方式得免疫力的方式自然获得性免疫自然获得性免疫人工获得性免疫人工获得性免疫人工自动免疫：人工自动免疫：人工被动免疫：人工被动免疫：给机体接种抗原，使机体自机体接种抗原，使机体自动地建地建立起立起针对该抗原的免疫抗原的免疫应对。给机体注入特异性抗体或机体注入特异性抗体或细胞因子胞因子等，使机体等，使机体获得特异性免疫。得特异性免疫。人工自动免疫与人工被动免疫的比较人工自动免疫与人工被动免疫的比较人工自人工自动免疫免疫人工被人工被动免疫免疫免疫免疫资料料抗原抗原(菌苗、疫苗、菌苗、疫苗、
10、类毒素毒素)抗体或抗体或细胞因子胞因子免疫力出免疫力出现时间晚晚14周周早立刻早立刻免疫力免疫力维持持时间长数月数月数年数年较短短2周周数月数月用途用途自自动用于用于预防防主要用于治主要用于治疗或或紧急急预防防二、人工自动免疫用生物制品二、人工自动免疫用生物制品由由细菌菌体成分或螺旋体制成的生物制品称菌菌体成分或螺旋体制成的生物制品称为菌苗；菌苗；由病毒或立克次体制成的生物制品那么称由病毒或立克次体制成的生物制品那么称为疫苗。疫苗。1、菌苗、疫苗、菌苗、疫苗用无毒或充分减毒的病原微生物制成活菌液的生物制品用无毒或充分减毒的病原微生物制成活菌液的生物制品称称为活菌疫苗。活菌疫苗。活菌疫苗活菌疫苗
11、死菌疫苗死菌疫苗将病原微生物将病原微生物经人工培育增殖后搜集菌体，用化学或物人工培育增殖后搜集菌体，用化学或物理方法将其理方法将其杀死或死或灭活后制成。活后制成。活菌疫苗与死菌疫苗的比较活菌疫苗与死菌疫苗的比较活菌疫苗活菌疫苗死菌疫苗死菌疫苗体内存在形状体内存在形状短期存活并有一定繁衍短期存活并有一定繁衍无存活、繁衍景象无存活、繁衍景象免疫效果免疫效果好好较差差接种次数接种次数一次一次多次多次接种接种剂量量少少大大消消费、保管条件、保管条件要求条件要求条件严厉要求条件普通要求条件普通产品品举例例卡介苗、脊髓灰卡介苗、脊髓灰质炎炎伤寒、霍乱、百日咳、寒、霍乱、百日咳、糖丸、麻疹疫苗等糖丸、麻疹疫
12、苗等乙乙脑、狂犬病疫苗等、狂犬病疫苗等细菌菌产生的外毒素生的外毒素经0.30.4甲甲醛处置后，使其失去置后，使其失去毒性，保管其免疫原性而制成的生物制品称毒性，保管其免疫原性而制成的生物制品称为类毒素。毒素。2、类毒素、类毒素例：破例：破伤风类毒素、白喉毒素、白喉类毒素等毒素等白、百、破三白、百、破三联疫苗疫苗在制在制备类毒素毒素过程中常参与程中常参与氢氧化氧化铝，制成精制沉淀，制成精制沉淀类毒素，毒素，这种制种制剂在体内吸收在体内吸收较慢，能慢，能较长时间刺激，刺激，提高免疫效果。提高免疫效果。亚单位疫苗位疫苗3、新疫苗的研制、新疫苗的研制合成多合成多肽疫苗疫苗除去了病原体与除去了病原体与产
13、生生维护性抗体无关的成分，提取其性抗体无关的成分，提取其有效的抗原来制成的。有效的抗原来制成的。在病原微生物的有效蛋白在病原微生物的有效蛋白质抗原被抗原被阐明后，人工合成一明后，人工合成一段段肽链，配以适当的，配以适当的载体及佐体及佐剂制成的疫苗。制成的疫苗。基因工程疫苗基因工程疫苗由基因工程技术获得的抗原，再经过精制纯化即可制由基因工程技术获得的抗原，再经过精制纯化即可制成相应的基因工程疫苗。成相应的基因工程疫苗。核酸疫苗基因疫苗核酸疫苗基因疫苗本本质上上为带有有编码病原体抗原目的基因的重病原体抗原目的基因的重组质粒粒DNA。优点点核酸疫苗易于核酸疫苗易于设计、构建、改造、构建、改造,且本且
