灭菌与灭菌技术

《灭菌与灭菌技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《灭菌与灭菌技术（93页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、灭菌与灭菌技术灭菌与灭菌技术 江苏大学药学院江苏大学药学院 朱源朱源第一节第一节 概述概述 n需要灭菌的制剂：直接注入机体或与粘膜、创面需要灭菌的制剂：直接注入机体或与粘膜、创面接触的药剂接触的药剂 l无菌（无菌（Sterility）：是指物体或任一给定的介质）：是指物体或任一给定的介质中，没有任何活的微生物存在或无论用任何方法中，没有任何活的微生物存在或无论用任何方法都鉴定不出活的微生物来都鉴定不出活的微生物来l灭菌（灭菌（Sterilization）：应用物理或化学等方法）：应用物理或化学等方法把物体上或介质中所有的微生物及其芽胞全部杀把物体上或介质中所有的微生物及其芽胞全部杀死，即获得无

2、菌状态的总过程死，即获得无菌状态的总过程l消毒（消毒（Disinfection）：用物理或化学等方法杀）：用物理或化学等方法杀灭物体上或介质中的病原微生物（除了芽胞）灭物体上或介质中的病原微生物（除了芽胞）l防腐（防腐（Antisepsis）：用物理或化学等方法抑制）：用物理或化学等方法抑制微生物生长的作用，称为防腐或抑菌微生物生长的作用，称为防腐或抑菌 l热原（热原（Pyrogens）：热原是微生物的一种内毒素，）：热原是微生物的一种内毒素，存在于细菌的细胞膜与固体膜之间，能够引起人存在于细菌的细胞膜与固体膜之间，能够引起人或动物体温的异常升高。致热能力最强的是革兰或动物体温的异常升高。致热

3、能力最强的是革兰氏阴性杆菌所产生的热原氏阴性杆菌所产生的热原 l无菌操作法（无菌操作法（Aseptic technique）：是指在整个）：是指在整个操作过程中利用和控制一定条件，尽量使产品避操作过程中利用和控制一定条件，尽量使产品避免微生物污染的一种操作方法免微生物污染的一种操作方法 细菌的耐受性细菌的耐受性 致死温度：是指在一定的时间内，杀死致死温度：是指在一定的时间内，杀死某种细菌所需要的最低温度某种细菌所需要的最低温度致死时间：是指在某一温度下，杀死某致死时间：是指在某一温度下，杀死某种细菌所需要的最短时间，又称热死时种细菌所需要的最短时间，又称热死时间间 灭菌和除菌对制剂的影响灭菌和

4、除菌对制剂的影响 l灭菌后的制剂中含有细菌的尸体，尸体过多会因灭菌后的制剂中含有细菌的尸体，尸体过多会因菌体内毒素（热原）而引起副作用菌体内毒素（热原）而引起副作用 l除菌是指用特殊的滤材把微生物（死菌、活菌）除菌是指用特殊的滤材把微生物（死菌、活菌）全部阻留而滤除，除了原已染有的微量可溶性代全部阻留而滤除，除了原已染有的微量可溶性代谢产物，由于没有菌体的存在，故没有更多的热谢产物，由于没有菌体的存在，故没有更多的热原产生原产生 不同菌种的耐热性不同菌种的耐热性芽胞抗高温的原因芽胞抗高温的原因芽胞壁厚而致密，热力不易透入芽胞内芽胞壁厚而致密，热力不易透入芽胞内 芽胞内水分含量少，加热时蛋白质不

5、易凝芽胞内水分含量少，加热时蛋白质不易凝固，酶不易失去活性固，酶不易失去活性 芽胞内含有吡啶芽胞内含有吡啶2，6-二羧酸钙，它与蛋白二羧酸钙，它与蛋白质结合成耐热的复合体质结合成耐热的复合体 第二节第二节 微生物死亡动力学的研究微生物死亡动力学的研究 实质实质是寻找对灭菌效果可靠的验证参数是寻找对灭菌效果可靠的验证参数原因原因灭菌温度多是测量灭菌器内的温度而不是灭菌温度多是测量灭菌器内的温度而不是灭菌物体内的温度灭菌物体内的温度 现行方法不易检出残存的微生物现行方法不易检出残存的微生物一、一、D值值 D值是指降低微生物数至原来的值是指降低微生物数至原来的10或降低一个或降低一个对数单位所需的时

6、间或剂量，也就是杀灭对数单位所需的时间或剂量，也就是杀灭90微微生物所需的时间或剂量生物所需的时间或剂量 D=U/（lgN0-lgNu） U为在一定灭菌条件下灭菌经历的时间或接受的为在一定灭菌条件下灭菌经历的时间或接受的剂量；剂量；N0为微生物的初始数量；为微生物的初始数量；Nu为接受了为接受了U单单位时间或剂量的灭菌后微生物的数量；位时间或剂量的灭菌后微生物的数量；Nt为为t时时间微生物的残留数量间微生物的残留数量 热力灭菌或直接用钴-60辐射灭菌 二、二、Z值值 l不同温度下对特定的微生物在特定介质或环境中不同温度下对特定的微生物在特定介质或环境中求得求得D值后，就可用值后，就可用lgD对

7、温度作图对温度作图 Z=（T2-T1）/（lgD1-lgD2） l表示降低一个表示降低一个lgD值所需升高的温度，及灭菌时间值所需升高的温度，及灭菌时间减少到原来的减少到原来的10所需升高的温度所需升高的温度 三、三、F值与值与F0值值 F=t10 T-T0/Z t是测量被灭菌物温度的时间间隔，一般为是测量被灭菌物温度的时间间隔，一般为0.51.0分钟或更小；分钟或更小；T是每个时间间隔是每个时间间隔t所所测得的被灭菌物料的温度，测得的被灭菌物料的温度，T0是参比温度是参比温度 F值是指在一定温度值是指在一定温度T下给定下给定Z值所产生的灭菌值所产生的灭菌效力与在参比温度效力与在参比温度T0下

8、给定下给定Z值所产生的灭菌值所产生的灭菌效力相同时，效力相同时，T0温度下所相当的灭菌时间温度下所相当的灭菌时间 F值适用于干热灭菌值适用于干热灭菌 F0值值-物理物理F0值值 在湿热灭菌条件下测定的，且以嗜热脂肪芽在湿热灭菌条件下测定的，且以嗜热脂肪芽胞杆菌作为微生物指示菌，该菌在胞杆菌作为微生物指示菌，该菌在121下，下，Z值为值为10 F0=t10 T-121/10 F0为一定灭菌温度为一定灭菌温度T，Z值为值为10时所产生的时所产生的灭菌效力与灭菌效力与121，Z值为值为10所产生的灭菌所产生的灭菌效力相同时所相当的时间效力相同时所相当的时间 F0值将各种灭菌温度使微生物的致死力转换为

9、值将各种灭菌温度使微生物的致死力转换为灭菌物品完全暴露于灭菌物品完全暴露于121对微生物的致死效对微生物的致死效力，所以力，所以F0值又称为标准灭菌时间，适用于热值又称为标准灭菌时间，适用于热压灭菌法压灭菌法 F0值值-生物生物F0值值 将将F0值看作是值看作是D121值与微生物数量对数降低值值与微生物数量对数降低值的乘积的乘积 F0=D121（lgN0-lgNt） 其中其中Nt为灭菌后预期达到的微生物残存数，又为灭菌后预期达到的微生物残存数，又叫染菌度概率叫染菌度概率 ，一般取，一般取Nt为为10-6 生物生物F0值可认为是以相当于值可认为是以相当于121热压灭菌时热压灭菌时杀死容器中全部微

10、生物所需要的时间杀死容器中全部微生物所需要的时间例如，将含有例如，将含有200个嗜热脂肪芽胞杆菌的个嗜热脂肪芽胞杆菌的5葡葡萄糖水溶液以萄糖水溶液以121热压灭菌时，其热压灭菌时，其D值为值为2.4分，则分，则F0=2.4（lg200-lg10-6）=19.92min 由于由于F0是将不同灭菌温度折算到相当于是将不同灭菌温度折算到相当于121湿湿热灭菌时的效力，故热灭菌时的效力，故F0值可作为灭菌过程的比较值可作为灭菌过程的比较参数参数 为了使为了使F0测定准确，先应选择灵敏度高，重现性测定准确，先应选择灵敏度高，重现性好，精密度为好，精密度为0.1的热电偶，并对热电偶进行校验的热电偶，并对热

