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1、鸡胚接种技术鸡胚接种技术方法方法 应应 用用 价价 值值 存存 在在 问问 题题动物动物接种接种应用最早；应用最早；方法简便；方法简便；结果易于观察结果易于观察自身带病毒；自身带病毒；有的接种后不敏感；有的接种后不敏感；动物饲养问题动物饲养问题鸡胚鸡胚培养培养来源客观，易于管理，带来源客观，易于管理，带病毒机会少；多途径接种病毒机会少；多途径接种敏感病毒谱窄敏感病毒谱窄细胞细胞培养培养应用广泛，敏感病毒谱广应用广泛，敏感病毒谱广设备技术要求条件高设备技术要求条件高病毒分离培养病毒分离培养 鸡胚培养法的鸡胚培养法的优点优点：w1. 它的组织分化程度低，可选择适当途径它的组织分化程度低，可选择适当
2、途径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和液体接种，病毒易复制，感染病毒的膜和液体含大量病毒。含大量病毒。w2. 是个整体，有神经血管的分布及脏器的是个整体，有神经血管的分布及脏器的构造。构造。w3. 来源充足，操作简单，通常是无菌的，来源充足，操作简单，通常是无菌的，对接种的病毒不产生抗体。对接种的病毒不产生抗体。 鸡胚培养法的鸡胚培养法的缺点缺点：w1. 一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。征。w2. 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。w3. 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传某些细菌、衣原体和病毒能
3、够从感染的母鸡传递到鸡胚。递到鸡胚。w4. 通常鸡胚常常含有白血病病毒。通常鸡胚常常含有白血病病毒。w5. 在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡胚，鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵胚，鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。抗。二、鸡胚的结构与生理 鸡胚是由三个胚层发育起鸡胚是由三个胚层发育起来的，即来的，即外胚层外胚层，中胚层中胚层和和内内胚层胚层，它们构成胚胎的组织与，它们构成胚胎的组织与器官。器官。 （约（约10日龄鸡胚的结构见图）日龄鸡胚的结构见图）气室鸡胚卵黄囊尿囊腔羊膜腔绒毛尿囊膜卵白卵膜鸡胚的管理鸡胚的管理（一）鸡胚的选择（一）
4、鸡胚的选择首首选选健健康康莱莱亨亨鸡鸡受受精精卵卵，其其壳壳洁洁白白易易于于观观察察胚胚胎胎，其其他他受受精精卵卵也也可可使使用用。接接种种病病毒毒的的受受精精鸡鸡卵卵应应未未感感染染已已知知病病毒毒或或其其它它微微生生物物（如如新新城城疫疫病病毒毒或或支支原原体体等等），最最好好来来自自无无特特定定病病 原原 体体 （ specified-pathogens free，SPF）鸡鸡群群，接接种种立立克克次次体体的的受受精精鸡鸡卵卵应应来来自未食用高浓度抗生素的鸡群。自未食用高浓度抗生素的鸡群。 鸡胚的孵育鸡胚的孵育受受精精鸡鸡卵卵孵孵育育时时不不要要擦擦洗洗，以以免免受受细细菌菌污污染染。最
5、最好好用用能能自自动动调调节节温温度度、湿湿度度、气气流流及及翻翻卵卵的的孵孵卵卵箱箱孵孵育育。如如没没有有，也也可可用用普普通通恒恒温温箱箱，但但要要在在温温箱箱中中放放一一盛盛满满水水的的方方盘盘，以以保保持持适适当当的的湿湿度度。孵孵育育应应在在3739、40%70%的的相相对对湿湿度度下下进进行行。湿湿度度太太高高会会使使气气室室发发育育过过度度，而而湿湿度度过过低低又又会会导导致致气气室室发发育育不不良良，甚甚至至造造成成鸡鸡胚胚死死亡亡。通通气气也也很很重重要要，如如果果空空气气不不流流通通，也也可可造造成成鸡鸡胚胚死死亡亡。为为了了避避免免胚胚胎胎膜膜粘粘连连和和胚胚胎胎发发育育