14、本钱低廉低廉,适于适于规模化消模化消费。化学性化学性质稳定定,具有良好的耐具有良好的耐热性性,便于保管和运便于保管和运输。更接近于天然蛋白抗原分子更接近于天然蛋白抗原分子,不不仅可以可以诱导体液免疫体液免疫,还可可诱导细胞免疫胞免疫,使机体使机体产生比运用其他常生比运用其他常规疫苗更有效的免疫疫苗更有效的免疫应对。低低剂量的核酸疫苗可激量的核酸疫苗可激发长时间的免疫。的免疫。免疫原的免疫原的单一性。一性。在在设计核酸疫苗核酸疫苗时必需保必需保证质粒不与宿自粒不与宿自动物物发生基因生基因整合。整合。现有的研有的研讨阐明明,接种核酸疫苗既不出接种核酸疫苗既不出现针对质粒粒载体本身的体本身的应对,又
15、又不会出不会出现抗抗体抗抗体,但仍需但仍需经过大量的大量的实验来来证明明这一点。一点。质粒粒长期表达外源抗原期表达外源抗原,能否会影响机体的免疫系能否会影响机体的免疫系统,导致致免疫耐受或免疫耐受或对其它抗原的免疫抑制。其它抗原的免疫抑制。假假设免疫免疫应对过强,能否会出能否会出现本身免疫及本身免疫及过敏反响。敏反响。核酸疫苗存在的核酸疫苗存在的问题二、人工被动免疫用生物制品二、人工被动免疫用生物制品用毒素或用毒素或类毒素免疫毒素免疫马匹，匹，经试血、放血、分血、放血、分别血清、血清、提取免疫球蛋白后制成。提取免疫球蛋白后制成。1、抗毒素、抗毒素2、抗菌血清及抗病毒血清、抗菌血清及抗病毒血清针
16、对细菌抗原的抗体血清称菌抗原的抗体血清称为抗菌血清；抗菌血清；针对病毒抗原的病毒抗原的抗体血清称抗体血清称为抗病毒血清。抗病毒血清。3、血浆丙种球蛋白、血浆丙种球蛋白从正常成人血从正常成人血浆中提取的中提取的g-球蛋白。球蛋白。实为含有多种抗体的制含有多种抗体的制剂，大都是，大都是IgG或或IgM抗体。抗体。在某些在某些传染病流行染病流行时，为了防止体弱的了防止体弱的婴幼儿感染或幼儿感染或减减轻病症，可思索运用病症，可思索运用这些制品。些制品。免疫学治免疫学治疗是指运用免疫制是指运用免疫制剂或或药物来加物来加强或抑制机体的免疫或抑制机体的免疫应对，以以调理免疫功能，理免疫功能，维持其相持其相对
17、稳定，到达治定，到达治疗疾病目的的方疾病目的的方法。法。一、免疫治一、免疫治疗概述概述免疫加强剂：具有加强、促进机体免疫功能的制剂。免疫加强剂：具有加强、促进机体免疫功能的制剂。免疫抑制剂：具有抑制机体免疫功能的制剂。免疫抑制剂：具有抑制机体免疫功能的制剂。二、免疫加强剂二、免疫加强剂卡介苗卡介苗短小棒状杆菌短小棒状杆菌LAK细胞细胞TIL细胞细胞等等白细胞介素白细胞介素干扰素干扰素集落刺激因子集落刺激因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子微生物制剂微生物制剂免免疫疫细细胞胞细细胞胞因因子子化化学学制制剂剂左旋咪唑左旋咪唑聚肌胞聚肌胞等等加强非特异性加强非特异性免疫功能免疫功能三、免疫抑制剂三、免疫抑制
18、剂抗代谢药抗代谢药等等烷化剂烷化剂化化学学制制剂剂激激素素真菌代谢产物真菌代谢产物其其他他制制剂剂抗淋巴细胞丙种球蛋白抗淋巴细胞丙种球蛋白抗人抗人T细胞及其亚群单克隆抗体细胞及其亚群单克隆抗体环孢霉素环孢霉素FK-506等等第二节第二节医药生物制品的根本概念医药生物制品的根本概念1 1、生物制品、生物制品、生物制品、生物制品biologicproductsbiologicproducts的概念的概念的概念的概念根据免疫学原理，用微生物、微生物代根据免疫学原理，用微生物、微生物代谢产物、物、动物毒物毒素、人或素、人或动物的血液或物的血液或组织等等经加工制成，作加工制成，作为预防、防、治治疗、诊断