11、电偶进行校验 灭菌时应将热电偶的探针置于被测物的内部，经灭菌时应将热电偶的探针置于被测物的内部，经灭菌器通向柜外的湿度记录仪，有些灭菌记录仪灭菌器通向柜外的湿度记录仪，有些灭菌记录仪附有附有F0显示器，在灭菌过程中和灭菌后，自动显显示器，在灭菌过程中和灭菌后，自动显示示F0值值 影响影响F0值的因素值的因素 容器的形状、大小、热穿透系数容器的形状、大小、热穿透系数 灭菌产品溶液粘度、容器充填量灭菌产品溶液粘度、容器充填量 容器在灭菌器内的数量与排布容器在灭菌器内的数量与排布注意灭菌器内各层、四角、中间位置热分注意灭菌器内各层、四角、中间位置热分布是否均匀，以便合理排布布是否均匀，以便合理排布

12、为了确保灭菌效果，还应注意两个问题：为了确保灭菌效果，还应注意两个问题： 根据生物根据生物F0值的计算公式，若值的计算公式，若N0越大，即被灭菌越大，即被灭菌物中微生物越多，则灭菌时间越长，故生产过程物中微生物越多，则灭菌时间越长，故生产过程中应尽量减少微生物的污染，应采取各种措施使中应尽量减少微生物的污染，应采取各种措施使每个容器的含菌数控制在每个容器的含菌数控制在10以下以下 计算计算F0时，应适当考虑增加安全因素，一般增加时，应适当考虑增加安全因素，一般增加50，如规定，如规定F0为为8分，则实际操作应控制分，则实际操作应控制F0为为12分分 药剂学中灭菌法可分为三大类：即物理灭菌、药剂

13、学中灭菌法可分为三大类：即物理灭菌、化学灭菌、无菌操作法。化学灭菌、无菌操作法。第三节第三节 物理灭菌法物理灭菌法 一、热力灭菌法（一、热力灭菌法（Thermal sterilization）加热可破坏蛋白质和核酸中的氢键，故导致核酸加热可破坏蛋白质和核酸中的氢键，故导致核酸破坏，蛋白质变形或凝固，酶失去活性，微生物破坏，蛋白质变形或凝固，酶失去活性，微生物因而死亡因而死亡 热力灭菌法分为干热灭菌法和湿热灭菌法。在同热力灭菌法分为干热灭菌法和湿热灭菌法。在同一温度下，湿热灭菌的效力比干热灭菌大一温度下，湿热灭菌的效力比干热灭菌大细菌在湿热下，菌体吸收水分，蛋白质较细菌在湿热下，菌体吸收水分，蛋

14、白质较易凝固。这点可以从鸡蛋白含水量与凝固易凝固。这点可以从鸡蛋白含水量与凝固温度之间的关系看出来，凝固蛋白质所需温度之间的关系看出来，凝固蛋白质所需要的温度与蛋白质的含水量有关要的温度与蛋白质的含水量有关 湿热的穿透力比干热大湿热的穿透力比干热大 湿热灭菌时，水蒸气与物品接触而凝结成湿热灭菌时，水蒸气与物品接触而凝结成水，因而发出潜热（汽化热），加速细菌水，因而发出潜热（汽化热），加速细菌的死亡的死亡 鸡蛋白含水量与凝固温度关系表鸡蛋白含水量与凝固温度关系表(一一)干热灭菌法干热灭菌法 火焰灭菌法火焰灭菌法 灼烧是最迅速、可靠、简便、紧急的灭菌方法灼烧是最迅速、可靠、简便、紧急的灭菌方法金属

15、品如铂丝、铁或镍制。不锈钢制的刮刀、镊金属品如铂丝、铁或镍制。不锈钢制的刮刀、镊子等，瓷制品如研钵等，玻璃制器皿如玻棒、载子等，瓷制品如研钵等，玻璃制器皿如玻棒、载玻片、试管等的灭菌都可用此玻片、试管等的灭菌都可用此 采用该法灭菌时，最少须在火焰中加热采用该法灭菌时，最少须在火焰中加热20秒，通秒，通常是要将灭菌的物品迅速通过火焰常是要将灭菌的物品迅速通过火焰34次。对研次。对研钵的简便灭菌方法是在其中加入少量乙醇点火燃钵的简便灭菌方法是在其中加入少量乙醇点火燃烧；对于玻璃、瓷制品，操作前应充分干燥，以烧；对于玻璃、瓷制品，操作前应充分干燥，以免烧灼时炸裂损坏免烧灼时炸裂损坏 干热空气灭菌法干

16、热空气灭菌法 本法系指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备本法系指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中、利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物中、利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法质的方法 本法并不是一种优良理想的灭菌方法，其原因是本法并不是一种优良理想的灭菌方法，其原因是干热空气的穿透力很弱而不均匀；另外，空气的干热空气的穿透力很弱而不均匀；另外，空气的比热低，是一种不良的传热介质。因此须长时间比热低，是一种不良的传热介质。因此须长时间受高热的作用才能达到灭菌的目的受高热的作用才能达到灭菌的目的 加热温度及时间根据灭菌器和灭菌物性质的不同加热温度及时间根据灭菌器和灭菌物性质的不同而

17、异，目的是达到微生物残留量在而异，目的是达到微生物残留量在10-6以内。根以内。根据中国药典规定，干热灭菌条件一般为：据中国药典规定，干热灭菌条件一般为： 160170120min、17018060min上或上或25045min 对于磺胺等遇高热熔化或容易分解的药物或对热对于磺胺等遇高热熔化或容易分解的药物或对热敏感的材料，应采用较低温度与较长时间灭菌敏感的材料，应采用较低温度与较长时间灭菌 对耐热物品可采用较高的温度和相应较短的时间对耐热物品可采用较高的温度和相应较短的时间 凡应用湿热方法灭菌无效的非水性物质，或极粘凡应用湿热方法灭菌无效的非水性物质，或极粘稠的液体如甘油、液体石蜡、油类等药

18、物也可以稠的液体如甘油、液体石蜡、油类等药物也可以采用此法采用此法 药物的干热空气灭菌药物的干热空气灭菌对玻璃容器或瓷制与金属制的容器灭菌时，必须对玻璃容器或瓷制与金属制的容器灭菌时，必须先洗净，不使其沾染有油脂或其他有机物质，然先洗净，不使其沾染有油脂或其他有机物质，然后用适当的包装材料包裹后用适当的包装材料包裹 烧瓶或其他容器口上用棉花塞密，外面再覆以纱烧瓶或其他容器口上用棉花塞密，外面再覆以纱布或一层坚韧的纸，置干热空气灭菌器中，布或一层坚韧的纸，置干热空气灭菌器中，160灭菌灭菌2小时以上小时以上 空安瓿的灭菌，可置于密盖的金属盒中，用空安瓿的灭菌，可置于密盖的金属盒中，用200或或2

19、00以上的高温保持至少以上的高温保持至少45min以上，以上，当温度达到当温度达到250时，灭菌时，灭菌45min后，热原也可以后，热原也可以被破坏被破坏 器皿的干热空气灭菌器皿的干热空气灭菌(二二)湿热灭菌法湿热灭菌法 本法系指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、本法系指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法酸发生变性而杀灭微生物的方法 本法是制剂生产中应用最广泛的一种灭菌法本法是制剂生产中应用最广泛的一种灭菌法 具有可靠、操作简便，易于控制和经济等优点。具有可靠、操作简便，易于控制

20、和经济等优点。缺点是不适用于对湿热敏感的药物缺点是不适用于对湿热敏感的药物 影响湿热灭菌的因素影响湿热灭菌的因素 微生物的种类和数量微生物的种类和数量 各种细菌对热的抵抗力相差很大，处于不同发育各种细菌对热的抵抗力相差很大，处于不同发育阶段，所需灭菌的温度与时间也不相同阶段，所需灭菌的温度与时间也不相同 繁殖期间的微生物对高温比衰老时期的抵抗力小繁殖期间的微生物对高温比衰老时期的抵抗力小得多得多 最初菌数越少，越能短时间内达到灭菌，同时，最初菌数越少，越能短时间内达到灭菌，同时，如果最初菌数多，即使细菌全部杀灭，而药液中如果最初菌数多，即使细菌全部杀灭，而药液中细菌尸体、热原过多，亦会引起不良