6、不不均均匀匀，应应每每隔隔一一段段时时间间转转动动一次受精鸡卵。一次受精鸡卵。检卵检卵在在发发育育的的早早期期，鸡鸡胚胚不不易易辨辨认认，要要到到45天天后后才才容容易易看看见见。因因此此，检检卵卵要要在在孵孵育育45天天后后进进行行。活活的的鸡鸡胚胚绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜界界线线较较明明显显，上上面面的的血血管管清清晰晰可可见见、成成网网状状，可可看看到到明明显显的的胚胚胎胎自自主主运运动动。如如果果胚胚胎胎活活动动呆呆滞滞或或不不能能自自主主运运动动，血血管管模模糊糊、变变细细、折折断断脱脱落落，绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜界界线线模模糊糊，说说明明鸡鸡胚胚已已濒濒临临死死亡亡或或已经死亡。已经死亡
7、。 接种前后都要检卵。接种前接种前后都要检卵。接种前检卵是要了解鸡胚的存活情况，检卵是要了解鸡胚的存活情况，标记气室边界和胚胎位置；接种标记气室边界和胚胎位置；接种后检卵是为了观察接种后胚胎的后检卵是为了观察接种后胚胎的状况。状况。 发育正常胚与异常胚的辩别1、正常胚 头照可见眼点明显，血管色鲜红，呈放射状；二照可见整个蛋除气室外均布满鲜红血管（合拢）三照时蛋的小头看不到发亮部分（封门），气室界线边缘血管鲜红。2、弱胚蛋 头照胚体小，呈低阶段纤细血管，眼点不明显；二照可见小头有0.5cm2以上区域无血管分布；三照时小头发亮，气室界线边缘的血管面较大。3、死胚蛋 头照可见血点、血线或血环紧贴内壳
8、面，血管色因氧化而比活胚深，有时散黄或有灰白色凝块；中期死胚特征是气室界线模糊，胚胎呈黑团状，常与壳粘连，不动，当手摇胚蛋时，胚胎随之转动，停止摇晃时也随之停止。而活胚时刻在活动；三照死胚的小头发亮，血管色深，气室界线模糊，蛋体发凉；对尚未出壳的也可用温水来判断将蛋放入40C温水中，凡是在水中轻微晃动的为活胚，反之则为死胚。 三、材料w（一）受精鸡卵（一）受精鸡卵w（二）孵卵箱或恒温箱（二）孵卵箱或恒温箱w（三）捡卵灯，照卵灯（三）捡卵灯，照卵灯w（四）砂轮、三棱针（四）砂轮、三棱针w（五）卵盘、卵杯（五）卵盘、卵杯w（六六）其其它它：1 1mlml注注射射器器，针针头头，2.5%2.5%碘碘
9、酒酒，75%75%酒酒精精，镊镊子子，无无菌菌生生理理盐盐水水，毛毛细细吸吸管管，橡胶吸头，液体石蜡，蜡和胶布等。橡胶吸头，液体石蜡，蜡和胶布等。四、接种技术（一）活胚检查（一）活胚检查w 1.血管血管：活胚可见清晰的血管，有时可见血管搏动，死胚血管模糊成淤血带或淤血块。w 2.胎动胎动：活胚可见明显的自然运动，尤其在转动胚胎时，死胚见不到任何胎动，胚胎发红像出血样，有的呈现黑块。w 3.血管网是否丰满血管网是否丰满：发育好的鸡胚可见密布丰满的血管网，也就是绒毛尿囊膜，死胚则见不到这一现象。第一天w胚盘直径0.7cm，胚重0.2mg，在胚盘明区形成原条，其前方为原结，原结前端为头突，头突发育形
10、成脊索神经管，中胚层的细胞沿着经管两侧，形成左右对称的呈方形薄片的体节4-5对，中胚层进入暗区在胚部的边缘出现许多红点，俗称血岛；第二天w胚盘直径1.0cm，胚重3mg，卵黄囊羊膜绒毛膜开始形成，胚胎头部开始从胚盘分离出来，血岛合并形成血管，入孵25小时心脏开始形成，30-42小时后心脏开始跳运，可见到20-27对体节，照蛋时可见卵黄囊血管区，形似樱桃，俗称樱桃珠第三天w胚长0.55cm，胚重20mg，尿囊开始长出，胚的位置与蛋的长轴垂直，开始形成前后肢芽，出现5个脑胞的原基，眼的色素开始沉着，有35对体节，照蛋时，可见胚和伸展的卵黄囊血管形似蚊子，俗称“蚊虫珠”；第4天w胚长0.77cm，胚