19、特定断特定传染病或其它有关疾病的免疫制染病或其它有关疾病的免疫制剂以及以及血液制品通称血液制品通称为生物制品。生物制品。生物制品系指以微生物、寄生虫、生物制品系指以微生物、寄生虫、动物毒素、生物物毒素、生物组织作作为起始起始资料，采用生物学工料，采用生物学工艺或分或分别纯化技化技术制制备，并以，并以生物学技生物学技术和分析技和分析技术控制中控制中间产物和物和废质量量制成的生量量制成的生物活性制物活性制剂，包括菌苗，疫苗，毒素，包括菌苗，疫苗，毒素，类毒素，免疫血清，毒素，免疫血清，血液制品，免疫球蛋白，抗原，血液制品，免疫球蛋白，抗原，变态反响原，反响原，细胞因子，胞因子，激素，激素，酶，发酵
20、酵产品，品，单克隆抗体，克隆抗体，DNA重重组产品，体外品，体外免疫免疫诊断制品等。断制品等。2 2、生物制品的种、生物制品的种、生物制品的种、生物制品的种类类生物制品种类繁多，普通可分为生物制品种类繁多，普通可分为预防制品预防制品治疗制品治疗制品诊断制品诊断制品根据所采用的资料、制法或用途不同，详细分类如下：根据所采用的资料、制法或用途不同，详细分类如下：1菌苗菌苗由有关由有关细菌、螺旋体制成。菌、螺旋体制成。2噬菌体噬菌体由特定宿主菌的噬菌体制成。由特定宿主菌的噬菌体制成。3疫苗疫苗由有关立克次体、病毒制成。由有关立克次体、病毒制成。4抗血清与抗毒素抗血清与抗毒素经特定抗原免疫特定抗原免疫
21、动物后，采血分物后，采血分别血血浆或血清制成。或血清制成。5类毒素毒素由有关由有关细菌菌产生的外毒素生的外毒素经脱毒使之脱毒使之类毒化后制成。毒化后制成。6混合制混合制剂由人的血液分由人的血液分别提取制成。提取制成。8细胞因子胞因子9诊断制品断制品10其他其他7血液制品血液制品3 3、中国生物制品、中国生物制品、中国生物制品、中国生物制品规规程程程程生物制品一致称号生物制品一致称号规程程生物制品消生物制品消费、检定用菌种、毒种管理定用菌种、毒种管理规程程生物制品国家生物制品国家规范品的制范品的制备和和标定定规程程生物制品分批生物制品分批规程程生物制品分装生物制品分装规程程生物制品包装生物制品包
22、装规程程生物制品生物制品储存、运存、运输规程程生物制品消生物制品消费用用马匹匹检疫及管理疫及管理规程程实验动物和物和动物物实验管理管理规程程人二倍体人二倍体细胞建株、胞建株、检定及制定及制备疫苗疫苗规程程生物制品无菌生物制品无菌实验规程程生物制品生物制品热原原质实验规程程生物制品化学生物制品化学规定定规程程4.生物制品的开展生物制品的开展l第一代疫苗：减毒、灭活疫苗第一代疫苗：减毒、灭活疫苗l以牛痘及脊髓灰质炎疫苗为代表以牛痘及脊髓灰质炎疫苗为代表l第二代疫苗：亚基疫苗第二代疫苗：亚基疫苗l以乙型肝炎外表抗原疫苗为代表以乙型肝炎外表抗原疫苗为代表l第三代疫苗：核酸疫苗第三代疫苗：核酸疫苗l第四
23、代疫苗：改良疫苗和新型疫苗第四代疫苗：改良疫苗和新型疫苗第三节第三节 医药生物制品的普通制造方法医药生物制品的普通制造方法一、疫苗的制造方法一、疫苗的制造方法 1. 毒种的毒种的选择和减毒和减毒 2. 病毒的繁衍病毒的繁衍动物培育法、物培育法、鸡胚培育法、胚培育法、组织培育法、培育法、动物物细胞培育法胞培育法 3. 疫苗的疫苗的灭活加活加热、加、加灭活活剂、射射线照射等照射等 4. 疫苗的疫苗的纯化化 5. 冻干干二、细菌类疫苗菌苗和类毒素的普通制造方法二、细菌类疫苗菌苗和类毒素的普通制造方法 二者均由细菌培育起始，菌苗是用菌体作为进一步加二者均由细菌培育起始，菌苗是用菌体作为进一步加工的对象，类毒素是对细菌分泌的外毒素进展加工。工的对象，类毒素是对细菌分泌的外毒素进展加工。1. 菌种的选择菌种的选择2. 培育基的营养要求培育基的营养要求3. 培育条件的提供培育条件的提供4. 杀菌杀菌5. 稀释、分装和冻干稀释、分装和冻干第四节第四节 重要的医药生物制品重要的医药生物制品一、疫苗乙型肝炎疫苗一、疫苗乙型肝炎疫苗二、菌苗卡介苗二、菌苗卡介苗三、类毒素破伤风类毒素三、类毒素破伤风类毒素