21、反应细菌尸体、热原过多，亦会引起不良反应 介质的性质介质的性质 溶液中若有营养性物质如糖类、氨基酸等，对微溶液中若有营养性物质如糖类、氨基酸等，对微生物有营养保护的作用，能增强其抗热性生物有营养保护的作用，能增强其抗热性 细菌的生活能力也因介质的酸碱度而不同，一般细菌的生活能力也因介质的酸碱度而不同，一般微生物在中性溶液中耐热性最大，在碱性溶液中微生物在中性溶液中耐热性最大，在碱性溶液中次之，酸性则不利于微生物的发育次之，酸性则不利于微生物的发育 药物的性质药物的性质 一般说，灭菌所需时间与温度成反比。但是药液一般说，灭菌所需时间与温度成反比。但是药液温度增高，药物分解的反应速度也增加。所以在

22、温度增高，药物分解的反应速度也增加。所以在杀灭细菌的前提下，可适当降低灭菌温度或时间杀灭细菌的前提下，可适当降低灭菌温度或时间 比如，维生素比如，维生素C注射液用流通蒸汽注射液用流通蒸汽15min即可达到即可达到灭菌，氯化钠输液用灭菌，氯化钠输液用115，30min进行灭菌进行灭菌 蒸汽的性质蒸汽的性质 湿饱和蒸汽：即饱和水蒸汽中带有水分，常由于湿饱和蒸汽：即饱和水蒸汽中带有水分，常由于蒸汽输送管路中热量损失所形成的，因此在蒸汽蒸汽输送管路中热量损失所形成的，因此在蒸汽中混悬着无数微细水滴，此种蒸汽的热含量较低，中混悬着无数微细水滴，此种蒸汽的热含量较低，穿透力较差，故灭菌效力较低穿透力较差，

23、故灭菌效力较低 饱和蒸汽：即蒸汽的温度与水的沸点相当，当蒸饱和蒸汽：即蒸汽的温度与水的沸点相当，当蒸汽的压力达到平衡时，蒸汽中不含有微细的水滴。汽的压力达到平衡时，蒸汽中不含有微细的水滴。饱和蒸汽热含量较高，潜热大，穿透力较大，因饱和蒸汽热含量较高，潜热大，穿透力较大，因此灭菌效力也较大此灭菌效力也较大 过热蒸汽：如在热压灭菌器中的水不足，液体状过热蒸汽：如在热压灭菌器中的水不足，液体状态的水完全蒸发后，再继续加热即生成过热蒸汽，态的水完全蒸发后，再继续加热即生成过热蒸汽，这种蒸汽与干热状态相似。在压力不变、温度继这种蒸汽与干热状态相似。在压力不变、温度继续上升的情况下此温度虽比饱和温度高，但

24、穿透续上升的情况下此温度虽比饱和温度高，但穿透力很差，因此灭菌效力不如饱和蒸汽力很差，因此灭菌效力不如饱和蒸汽 不饱和蒸汽：若灭菌器内空气未排尽，则蒸汽为不饱和蒸汽：若灭菌器内空气未排尽，则蒸汽为不饱和蒸汽，内含不同比例的空气，由于空气是不饱和蒸汽，内含不同比例的空气，由于空气是热的不良导体，空气与被灭菌的物体接触后又无热的不良导体，空气与被灭菌的物体接触后又无潜热放出，故灭菌效力降低潜热放出，故灭菌效力降低 1、热压灭菌法、热压灭菌法 本法系在热压灭菌器内进行的用高压饱和蒸汽加本法系在热压灭菌器内进行的用高压饱和蒸汽加热杀灭微生物的方法。是常用的湿热灭菌法热杀灭微生物的方法。是常用的湿热灭菌

25、法热压灭菌器有密盖，可以使饱和蒸汽不逸出，由热压灭菌器有密盖，可以使饱和蒸汽不逸出，由于蒸汽量不断增加而使器内压力增大，此法有很于蒸汽量不断增加而使器内压力增大，此法有很强的灭菌作用强的灭菌作用 如在表压如在表压1.05kg/cm2的饱和蒸汽（达的饱和蒸汽（达121.3）经）经过过20min，能杀灭所有细菌繁殖体和芽胞能杀灭所有细菌繁殖体和芽胞 热压灭菌所需的温度及与温度相当的压力及时间热压灭菌所需的温度及与温度相当的压力及时间如下：如下： 115，1.7atm（67kPa，7.1kg/cm2），），30min 121，2.0atm（97kPa，11kg/cm2），），20min 126，2.

26、4atm（139kPa，14.1kg/cm2），），15min 湿热灭菌一般要求湿热灭菌一般要求F0=112分分 卧式热压灭菌柜卧式热压灭菌柜 必须使用饱和蒸汽必须使用饱和蒸汽 必须排尽灭菌柜内空气必须排尽灭菌柜内空气 灭菌结束后，应待压力灭菌结束后，应待压力降至零后，缓慢打开柜降至零后，缓慢打开柜门后取出样品门后取出样品 灭菌时间必须由全部药灭菌时间必须由全部药液达到灭菌温度时算起液达到灭菌温度时算起 热压灭菌器内灭菌温度检查法热压灭菌器内灭菌温度检查法 碘淀粉温度指示纸碘淀粉温度指示纸 取碘和碘化钾各取碘和碘化钾各0.5g，淀粉淀粉25g，加水至加水至300ml使使成糊状，然后将滤纸条浸入

27、，取出干燥，装入安成糊状，然后将滤纸条浸入，取出干燥，装入安瓿内熔封，检查时与产品一起灭菌，经灭菌后，瓿内熔封，检查时与产品一起灭菌，经灭菌后，观察纸条，如果温度超过观察纸条，如果温度超过114115则纸条的则纸条的蓝色褪为白色，说明灭菌器内温度已到蓝色褪为白色，说明灭菌器内温度已到115 熔融温度指示剂熔融温度指示剂 利用某些化学药品，其熔点正好是灭菌所需温度，利用某些化学药品，其熔点正好是灭菌所需温度，可以作为温度指示剂可以作为温度指示剂 取这样的药品结晶少量密封于安瓿中，与待灭菌取这样的药品结晶少量密封于安瓿中，与待灭菌制剂同置于灭菌器中，观察指示剂是否熔化来判制剂同置于灭菌器中，观察指

28、示剂是否熔化来判断灭菌温度断灭菌温度 常用的温度指示剂有焦性儿茶酚（常用的温度指示剂有焦性儿茶酚（140）、氨基）、氨基比林（比林（107109）、安替比林（）、安替比林（110112）、）、乙酰苯胺（乙酰苯胺（113114）、升华硫（）、升华硫（117）、苯）、苯甲酸（甲酸（121）、）、-萘酚（萘酚（121）等）等 在指示剂中加入少许亚甲蓝或苏丹红可以方便观在指示剂中加入少许亚甲蓝或苏丹红可以方便观察其熔变情况察其熔变情况 留点温度计留点温度计 其结构原理与体温表类似，温度指示最高为其结构原理与体温表类似，温度指示最高为140 与一般体温计不同的是当灭菌器内温度达到最高与一般体温计不同的是

29、当灭菌器内温度达到最高并降低以后，水银面不会随着温度下降而是留在并降低以后，水银面不会随着温度下降而是留在最高点指示灭菌温度达到的最高点最高点指示灭菌温度达到的最高点 自动记录热电偶自动记录热电偶 自动记录灭菌器内温度的变化和时间。分布于灭自动记录灭菌器内温度的变化和时间。分布于灭菌器不同的水平面和垂直面，探测热量的分布菌器不同的水平面和垂直面，探测热量的分布 脉动真空蒸汽灭菌柜脉动真空蒸汽灭菌柜 适合对药棉、纱布、手术适合对药棉、纱布、手术无菌衣、医疗器械等灭菌。无菌衣、医疗器械等灭菌。能自动抽真空，可有效地能自动抽真空，可有效地从多孔性物质中驱除空气，从多孔性物质中驱除空气，并在真空条件下