11、重50mg，孵黄囊血管包围蛋黄达1/3，肉眼明显看到尿囊，羊膜腔形成，胚和蛋黄分离，由于中脑迅速生长，胚胎头部明显增大，舌开始形成，照蛋时蛋黄不容易转动，胚与卵黄囊血管形似蜘蛛，俗称小蜘蛛；第5天w胚长1.0cm，胚重0.13g，生殖腺已性分化，组织学上可确定胚的公母，胚极度弯曲，整个胚胎成“C”形，可见指（趾）原基，眼的黑色素大量沉着，照蛋时可明显看到黑色的眼点，俗称单珠或黑眼；第6天w胚长1.38cm，胚重0.29g，尿囊已达蛋壳膜内表面，卵黄囊分布在蛋黄表面的1/2以上，由于羊膜壁上的平滑肌收缩，胚胎有规律运动，蛋黄由于蛋白水分的渗入而达到最大重量，由约占蛋重的30.01%增至65.48
12、%，喙原基出现，躯干部增长，翅脚已可区分，照蛋时，可见头部和增大的躯干部两个小圆团，俗称双珠；第7天w胚长1.42cm， 0.57g，尿囊液急剧增加，上喙前端出现小白点形的破壳器（卵齿），口腔鼻孔肌胃形成，胚胎已显示鸟类特征，胚胎自身有体温，照蛋时胚在羊水中不容易看清，半个蛋表面布满血管；第8天w胚 长 1.5cm， 胚 重1.15g，肋骨肺胃明显可辨，颈背四肢出现羽毛，乳头突起，右侧卵巢开始退化，照蛋时胚在羊水中浮游，背面两边蛋黄不易晃动，俗称边口发硬；第9天w胚 长 2cm， 胚 重1.53g，喙开始角质化，软骨开始骨化，眼睑已达虹膜，解剖时心肝胃肾肠已发育良好，尿囊几乎包围整个胚胎，照蛋
13、时可见卵黄两边易晃动，尿囊血管伸展越过卵黄囊，俗称窜筋；第10天w胚 长 2.1cm， 胚 重2.26g，尿囊血管到达蛋的小头，整个背颈、大腿部都覆盖有羽毛，乳头突起、龙骨突形成，照蛋时可见尿囊血管在蛋的小头合拢，除气室外，整个蛋布满血管，俗称合拢；第11天w胚长2.54cm，胚重3.68g，背部出现绒毛，腺胃明显可辩，冠锯齿状，尿囊液达最大量，照蛋时血管加粗，色加深；第12天w胚长3.57cm，胚重5.07g，身躯覆盖绒毛，肾肠开始有功能，开始用喙吞食蛋白第13天w胚长4.34cm，胚重7.37g，头部和身体大部分覆盖绒毛，胫趾出现角质鳞片原基，蛋白通过浆羊膜道迅速进入羊膜腔，眼睑达瞳孔，照
14、蛋时蛋小头发亮部分随胚龄增加而逐渐减少第14天w胚长4.7cm，胚重9.74g，胚胎全身覆盖绒毛，头向气室，胚胎开始改变为横着的位置，逐渐与蛋长横平行（二）接种途径（二）接种途径w1.尿囊腔接种尿囊腔接种：该途径一般用于流感、新城鸡瘟病毒和腮腺炎的适应和传代。w2.羊膜腔接种羊膜腔接种：这途径主要用于临床材料（如患者的鼻洗液及咽漱液）分离病毒。w3.卵黄囊接种卵黄囊接种：该接种途径主要用于抗流感病毒药物实验。w4.绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜壳块培养法壳块培养法：该法可用于流感病毒滴定、中和试验和药物实验。1.尿囊腔接种尿囊腔接种尿尿囊囊腔腔接接种种常常用用于于流流感感病病毒毒、新新城城疫疫病病毒毒和
15、和腮腮腺腺炎炎病病毒毒的的适适应应和和传传代代。进进入入尿尿囊囊腔腔的的这这些些病病毒毒，能能够够在在尿尿囊囊的的内内胚胚层层细细胞胞中中大大量量繁繁殖殖，随随后后释释放放到到尿尿囊囊液液中中。由由于于这这一一接接种种途途径径可可获获得得大大量量的的病病毒毒，也也常常被被用用于于大大量量制制备备抗抗原、疫苗等。原、疫苗等。接种方法：接种方法：选选9 91111日日龄龄鸡鸡胚胚照照检检后后，标标出出气气室室边边界界和和胚胚胎胎位位置置。在在胚胚胎胎面面气气室室上上方方靠靠近近边边界界23mm处处，避避开开血血管管作作一一标标记记，用用碘碘酒酒消消毒毒标标记记处处的的卵卵壳壳，在在标标记记处处钻钻