30、通入水蒸并在真空条件下通入水蒸汽，利用饱和蒸汽进行灭汽，利用饱和蒸汽进行灭菌。灭菌结束后，内层再菌。灭菌结束后，内层再一次抽真空，把蒸汽从灭一次抽真空，把蒸汽从灭菌物品中抽出，而夹层中菌物品中抽出，而夹层中仍然通有蒸汽，便于物品仍然通有蒸汽，便于物品的干燥的干燥 快速冷却灭菌器快速冷却灭菌器 适合对玻璃瓶装液体适合对玻璃瓶装液体（注射剂、大输液）进（注射剂、大输液）进行自动真空饱和蒸汽灭行自动真空饱和蒸汽灭菌，并附有喷淋冷水装菌，并附有喷淋冷水装置，在灭菌时间达到后，置，在灭菌时间达到后，可喷淋冷却，使被灭菌可喷淋冷却，使被灭菌物迅速冷却，利于药品物迅速冷却，利于药品的稳定的稳定 软包装灭菌器

31、软包装灭菌器 适合对软包装液体适合对软包装液体（软塑料装大输液、（软塑料装大输液、袋装食品）进行蒸袋装食品）进行蒸汽灭菌。自动抽真汽灭菌。自动抽真空，饱和蒸汽灭菌空，饱和蒸汽灭菌后，附有喷淋冷水后，附有喷淋冷水装置，灭菌结束后装置，灭菌结束后迅速冷却，利于药迅速冷却，利于药品食品的稳定品食品的稳定 2、流通蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法 流通蒸汽灭菌是在不密闭的容器内，用蒸汽灭菌，流通蒸汽灭菌是在不密闭的容器内，用蒸汽灭菌，压力与大气压相等，即压力与大气压相等，即100的蒸汽灭菌的蒸汽灭菌目前我国某些药厂生产注射剂，特别是目前我国某些药厂生产注射剂，特别是12ml的的注射剂及不耐高热的品种，基本上

32、都是采用这种注射剂及不耐高热的品种，基本上都是采用这种灭菌法灭菌法3、煮沸灭菌法、煮沸灭菌法 煮沸灭菌法就是把安瓿或其他物品放入水中煮沸煮沸灭菌法就是把安瓿或其他物品放入水中煮沸灭菌，一般是灭菌，一般是10030min或或60min。此法不能保此法不能保证杀灭所有的芽胞，例如破伤风菌等厌氧菌的芽证杀灭所有的芽胞，例如破伤风菌等厌氧菌的芽胞胞加有适当抑菌剂时，药液经加有适当抑菌剂时，药液经10030min煮沸，可煮沸，可杀死抵抗力强的芽胞。适合煮沸灭菌法使用的抑杀死抵抗力强的芽胞。适合煮沸灭菌法使用的抑菌剂主要有：甲酚（菌剂主要有：甲酚（0.1%0.3%）、氯甲酚）、氯甲酚（0.05%0.1%）

33、等）等 4、低温间歇灭菌法、低温间歇灭菌法 此法系将待灭菌物于此法系将待灭菌物于80加热加热1h后，在后，在2025保持保持24h，连续操作三次以上的灭菌方法（以连续操作三次以上的灭菌方法（以80灭菌结束）灭菌结束）此法在较高温下可以杀死细菌繁殖体但不能杀死此法在较高温下可以杀死细菌繁殖体但不能杀死芽胞，所以在较低温度下杀死细菌繁殖体的同时芽胞，所以在较低温度下杀死细菌繁殖体的同时让芽胞发育变为繁殖体，这样下一次加热时可以让芽胞发育变为繁殖体，这样下一次加热时可以将其杀死，反复操作至芽胞全部灭绝将其杀死，反复操作至芽胞全部灭绝由于此法效果比较差，所以常常加入抑菌剂增强由于此法效果比较差，所以常

34、常加入抑菌剂增强灭菌效力灭菌效力 5、油浴和盐水浴灭菌法、油浴和盐水浴灭菌法 在制备小量注射剂时，药房中如果没有热压灭菌在制备小量注射剂时，药房中如果没有热压灭菌器，或因为量小而使用不经济时，可用盐水浴代器，或因为量小而使用不经济时，可用盐水浴代替，能同样达到灭菌的目的替，能同样达到灭菌的目的 可用饱和氯化铵溶液（沸点可用饱和氯化铵溶液（沸点114）在加热锅中）在加热锅中同安瓿一起煮沸同安瓿一起煮沸30min，溶液中可放红色染料少溶液中可放红色染料少许，用于判断安瓿是否破裂许，用于判断安瓿是否破裂 油浴灭菌法即用不发挥性的脂肪油或轻质矿物油油浴灭菌法即用不发挥性的脂肪油或轻质矿物油置油浴中，将

35、待灭菌的物品浸入，在置油浴中，将待灭菌的物品浸入，在115加热加热灭菌。此法适用于外科器械与其他锋利的器具灭菌。此法适用于外科器械与其他锋利的器具 二、过滤灭菌法二、过滤灭菌法 过滤灭菌法是使药液通过无菌的滤器除去活的或过滤灭菌法是使药液通过无菌的滤器除去活的或死的微生物而得到不含微生物的滤液死的微生物而得到不含微生物的滤液 供灭菌用滤器和过滤介质（滤材）的理想条件：供灭菌用滤器和过滤介质（滤材）的理想条件：有效地从溶液中除净微生物，溶液可以顺畅地从有效地从溶液中除净微生物，溶液可以顺畅地从滤器和滤材中通过。滤器和滤材无吸附性，也无滤器和滤材中通过。滤器和滤材无吸附性，也无落屑进入滤液中，容易

36、清洗、更换落屑进入滤液中，容易清洗、更换 (一一)过滤灭菌法的特点过滤灭菌法的特点 适于不耐热药物的溶液，如生物碱、激素、生化适于不耐热药物的溶液，如生物碱、激素、生化制剂等，可以减少药液中的热原但不能破坏热原制剂等，可以减少药液中的热原但不能破坏热原 加压、减压过滤均可，但加压过滤用的较多，因加压、减压过滤均可，但加压过滤用的较多，因过滤设备如有漏隙则往外泄漏，而不会污染药液过滤设备如有漏隙则往外泄漏，而不会污染药液室温下易挥发、易氧化的药物宜用加压过滤法室温下易挥发、易氧化的药物宜用加压过滤法 过滤灭菌法应配合无菌操作技术进行过滤灭菌法应配合无菌操作技术进行 在过滤灭菌前，药液应进行预过滤

37、，尽量除去颗在过滤灭菌前，药液应进行预过滤，尽量除去颗粒杂质，以便提高除菌过滤的速度粒杂质，以便提高除菌过滤的速度 用过滤法灭菌的成品必须进行无菌检查，合格后用过滤法灭菌的成品必须进行无菌检查，合格后方能使用方能使用 (二二)过滤灭菌常用的滤器与滤材过滤灭菌常用的滤器与滤材 硅藻土滤柱硅藻土滤柱由由硅硅藻藻土土及及有有机机粘粘合合剂剂等等物物混混合合，在在1200高高温温下下烧烧制制而而成成。滤滤孔孔为为34m的的细细号号滤滤柱柱可可滤滤除除溶溶液液中的颗粒杂质和一部分细菌中的颗粒杂质和一部分细菌 白陶土滤器白陶土滤器 由由白白陶陶土土及及细细砂砂混混合合，经经高高温温烧烧结结而而成成，为为瓷

38、瓷制制品品，孔径孔径1.3m以下的可滤除细菌以下的可滤除细菌 垂熔玻璃滤器垂熔玻璃滤器硬硬质质中中性性玻玻璃璃粉粉加加高高温温至至接接近近其其熔熔点点熔熔合合而而成成均均匀匀孔孔径径的的滤滤板板，然然后后再再把把滤滤板板粘粘连连于于不不同同的的玻玻璃璃器器内内制制成成。孔孔径径为为1.52m的的6号号滤滤器器可可以以滤滤除除细细菌但不能滤除芽胞菌但不能滤除芽胞 多孔聚乙烯多孔聚乙烯 简称多孔简称多孔PE，是将聚乙烯高分子粉末烧结以后形是将聚乙烯高分子粉末烧结以后形成的具有一定孔径的滤膜。多孔成的具有一定孔径的滤膜。多孔PE可以滤除杂质可以滤除杂质和一部分细菌，但不能完全除菌，常用于过滤灭和一部

39、分细菌，但不能完全除菌，常用于过滤灭菌前的预过滤，用于滤除药液中的活性炭最方便菌前的预过滤，用于滤除药液中的活性炭最方便 三、紫外线灭菌法三、紫外线灭菌法 紫外线由汞蒸汽灯产生，波长为紫外线由汞蒸汽灯产生，波长为200300nm，其其中波长在中波长在253.7nm的紫外线杀菌作用最强，是近的紫外线杀菌作用最强，是近紫外线（紫外线（300400nm）的数千倍至数万倍的数千倍至数万倍 紫外线杀灭细菌的机制是，经紫外线照射后，细紫外线杀灭细菌的机制是，经紫外线照射后，细菌细胞内脱氧核糖核酸的胸腺嘧啶成为二聚体而菌细胞内脱氧核糖核酸的胸腺嘧啶成为二聚体而失去活性失去活性 根据紫外线的特性，目前紫外线杀

40、菌应用于：空根据紫外线的特性，目前紫外线杀菌应用于：空气灭菌、水中灭菌及固体表面直接照射灭菌气灭菌、水中灭菌及固体表面直接照射灭菌 1、紫外线空气灭菌、紫外线空气灭菌 紫外线空气灭菌效果与环境温度有关。室温紫外线空气灭菌效果与环境温度有关。室温20时，辐射的时，辐射的253.7nm紫外线最强；室温在紫外线最强；室温在10或或40时，所辐射的紫外线降低时，所辐射的紫外线降低1015，而，而0时降低时降低50室内空气湿度与灰尘影响紫外线在空气中的穿透室内空气湿度与灰尘影响紫外线在空气中的穿透率，故也影响紫外线的灭菌效果。比如，空气相率，故也影响紫外线的灭菌效果。比如，空气相对湿度对湿度75时，其杀

41、菌率比时，其杀菌率比RH25时降低时降低18.7；空气中含尘量空气中含尘量8.5105粒粒/升时，杀菌率比无尘时升时，杀菌率比无尘时降低降低2030 2、紫外线水中灭菌、紫外线水中灭菌 紫外线对一些液体的透过率很低，使透到液体内紫外线对一些液体的透过率很低，使透到液体内部的紫外线量减少，故液体中杀菌所需紫外线剂部的紫外线量减少，故液体中杀菌所需紫外线剂量比空气中要大的多量比空气中要大的多紫外线透过率与溶液中的溶质浓度有关，溶质浓紫外线透过率与溶液中的溶质浓度有关，溶质浓度增加，透过率减少，溶液灭菌时，照射剂量应度增加，透过率减少，溶液灭菌时，照射剂量应相应增加相应增加 一般来说，紫外线在水中的

42、透过率最高，故紫外一般来说，紫外线在水中的透过率最高，故紫外灭菌可应用于饮用水、无盐水、纯净水、蒸馏水灭菌可应用于饮用水、无盐水、纯净水、蒸馏水及注射用水的生产及注射用水的生产3、固体表面灭菌、固体表面灭菌 制药生产中，物料、机械、容器等表面所附着的制药生产中，物料、机械、容器等表面所附着的细菌，采用紫外线灭菌比较有效。可以放置于灭细菌，采用紫外线灭菌比较有效。可以放置于灭菌柜中，柜的内壁应采用反射率较高的铝板，柜菌柜中，柜的内壁应采用反射率较高的铝板，柜的隔板需用网状的隔板需用网状 紫外线灭菌的注意事项：紫外线灭菌的注意事项： 紫外线能促使易氧化紫外线能促使易氧化的药物或油脂等氧化变质，故生

43、产此类药物制剂的药物或油脂等氧化变质，故生产此类药物制剂时不能使用紫外线灭菌；时不能使用紫外线灭菌； 普通玻璃可吸收紫普通玻璃可吸收紫外线，因此安瓿中的药物不能用此法灭菌；外线，因此安瓿中的药物不能用此法灭菌； 紫外线对人体如果照射过久，会产生眼结膜炎或紫外线对人体如果照射过久，会产生眼结膜炎或皮肤灼烧等现象；皮肤灼烧等现象； 各种紫外灯都有一定的有各种紫外灯都有一定的有效时间，一般为效时间，一般为3000h 四、微波灭菌法四、微波灭菌法 微波通常是指频率大于微波通常是指频率大于300兆赫，波长短于兆赫，波长短于1m的的高频率振荡电磁波高频率振荡电磁波 微波灭菌法是利用高频电场使物质内部分子极

44、化微波灭菌法是利用高频电场使物质内部分子极化迅速升温的灭菌方法。微波穿透物质使之吸收微迅速升温的灭菌方法。微波穿透物质使之吸收微波能量，并转化为热能呈现灭菌作用波能量，并转化为热能呈现灭菌作用微波灭菌常用于口服液的灭菌微波灭菌常用于口服液的灭菌 普通微波炉中可以发射出频率为普通微波炉中可以发射出频率为2450兆赫的微波，兆赫的微波，产生高温，也可以杀灭细菌。广东格兰仕集团进产生高温，也可以杀灭细菌。广东格兰仕集团进行了以下测定：用行了以下测定：用WP700格兰仕微波炉对每克含格兰仕微波炉对每克含有有200万个细菌的熏肉进行灭菌，发现万个细菌的熏肉进行灭菌，发现30秒后仅秒后仅存活每克存活每克1

45、8个，个，60秒后全部杀死秒后全部杀死 五、辐射灭菌法五、辐射灭菌法 辐射灭菌是应用射线灭菌的方法，目前应用的有辐射灭菌是应用射线灭菌的方法，目前应用的有穿透力较强的穿透力较强的射线和穿透力较弱的射线和穿透力较弱的射线射线 其优点在于：其优点在于： 价格便宜，节约能源；价格便宜，节约能源； 可在可在常温下进行，不破坏被辐射的挥发性成分，适合常温下进行，不破坏被辐射的挥发性成分，适合热敏材料的消毒、灭菌，这也是辐射灭菌的最大热敏材料的消毒、灭菌，这也是辐射灭菌的最大特点；特点；穿透力强，在包装条件下也可以灭菌；穿透力强，在包装条件下也可以灭菌； 速度快，操作简便，便于连续作业速度快，操作简便，便

46、于连续作业 (一一)射线种类射线种类 射线是由钴射线是由钴-60或铯或铯-137发出的电磁波，不带电发出的电磁波，不带电荷即穿透力很强的光子，适用于较厚样品的灭菌，荷即穿透力很强的光子，适用于较厚样品的灭菌，可用于密封安瓿和和整瓶药物的灭菌，还可以穿可用于密封安瓿和和整瓶药物的灭菌，还可以穿透包装进行灭菌透包装进行灭菌 射线是由电子加速器产生的高速电子流，带负射线是由电子加速器产生的高速电子流，带负电荷，穿透力较弱，通常仅用于非常薄和密度低电荷，穿透力较弱，通常仅用于非常薄和密度低的物质的灭菌，在物质的比重为的物质的灭菌，在物质的比重为1，不计容器壁，不计容器壁的比重和厚度时，它平均只能穿透层

47、后约的比重和厚度时，它平均只能穿透层后约2cm的的物质，比物质，比射线的灭菌效果差射线的灭菌效果差 (二二)辐射灭菌的机制辐射灭菌的机制 直接电离作用直接电离作用射线可使微生物体内蛋白质、核酸等有机大分子射线可使微生物体内蛋白质、核酸等有机大分子化合物的分子直接发生电离，产生破坏正常代谢化合物的分子直接发生电离，产生破坏正常代谢的自由基。这种自由基可以和水中的氢氧自由基的自由基。这种自由基可以和水中的氢氧自由基或氢自由基继续起反应，形成不稳定的有机过氧或氢自由基继续起反应，形成不稳定的有机过氧化物，导致生物大分子的分解化物，导致生物大分子的分解 直接激发作用直接激发作用射线除了能促使分子电离以

48、外，也能激发各种复射线除了能促使分子电离以外，也能激发各种复杂的生物大分子，使其结构产生一系列化学变化，杂的生物大分子，使其结构产生一系列化学变化，继而扰乱正常的代谢过程。如辐射后导致微生物继而扰乱正常的代谢过程。如辐射后导致微生物的细胞核和细胞浆不可逆的化学变化，伤害染色的细胞核和细胞浆不可逆的化学变化，伤害染色体的粗大结构，以致许多细菌立即死亡，剩余的体的粗大结构，以致许多细菌立即死亡，剩余的逐渐死亡逐渐死亡 化学键的断裂化学键的断裂大剂量的射线可以使构成微生物体的物质如蛋白大剂量的射线可以使构成微生物体的物质如蛋白质分子中的化学键发生断裂，而使与这些物质有质分子中的化学键发生断裂，而使与