16、一一孔孔，再再次次用用碘碘酒酒消消毒毒钻钻孔孔区区，将将注注射射器器针针头头经经孔孔刺刺入入尿尿囊囊腔腔，注注入入0.10.10.20.2mlml接接种种物物，将将蜡蜡熔熔化化封封孔孔，33333535孵孵育育48487272小小时时。每日照检，每日照检，2424小时内死亡的应弃去。小时内死亡的应弃去。收获：收获： 收收获获前前先先将将鸡鸡卵卵置置4冷冷冻冻618小小时时，如如急急于于收收获获也也可可将将鸡鸡胚胚置置-20-20、1 1小小时时左左右右。冷冷冻冻后后的的鸡鸡卵卵钝钝端端向向上上置置于于卵卵杯杯上上，将将气气室室上上方方卵卵壳壳用用碘碘酒酒或或70%70%的的酒酒精精消消毒毒后后
17、去去除除，暴暴露露壳壳膜膜，用用无无菌菌镊镊子子小小心心地地将将壳壳膜膜从从绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜上上撕撕下下，不不要要损损伤伤绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜。用用注注射射器器或或吸吸管管经经绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜刺刺入入尿尿囊囊腔腔，吸吸出出尿尿囊囊液液，置置低低温温保保存存。同同时做无菌培养。时做无菌培养。2.羊膜腔接种羊膜腔接种 羊羊膜膜腔腔接接种种主主要要用用于于从从临临床床或或现现场场材材料料（如如患患者者咽咽漱漱液液等等）中中分分离离病病毒毒。接接种种到到羊羊膜膜腔腔中中的的接接种种物物能能够够被被胚胚胎胎吞吞咽咽和和进进入入呼呼吸吸管管，可可遍遍及及各各种种组组织织和和细细胞胞，使使具具有有特
18、特定定细细胞胞亲亲嗜嗜性性的的病病毒毒被被充充分分利利用用，从从而而提提高高病病毒毒繁繁殖殖的的可可能能性性。由由于于可可收收获获的的羊羊膜膜组组织织或或羊羊水水较较少少，为为了了使使病病毒毒适适应应在在尿尿囊囊内内胚胚层层生生长长，从从而而获获得得大大量量的的病病毒毒，可可将将经经羊羊膜膜腔腔接接种种分分离离到到的的病病毒毒再再经经尿尿囊囊腔腔传代。传代。接种方法：接种方法： 选选1012日日龄龄鸡鸡胚胚检检卵卵后后，标标出出气气室室边边界界和和胚胚胎胎位位置置。用用碘碘酒酒消消毒毒鸡鸡卵卵钝钝端端（气气室室上上方方）的的蛋蛋壳壳，在在气气室室上上方方靠靠近近胚胚胎胎侧侧的的卵卵壳壳上上钻钻
19、一一孔孔，钻钻孔孔区区再再次次用用碘碘酒酒消消毒毒。用用无无菌菌眼眼科科小小剪剪子子沿沿钻钻孔孔周周围围剪剪去去少少许许，开开一一小小窗窗，勿勿损损伤伤内内层层壳壳膜膜，经经小小窗窗向向气气室室内内滴滴入入一一滴滴无无菌菌液液体体石石蜡蜡。将将卵卵置置照照卵卵灯灯上上，可可清清楚楚地地看看到到胚胚胎胎的的位位置置。将将注注射射器器瞄瞄准准胚胚胎胎的的腭腭下下胸胸前前，刺刺入入后后注注入入0.10.2ml接接种种物物。用用沾沾有有碘碘酒酒通通过过火火焰焰的的小小块块胶胶布布将将窗窗口口封封上上。接接种种后后的的受受精精卵卵根根据据接接种种的的病病毒毒在在33、35或或37的条件下孵育的条件下孵育
20、4872小时。小时。收获：收获： 收收获获前前先先将将鸡鸡卵卵置置4冷冷冻冻618小小时时，时时间间不不能能过过长长，过过长长会会引引起起散散黄黄。冷冷冻冻后后的的鸡鸡卵卵钝钝端端向向上上置置于于卵卵杯杯上上，将将气气室室上上方方卵卵壳壳用用碘碘酒酒或或75%75%的的酒酒精精消消毒毒后后去去除除，暴暴露露壳壳膜膜，用用无无菌菌镊镊子子小小心心地地去去除除壳壳膜膜，使使其其与与绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜分分开开，不不要要损损伤伤绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜。用用注注射射器器或或吸吸管管经经绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜刺刺入入尿尿囊囊腔腔，吸吸出出尿尿囊囊液液。然然后后，一一只只手手持持镊镊子子将将羊羊膜膜轻轻轻轻提