49、这些物质有关的某些代谢环节发生障碍，从而使微生物细胞关的某些代谢环节发生障碍，从而使微生物细胞生长和分裂停止，导致死亡生长和分裂停止，导致死亡 间接作用间接作用辐射射线还可作用于微生物体内的水分子，引起辐射射线还可作用于微生物体内的水分子，引起水的电离和激发，生成自由基进而作用于生物大水的电离和激发，生成自由基进而作用于生物大分子的正常代谢分子的正常代谢 (三三)灭菌辐射的剂量灭菌辐射的剂量 辐射灭菌剂量是指被照射的药品达到如同用热压辐射灭菌剂量是指被照射的药品达到如同用热压灭菌法时所达到的同样的灭菌程度时的剂量。包灭菌法时所达到的同样的灭菌程度时的剂量。包括最大承受剂量、最大处理剂量和最小处

50、理剂量括最大承受剂量、最大处理剂量和最小处理剂量 剂量的确定是由剂量的确定是由1962年成立的美国医疗仪器发展年成立的美国医疗仪器发展协会（协会（AAMI）组成的一个辐射灭菌小组委员会组成的一个辐射灭菌小组委员会确定的确定的 最大承受剂量是指导致药品质量发生不可接受的最大承受剂量是指导致药品质量发生不可接受的变化的极限以下的最大剂量变化的极限以下的最大剂量 最大处理剂量是由判断决定，通常设定在最大承最大处理剂量是由判断决定，通常设定在最大承受剂量以下，以保证产品不会受到过多的辐射。受剂量以下，以保证产品不会受到过多的辐射。一般是由产品的装载量和辐射源的强度等确定一般是由产品的装载量和辐射源的强

51、度等确定 最小处理剂量是指对产品能达到预期的消毒和灭最小处理剂量是指对产品能达到预期的消毒和灭菌目的的最小剂量菌目的的最小剂量 最大处理剂量和最小处理剂量的比值是辐射灭菌最大处理剂量和最小处理剂量的比值是辐射灭菌成功的关键成功的关键 FDA认可的最小处理剂量一般是认可的最小处理剂量一般是1.5Mrad（兆拉兆拉德），但也需要提供适当的微生物测试数据作为德），但也需要提供适当的微生物测试数据作为批准依据。英国药典、美国药典都规定最大辐射批准依据。英国药典、美国药典都规定最大辐射灭菌处理剂量为灭菌处理剂量为2.5Mrad，实验证明，剂量为实验证明，剂量为2.5Mrad的辐射灭菌等于在高压灭菌器内的

52、辐射灭菌等于在高压灭菌器内120灭灭菌菌20分钟分钟 在实际生产应用中，由于制剂不可能污染很多细在实际生产应用中，由于制剂不可能污染很多细菌，所以剂量往往要小的多。例如，菌，所以剂量往往要小的多。例如，12ml塑料塑料安瓿的阿托品、吗啡注射液和安瓿的阿托品、吗啡注射液和250500ml塑料袋塑料袋装的氯化钠或葡萄糖溶液，用装的氯化钠或葡萄糖溶液，用510410104R剂剂量的量的射线进行照射即可达到灭菌效果射线进行照射即可达到灭菌效果 (四四)影响辐射灭菌的因素影响辐射灭菌的因素 大肠杆菌混悬液，每大肠杆菌混悬液，每ml含含80万万1亿个细菌，照亿个细菌，照射射20104R即可灭菌，而每即可灭

53、菌，而每ml含含100亿个细菌，则亿个细菌，则要照射要照射60104R才能完全灭菌才能完全灭菌 水和氧气均能增加辐射灭菌的效果，原因是射线水和氧气均能增加辐射灭菌的效果，原因是射线可以将水或氧气电离成自由基，进而影响细菌代可以将水或氧气电离成自由基，进而影响细菌代谢谢 加入卤代酚可使辐射灭菌效应显著增加，并且得加入卤代酚可使辐射灭菌效应显著增加，并且得到以下规律：到以下规律：IBrCl，取代位次序是：对位取代位次序是：对位间位邻位，并且效应随卤原子数目的增加而间位邻位，并且效应随卤原子数目的增加而增强增强 (五五)可用辐射法灭菌的药品和材料可用辐射法灭菌的药品和材料 v 抗生素类：青霉素抗生素

54、类：青霉素G钾、链霉素、土霉素、红钾、链霉素、土霉素、红霉素、利副平等；霉素、利副平等； 激素类：雌二醇、可的松、激素类：雌二醇、可的松、强的松龙等；强的松龙等； 巴比妥类：苯巴比妥、戊巴比妥巴比妥类：苯巴比妥、戊巴比妥等；等； 疫苗、抗毒素类：斑疹伤害疫苗、白喉抗疫苗、抗毒素类：斑疹伤害疫苗、白喉抗毒素等；毒素等； 其他：生理盐水、注射用水、盐酸普其他：生理盐水、注射用水、盐酸普鲁卡因溶液、维生素鲁卡因溶液、维生素C注射液等注射液等 (六六)不宜用辐射法灭菌的药品和材料不宜用辐射法灭菌的药品和材料 v 生物碱类：硫酸阿托品注射液、磷酸可待因、生物碱类：硫酸阿托品注射液、磷酸可待因、盐酸吗啡注

55、射液等；盐酸吗啡注射液等； 生物制品：胰岛素注射生物制品：胰岛素注射液、破伤风抗毒素、冻干人血浆等；液、破伤风抗毒素、冻干人血浆等； 强心苷强心苷类：洋地黄毒苷注射液；类：洋地黄毒苷注射液； 维生素类：维生素维生素类：维生素B6注射液、维生素注射液、维生素B12注射液等；注射液等； 酶类：玻璃酶类：玻璃质酸酶；质酸酶； 其他：其他：5葡萄糖注射液、葡萄糖注射液、20甘露甘露醇注射液等；醇注射液等； 有机颜料：经射线照射易分解有机颜料：经射线照射易分解产生致癌物，所以应严格控制辐射剂量产生致癌物，所以应严格控制辐射剂量 第四节第四节 化学灭菌法化学灭菌法 一、气体灭菌法一、气体灭菌法 是指用化学

56、品的气体或蒸汽进行灭菌的方法。用是指用化学品的气体或蒸汽进行灭菌的方法。用于药物灭菌的气体希望具备下列要求：于药物灭菌的气体希望具备下列要求： 在室温在室温时能形成气体或蒸汽；时能形成气体或蒸汽； 穿透力强，并容易在灭穿透力强，并容易在灭菌物中分布；菌物中分布； 灭菌作用快、毒性低，在低浓度灭菌作用快、毒性低，在低浓度就具有杀菌作用；就具有杀菌作用； 无腐蚀性、爆炸性及刺激性无腐蚀性、爆炸性及刺激性 (一一)环氧乙烷环氧乙烷 在室温下无色，沸点在室温下无色，沸点10.8，沸点以下为，沸点以下为无色透明液体；在水中溶解度很大，无色透明液体；在水中溶解度很大，1ml水中可溶水中可溶195ml；有较

57、强的扩散和穿透力，有较强的扩散和穿透力，作用快；对细菌芽胞、真菌、病毒等各种作用快；对细菌芽胞、真菌、病毒等各种微生物均有杀灭作用，属于广谱杀菌剂微生物均有杀灭作用，属于广谱杀菌剂 环氧乙烷属烷化剂，细菌蛋白质分子、酶、核环氧乙烷属烷化剂，细菌蛋白质分子、酶、核酸中的氨基、羟基、羧基与环氧乙烷相结合，酸中的氨基、羟基、羧基与环氧乙烷相结合，对菌体细胞的代谢产生不可逆的破坏对菌体细胞的代谢产生不可逆的破坏 应用范围应用范围可用于对热敏感的固体药物、塑料容器、注射器、可用于对热敏感的固体药物、塑料容器、注射器、皮革制品、手术器械等皮革制品、手术器械等 灭菌机制灭菌机制环氧乙烷灭菌的注意事项环氧乙烷

58、灭菌的注意事项 环氧乙烷具可燃性，当与空气混合后空气含量达环氧乙烷具可燃性，当与空气混合后空气含量达3.0（V/V）时即可爆炸。故应用时需用惰性气时即可爆炸。故应用时需用惰性气体二氧化碳或卤代烃稀释体二氧化碳或卤代烃稀释 环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强，亲和环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强，亲和力强，故灭菌完毕后需通洁净空气力强，故灭菌完毕后需通洁净空气1224h驱除驱除残余气体。另外，某些被灭菌材料能吸收环氧乙残余气体。另外，某些被灭菌材料能吸收环氧乙烷而降低其浓度烷而降低其浓度 环氧乙烷灭菌器装置环氧乙烷灭菌器装置 自动化连续作业：加温、加湿、启动真空泵、输自动化连续作业：加温、

59、加湿、启动真空泵、输入气体、灭菌、残余气体排出入气体、灭菌、残余气体排出 灭菌器使用的灭菌气体包括三种：灭菌器使用的灭菌气体包括三种： 甲：甲：12环氧乙烷十环氧乙烷十88氟利昂氟利昂 乙：乙：30环氧乙烷十环氧乙烷十70二氧化碳二氧化碳 丙：纯环氧乙烷丙：纯环氧乙烷温度仪和湿度仪控制温度达到温度仪和湿度仪控制温度达到5055，湿度，湿度50，此时灭菌效果最好，此时灭菌效果最好 气体输入量准确，常用范围是气体输入量准确，常用范围是400800mg/L 灭菌后，真空泵将环氧乙烷气体抽尽，用滤过后灭菌后，真空泵将环氧乙烷气体抽尽，用滤过后的净化空气输入灭菌柜，保持的净化空气输入灭菌柜，保持1224

60、h驱除残余驱除残余气体，并防止外界空气的污染气体，并防止外界空气的污染 影响环氧乙烷灭菌效果的因素影响环氧乙烷灭菌效果的因素 环氧乙烷的浓度大，灭菌所需的时间短。如浓度环氧乙烷的浓度大，灭菌所需的时间短。如浓度为为850900mg/L（45），），灭菌时间为灭菌时间为3h；浓度浓度为为450mg/L，灭菌时间为灭菌时间为56h 灭菌温度如果低于最佳温度灭菌温度如果低于最佳温度5055，则灭菌效，则灭菌效果差果差 相对湿度相对湿度3060为宜，为宜，50最佳，小于最佳，小于20大于大于80则灭菌效果减弱，则灭菌效果减弱，RH在在25以下对芽以下对芽胞不起作用胞不起作用 灭菌器内压力较大则灭菌效果

61、较好灭菌器内压力较大则灭菌效果较好 各种微生物对环氧乙烷的敏感性不同，最敏感的各种微生物对环氧乙烷的敏感性不同，最敏感的是酵母菌、真菌，最差的是芽胞是酵母菌、真菌，最差的是芽胞 (二二)甲醛甲醛 甲醛也是一种灭菌力强的广谱抗菌体，广泛应用甲醛也是一种灭菌力强的广谱抗菌体，广泛应用于无菌操作室的灭菌于无菌操作室的灭菌 灭菌时，将甲醛溶液加热熏蒸，每立方米空间用灭菌时，将甲醛溶液加热熏蒸，每立方米空间用40甲醛溶液甲醛溶液30ml 室内需较高的相对湿度，可以增加灭菌效果。但室内需较高的相对湿度，可以增加灭菌效果。但甲醛对人体伤害较大，灭菌结束后需将甲醛气体甲醛对人体伤害较大，灭菌结束后需将甲醛气体

62、排除排除 (三三)其他其他 丙二醇：具有不挥发性和引火性的特点，灭菌用丙二醇：具有不挥发性和引火性的特点，灭菌用量量1ml/m3，加热蒸汽灭菌加热蒸汽灭菌-丙内酯：环状内酯，属烷化剂，灭菌机制与环丙内酯：环状内酯，属烷化剂，灭菌机制与环氧乙烷类似。室温不燃烧，不爆炸，水解产物无氧乙烷类似。室温不燃烧，不爆炸，水解产物无毒性，但穿透力差，多用于房间表面灭菌。常用毒性，但穿透力差，多用于房间表面灭菌。常用蒸汽浓度为蒸汽浓度为24mg/L，温度不低于温度不低于24，相对湿，相对湿度不少于度不少于70，暴露灭菌时间，暴露灭菌时间2h以上以上 乳酸：用量乳酸：用量2ml/m3，杀菌力虽不及甲醛，但对人杀

63、菌力虽不及甲醛，但对人体无害体无害 过氧乙酸：常用于车间的室内灭菌，效力比相同过氧乙酸：常用于车间的室内灭菌，效力比相同浓度的甲醛大浓度的甲醛大2.5倍，对眼部、粘膜无刺激性，对倍，对眼部、粘膜无刺激性，对布制品、木制品、医疗器械无影响，用量是布制品、木制品、医疗器械无影响，用量是20的过氧乙酸溶液的过氧乙酸溶液3050ml/m3，暴露灭菌时间暴露灭菌时间2h以上以上 二、表面消毒二、表面消毒 大多数化学消毒剂仅能杀灭微生物的繁殖体，而大多数化学消毒剂仅能杀灭微生物的繁殖体，而不能杀灭芽胞，所以在制药工业中主要用来进行不能杀灭芽胞，所以在制药工业中主要用来进行表面消毒，即在已控制的环境中减少细

64、菌或维持表面消毒，即在已控制的环境中减少细菌或维持无菌状态无菌状态 理想的表面消毒剂须具备的性质理想的表面消毒剂须具备的性质 使用条件下高效使用条件下高效 在有效抗菌浓度时，易溶或混溶于水在有效抗菌浓度时，易溶或混溶于水 无腐蚀性，低毒，对皮肤等组织无害、无过敏作无腐蚀性，低毒，对皮肤等组织无害、无过敏作用用 对布及金属无害对布及金属无害 与其他抗微生物试剂和其他消毒剂无配伍禁忌与其他抗微生物试剂和其他消毒剂无配伍禁忌 贮存过程中稳定，对大幅度的温度变化显示长效贮存过程中稳定，对大幅度的温度变化显示长效稳定性稳定性 价格便宜价格便宜 无特殊的嗅、味和颜色无特殊的嗅、味和颜色 常用的消毒剂常用的

65、消毒剂 l酚类：对细菌的细胞壁和细胞质膜有损害作用，酚类：对细菌的细胞壁和细胞质膜有损害作用，使菌体内成分漏出，蛋白质变性，也可抑制某些使菌体内成分漏出，蛋白质变性，也可抑制某些酶系统。苯酚常用酶系统。苯酚常用0.53，甲苯酚常用，甲苯酚常用25 l醇类：能使菌体蛋白质变性。常用醇类：能使菌体蛋白质变性。常用7090的的乙醇乙醇 l醛类：甲醛醛类：甲醛 l烷基化合物：常用环氧乙烷烷基化合物：常用环氧乙烷 l氧化剂：可氧化菌体酶系统，使其失去活性。氧化剂：可氧化菌体酶系统，使其失去活性。如过氧乙酸、高锰酸钾、双氧水等如过氧乙酸、高锰酸钾、双氧水等 l表面活性剂：表面活性剂：0.10.2洗必泰，洗

66、必泰，0.10.2新新洁尔灭洁尔灭 l卤素和卤素化合物：如氯气、漂白粉等卤素和卤素化合物：如氯气、漂白粉等 l重金属盐类：高浓度的汞、银、铜离子是蛋白重金属盐类：高浓度的汞、银、铜离子是蛋白质沉淀剂质沉淀剂 第五节第五节 其他灭菌方法其他灭菌方法 紫外线灭菌：穿透能力小，在紫外线照射不到紫外线灭菌：穿透能力小，在紫外线照射不到的地方，消毒效果不好；其杀菌能力随着使用的地方，消毒效果不好；其杀菌能力随着使用时间的增加而减小，而且，灯管寿命短，更换时间的增加而减小，而且，灯管寿命短，更换过于频繁，运行费用高过于频繁，运行费用高 化学试剂灭菌：操作麻烦，熏蒸时间长，有二化学试剂灭菌：操作麻烦，熏蒸时