21、提起起，另另一一只只手手持持注注射射器器或或吸吸管管刺刺入入羊羊膜膜腔腔吸吸取取羊羊水水，置置低低温温保保存存。同同时时做无菌培养。做无菌培养。3.绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜接接种种常常常常用用于于分分离离和和繁繁殖殖在在绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜上上产产生生斑斑和和痘痘的的病病毒毒，如如牛牛痘痘、天天花花、单单纯纯疱疱疹疹和和鸟鸟痘痘病病毒毒。可可在在绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜上上滴滴定定这这些些病病毒毒，因因为为感感染染性性病病毒毒颗颗粒粒的的量量可可以以通通过过产产生生的的斑斑和和痘痘的的数数目目来来计计算算。还还可可用用于于抗抗体体滴滴定定试试验验，因因为为斑斑和和痘痘的的个
22、个数数减减少少的的程程度与抗体浓度有关。度与抗体浓度有关。定位：定位：将胎盘部分将胎盘部分及自然气室部分用铅及自然气室部分用铅笔画出，在胎盘与蛋笔画出，在胎盘与蛋白交界处（无血管区）白交界处（无血管区）画一直径约画一直径约1cm的等的等边三角形。边三角形。卵窗 气室鸡胚卵黄囊尿囊腔羊膜腔绒毛尿囊膜卵白卵膜取卵壳：取卵壳：消毒后取下所画三角形区域的消毒后取下所画三角形区域的卵壳，注意卵膜不要碰破，于卵膜中央刺卵壳，注意卵膜不要碰破，于卵膜中央刺一小口（不要伤及绒毛尿囊膜），一小口（不要伤及绒毛尿囊膜），造人工气室造人工气室：在自然气室部分用大注射：在自然气室部分用大注射器针头钻一孔，用橡皮头自气
23、室端小孔将器针头钻一孔，用橡皮头自气室端小孔将气室中空气吸出，使绒毛尿囊膜下陷形成气室中空气吸出，使绒毛尿囊膜下陷形成一一“人工气室人工气室”n接种：接种：去除卵膜，于绒毛尿囊膜上去除卵膜，于绒毛尿囊膜上滴上病毒滴上病毒0.10.2ml。n封口：封口：用胶布封口，胶布事先用碘用胶布封口，胶布事先用碘酒消毒，并通过火焰烧去余碘。酒消毒，并通过火焰烧去余碘。n培养：培养：放入温箱培育放入温箱培育4天，然后收天，然后收获病毒。获病毒。收获：收获：收收获获前前检检卵卵，看看人人工工气气室室是是否否仍仍然然存存在在，如如果果不不存存在在，轻轻轻轻地地吸吸气气室室上上的的孔孔。用用碘碘酒酒消消毒毒人人工工
24、气气室室上上的的卵卵壳壳，去去掉掉壳壳和和壳壳膜膜至至人人工工气气室室的的边边缘缘，尽尽量量最最大大范范围围地地暴暴露露绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜，用用无无菌菌剪剪子子沿沿人人工工气气室室的的边边缘缘将将接接种种病病毒毒的的绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜剪剪下，低温保存。同时做无菌培养。下，低温保存。同时做无菌培养。4.卵黄囊接种卵黄囊接种 卵黄囊接种常用于分离和繁殖卵黄囊接种常用于分离和繁殖立克次体，也可用于分离和传代衣立克次体，也可用于分离和传代衣原体。这些大的病原微生物易于在原体。这些大的病原微生物易于在沿卵黄排列的内胚层细胞中生长。沿卵黄排列的内胚层细胞中生长。 接种方法：接种方法： 选选用用5 56