67、间长，有二次污染物，对人体有一定的危害，残留物附着次污染物，对人体有一定的危害，残留物附着洁净室的墙壁上，和设备的表面上，需要擦除。洁净室的墙壁上，和设备的表面上，需要擦除。在消毒后的几天内，其悬浮粒子数会增加在消毒后的几天内，其悬浮粒子数会增加加热灭菌：温度高，能耗大，有的物品如某些加热灭菌：温度高，能耗大，有的物品如某些原材料，仪器仪表，塑料制品等就不宜加热原材料，仪器仪表，塑料制品等就不宜加热 一、臭氧灭菌法一、臭氧灭菌法 臭氧是一种强氧化剂，是氧的同素异形转变的一臭氧是一种强氧化剂，是氧的同素异形转变的一种，分子式是种，分子式是O3 O3灭菌形式：灭菌形式：u氧化分解细菌内部葡萄糖所需

68、的酶氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶u直接与细菌、病毒作用，破坏它们的细胞器和直接与细菌、病毒作用，破坏它们的细胞器和DNA、RNA，破坏细菌的新陈代谢，破坏细菌的新陈代谢u侵入细胞内，作用于外膜的脂蛋白和内部的脂多侵入细胞内，作用于外膜的脂蛋白和内部的脂多糖，使细菌发生通透性畸变而溶解死亡糖，使细菌发生通透性畸变而溶解死亡 臭氧的消毒原理臭氧的消毒原理 l臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧气（分解成氧气（O2）和单个氧原子（）和单个氧原子（O）lO具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，从而杀灭细

69、菌从而杀灭细菌 l多余的多余的O则会自行重新结合成为氧分子（则会自行重新结合成为氧分子（O2），），不存在任何有毒残留物，故称无污染消毒剂不存在任何有毒残留物，故称无污染消毒剂 O3在容器灭菌中的应用在容器灭菌中的应用 l传统方法：酒精浸泡。缺点：用量太大，操作十传统方法：酒精浸泡。缺点：用量太大，操作十分复杂分复杂 l臭氧灭菌方法：将高浓度的臭氧直接打人管道容臭氧灭菌方法：将高浓度的臭氧直接打人管道容器，保持臭氧尾气有一定的浓度，就可以达到消器，保持臭氧尾气有一定的浓度，就可以达到消毒灭菌的目的毒灭菌的目的 O3在工厂洁净区的灭菌在工厂洁净区的灭菌 l将臭氧发生装置安装在中央空调机风道的内部

70、或将臭氧发生装置安装在中央空调机风道的内部或外口，借助中央空调将其送至全部区域进行灭菌。外口，借助中央空调将其送至全部区域进行灭菌。剩余的臭氧吸入回风口，由空调带走。只要在上剩余的臭氧吸入回风口，由空调带走。只要在上班前班前2小时开机，上班时关机就可以保证一天洁小时开机，上班时关机就可以保证一天洁净区内的细菌含量符合净区内的细菌含量符合GMP的要求的要求 二、低温等离子灭菌法二、低温等离子灭菌法 对气体施加电场，使荷电粒子加速，较重的电子对气体施加电场，使荷电粒子加速，较重的电子被加速且与较重粒子碰撞而引起电离，最终形成被加速且与较重粒子碰撞而引起电离，最终形成等离子体等离子体低温等离子灭菌的

71、应用范围低温等离子灭菌的应用范围 ：l用于食品表面、液体食品和小包装食品的灭菌用于食品表面、液体食品和小包装食品的灭菌 l应用于医疗用热敏性器械、金属器械和电子探头应用于医疗用热敏性器械、金属器械和电子探头传感器的灭菌传感器的灭菌 l应用于需反复使用的医疗制品的灭菌应用于需反复使用的医疗制品的灭菌 等离子体杀菌消毒机理等离子体杀菌消毒机理 等离子体形成过程中产生的大量紫外线直接破坏等离子体形成过程中产生的大量紫外线直接破坏微生物的基因物质微生物的基因物质 紫外光子固有的光解作用打破微生物分子的化学紫外光子固有的光解作用打破微生物分子的化学键，最后生成挥发性的化合物键，最后生成挥发性的化合物 通

72、过等离子体的蚀刻作用，即等离子体中活性物通过等离子体的蚀刻作用，即等离子体中活性物质与微生物体内的蛋白质和核酸发生化学反应，质与微生物体内的蛋白质和核酸发生化学反应，能够摧毁微生物和扰乱微生物的生存功能能够摧毁微生物和扰乱微生物的生存功能 第六节第六节 无菌操作法无菌操作法 l无菌操作法是指整个过程控制在无菌条件下进行无菌操作法是指整个过程控制在无菌条件下进行的制剂制备的操作方法的制剂制备的操作方法 l无菌操作所用的一切用具、材料及环境，都需要无菌操作所用的一切用具、材料及环境，都需要选择合适的灭菌方法灭菌选择合适的灭菌方法灭菌 l无菌操作一般需在无菌操作室或无菌柜内进行。无菌操作一般需在无菌

73、操作室或无菌柜内进行。在药物制剂中，一些不耐热的药物制成注射剂、在药物制剂中，一些不耐热的药物制成注射剂、眼用制剂、眼用软膏等，往往采用无菌操作法眼用制剂、眼用软膏等，往往采用无菌操作法 一、无菌操作室的灭菌一、无菌操作室的灭菌 甲醛溶液加热熏蒸法甲醛溶液加热熏蒸法 紫外线灭菌紫外线灭菌 液体灭菌液体灭菌 甲醛溶液加热熏蒸法甲醛溶液加热熏蒸法 l在无菌室风道的入口安装甲醛加热装置，将蒸汽在无菌室风道的入口安装甲醛加热装置，将蒸汽引入风道由鼓风机送入无菌室，连续送气引入风道由鼓风机送入无菌室，连续送气3h，关，关闭鼓风机闭鼓风机 l在保证室内温度在保证室内温度25，湿度，湿度60的条件下，的条件

74、下，密闭熏蒸密闭熏蒸1224h l熏蒸完毕后，将熏蒸完毕后，将25的氨水加热（每的氨水加热（每m2用用810ml），蒸汽送入风道由鼓风机送入无菌室驱赶），蒸汽送入风道由鼓风机送入无菌室驱赶甲醛蒸汽，同时开启出风口排风装置并通入无菌甲醛蒸汽，同时开启出风口排风装置并通入无菌空气直到甲醛全部被清除空气直到甲醛全部被清除 n安装紫外灯，利用紫外线灭菌是无菌室灭菌的常安装紫外灯，利用紫外线灭菌是无菌室灭菌的常规方法，比较简便。一般每天工作前开启规方法，比较简便。一般每天工作前开启1h，中，中午休息时开午休息时开0.51h n除了定期对无菌室进行甲醛熏蒸，每天开启紫外除了定期对无菌室进行甲醛熏蒸，每天开

75、启紫外灯灭菌以外，对室内的墙面、地面、用具也需要灯灭菌以外，对室内的墙面、地面、用具也需要用液体消毒剂进行灭菌。常用的有：用液体消毒剂进行灭菌。常用的有：0.2苯扎溴苯扎溴铵、铵、75乙醇等乙醇等紫外线灭菌紫外线灭菌 液体灭菌液体灭菌 二、无菌操作二、无菌操作 l操作人员进入操作间之前要洗澡，并换上已灭菌操作人员进入操作间之前要洗澡，并换上已灭菌的工作服和鞋帽的工作服和鞋帽 l安瓿要用安瓿要用150180，23h干热灭菌干热灭菌 l橡皮塞用橡皮塞用121，1h热压灭菌热压灭菌 l用无菌操作法制备的注射液由于没有后续的灭菌用无菌操作法制备的注射液由于没有后续的灭菌处理，一般都要加入抑菌剂处理，一般都要加入抑菌剂 无菌操作柜分小型无菌操作柜与联合无菌操作柜无菌操作柜分小型无菌操作柜与联合无菌操作柜小型无菌操作柜又称单人无菌柜，式样有单面式小型无菌操作柜又称单人无菌柜，式样有单面式与双面式两种与双面式两种联合无菌操作柜是由几个小型操作柜联合制成，联合无菌操作柜是由几个小型操作柜联合制成，以使原料的精制，传递分装及成品暂时存放等工以使原料的精制，传递分装及成品暂时存放等工作全部在柜内进行作全部在柜内进行近年来，采用层流洁净工作台作无菌操作，使用近年来，采用层流洁净工作台作无菌操作，使用方便，效果可靠方便，效果可靠无菌操作设备无菌操作设备超净工作台超净工作台 无菌操作柜无菌操作柜