25、 6日日龄龄鸡鸡胚胚，因因为为卵卵黄黄囊囊在在这这个个阶阶段段比比较较大大，易易于于接接种种，并并为为病病毒毒的的繁繁殖殖提提供供了了一一个个比比较较大大的的表表面面。检检卵卵后后，用用碘碘酒酒消消毒毒气气室室端端卵卵壳壳，在在气气室室中中心心的的卵卵壳壳上上钻钻一一孔孔，再再次次用用碘碘酒酒消消毒毒钻钻孔孔处处，将将注注射射器器的的针针头头经经钻钻孔孔沿沿卵卵的的纵纵轴轴刺刺入入3 3cmcm左左右右，进进入入卵卵黄黄囊囊中中，通通常常注注入入0.50.51 1mlml接接种种物物。用用蜡蜡熔熔化化封封口口，35353737孵孵育育3 38 8天天，视视接接种种的的病病毒毒或或立立克次体而定
26、。克次体而定。图5-5 卵黄囊接种示意图收获：收获： 先先将将鸡鸡胚胚冷冷冻冻，去去除除气气室室上上方方卵卵壳壳，用用无无菌菌镊镊子子揭揭去去壳壳膜膜，撕撕开开绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜后后，将将鸡鸡胚胚内内容容物物倒倒入入无无菌菌培培养养皿皿中中，注注意意要要避避免免内内容容物物沿沿卵卵壳壳流流下下而而发发生生污污染染。将将鸡鸡胚胚从从卵卵黄黄囊囊上上剪剪下下，如如收收获获鸡鸡胚胚，则则去去双双眼眼、爪爪和和嘴嘴，置置无无菌菌瓶瓶中中低低温温保保存存。倒倒出出卵卵黄黄囊囊中中的的卵卵黄黄，用用生生理理盐盐水水将将卵卵黄黄囊囊洗洗净净，置置无无菌菌培培养养皿皿或或烧烧瓶瓶中中低温保存。并取一块做无菌
27、试验。低温保存。并取一块做无菌试验。注意事项w 鸡胚为一活的有机体，因此要严格无菌操作，同时动作要仔细，以免造成物理死亡。接种后24小时内死亡应不计结果。收获物的检测收获物的检测（一）无菌试验（一）无菌试验鸡鸡胚胚培培养养所所收收获获的的材材料料应应当当未未受受细细菌菌污污染染。检检查查收收获获物物是是否否受受到到细细菌菌污污染染，可可在在收收获获时时取取一一小小块块组组织织或或将将第第一一滴滴液液体体（如如尿尿囊囊液液）放放入入盛盛有有2 23 3mlml无无菌菌肉肉汤汤的的小小试试管管中中，3737培培养养3636小小时时。如如肉肉汤汤依依旧旧清清亮亮透透明明，无无菌菌落落出出现现，说说明
28、明没没有有污污染染；如如肉肉汤汤变变混混浊浊，有有絮絮状状菌菌落落出出现现，说说明明受受到到细细菌菌污染。被细菌污染的收获物应灭菌后弃掉。污染。被细菌污染的收获物应灭菌后弃掉。病毒检测检测鸡胚培养的收获物中是否有病毒存在，有直接观察法和试验法两种方法。1、直接观察法有些病毒在鸡胚中繁殖，可对鸡胚产生眼睛可见的直接损害，可通过直接观察法确认病毒的存在。 这些损害有：这些损害有：（1 1）在绒毛尿囊膜上形成特殊的增生性损）在绒毛尿囊膜上形成特殊的增生性损害或痘疱，如各种痘类病毒和疱疹病毒，常害或痘疱，如各种痘类病毒和疱疹病毒，常产生白色或灰色痘疱，并常伴有膜上血管充产生白色或灰色痘疱，并常伴有膜上
29、血管充血，偶可见出血；血，偶可见出血；（2 2）引起鸡胚死亡，如新城疫病毒、流行）引起鸡胚死亡，如新城疫病毒、流行性乙型脑炎病毒，但应与接种损伤和细菌污性乙型脑炎病毒，但应与接种损伤和细菌污染引起的死亡区别开；染引起的死亡区别开；（3 3）造成鸡胚特殊损害和胚胎生长迟缓）造成鸡胚特殊损害和胚胎生长迟缓2、试验法、试验法 有些病毒在鸡胚中繁殖并不造成可见有些病毒在鸡胚中繁殖并不造成可见损害，直接观察无法确认病毒的存在，损害，直接观察无法确认病毒的存在，必须用试验加以证实。有些病毒能引起必须用试验加以证实。有些病毒能引起红细胞凝集，可对羊水或尿囊液进行血红细胞凝集，可对羊水或尿囊液进行血凝试验证明病毒的存在，如流感病毒、凝试验证明病毒的存在，如流感病毒、新城疫病毒和流行性腮腺炎病毒等。还新城疫病毒和流行性腮腺炎病毒等。还可以用特异性免疫血清与收获的液体或可以用特异性免疫血清与收获的液体或组织做补体结合试验来证明病毒的存在。组织做补体结合试验来证明病毒的存在。
