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1、药药 物物 分分 析析Pharmaceutical Analysis主讲教师：王英武主讲教师：王英武吉林大学药物代谢研究中心13844072416; JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCEJILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*各种药典各种药典中国药典: Chinese Pharmacopoeia（Ch. P）美国药典:The United States Pharmacopoeia，USP（30）美国国家处方集:The National Formulary，NF(25） USP与NF合并出版, 2007年版本 US
2、P(30)-NF(25）英国药典:British Pharmacopoeia，BP (2008）日本药局方:The Japanese Pharmacopoeia，JP (15)欧洲药典:European Pharmacopoeia，Ph. Eur/EP (6)国际药典:The International Pharmacopoeia，Ph. Int (3) 2JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*GMP: Good Manufacture Practice药品生产质量管理规范GSP: Good Supply Practice药品经营质量管理规范GLP:
3、Good Laboratory Practice药物非临床研究质量管理规范GCP: Good Clinical Practice药物临床试验质量管理规范AQC: Analytical Quality Control 分析质量管理三、三、药品质量管理规范药品质量管理规范3JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*中国药典分为三部一部：收载药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂二部：化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品收载药用辅料。三部：收载生物制品。中国药典中国药典4JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*
4、凡例（ General Notices ）正文（ Monographs ）附录（Appendices）索引（Index）药典内容药典内容5JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*标准品、对照品计量“xxx滴定液（YYYmol/L)” 、“YYYmol/L xxx滴定液”%(g/g) 、%(ml/ml)、 %(ml/g)20C时 以1.0ml水为20滴“(110)”:固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml 加溶剂使成10ml的溶液 甲醇-水（20：80）精密度“约”：10%“称定”：精确到1%，“精密称定”：0.1%试药、试药、指示剂凡例6JILIN UNI
5、VERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*恒恒重重：是是指指供供试试品品连连续续两两次次干干燥燥或或炽炽灼灼后后的的质质量量差异在差异在0.3mg以下的重量。以下的重量。干干燥燥至至恒恒重重的的第第二二次次及及以以后后各各次次称称重重均均应应在在规规定定条件下继续干燥条件下继续干燥1h后进行；后进行；炽炽灼灼至至恒恒重重的的第第二二次次称称重重应应在在继继续续炽炽灼灼30min后后进行进行“按干燥品计算按干燥品计算”“空空白白实实验验”： 指指在在不不加加供供试试品品或或以以等等量量溶溶剂剂替替代供试液的情况下，按同法操作所德的结果，代供试液的情况下，按同法操作所德的结果，
6、7JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*限度数值要求限度数值要求 纯度和限度数值要求纯度和限度数值要求95.1%98.3%最后一位数是有效位。最后一位数是有效位。 原料药的含量百分比原料药的含量百分比有有时时会会出出现现大大于于100%的的情情况况，(90%110%)是是指指用用有有些些分析方法可能达到的数值，并不是真实的含量。分析方法可能达到的数值，并不是真实的含量。如没有规定是指不超过如没有规定是指不超过101.0%. 制剂的含量百分比制剂的含量百分比一一般般是是按按100%投投料料，如如已已知知某某一一成成分分在在生生产产或或贮贮藏藏期期间含量会
7、降低，生产时可适当增加投料。间含量会降低，生产时可适当增加投料。8JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*取样量的准确度、实验精密度及限度取样量的准确度、实验精密度及限度数值要求数值要求 A取样量的准确度、实验精密度取样量的准确度、实验精密度“称称取取”“量量取取”：其其精精确确度度可可根根据据数数值值的的有有效效数数字字 来来 确确 定定 。 0.1g， （ 0.060.14g） ； 2g，（1.52.5g）2.0g (1.952.05)“精精密密称称定定”：称称取取重重量量应应准准确确至至所所取取重重量量的的千千分分之之一；一；“称定称定”：称取重量
8、应准确至所取重量的百分之一；：称取重量应准确至所取重量的百分之一；“约约”：取用量不得超过规定量的：取用量不得超过规定量的 10%9JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*溶解度溶解度极易溶解易溶溶解略溶微溶极微溶解几乎不溶或不溶 10JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*常用术语常用术语遮光密闭密封熔封或严封阴凉处凉暗处冷处常温11JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*温度以摄氏度温度以摄氏度()表示表示水浴温度热水微温或温水室温冷水冰浴放冷12JILIN UNIVER
9、SITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*各国药典的药品质量标准内容与区别各国药典的药品质量标准内容与区别内容Ch PUSPBPJPPh.Eur.名称（化学名、英文名等）分子式、分子量、分子结构式来源与含量限度鉴别、检查、含量测定性状贮藏可能的杂质结构作用与用途制剂CA登记号有效期参比物质注意注意：表示该药典特有的项目，表示只是该药典无此项目。13JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*药品检验工作的基本程序药品检验工作的基本程序I取样取样鉴别鉴别检查检查含量测定含量测定写出检验报告写出检验报告14JILIN UNIVERSITYCOLLE
10、GE OF LIFE SCIENCE*取样均匀、合理（科学性，真实性，代表性）性状综合反映药品内在质量(外观、色泽、物理常数等）鉴别判断药物的真伪(依据化学结构和理化性质）检查判断药物的纯度（限度试验）含量测定测定有效成分的量(采用理化方法）药品检验工作的基本程序药品检验工作的基本程序II15JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 3. 取样量取样量 设样品总件数为设样品总件数为x当当x x300300时，时， 当当x x300300时时， 当当x3时，每件取样时，每件取样随机取样按1+x 12随机取样按+x16JILIN UNIVERSITYCOLL
11、EGE OF LIFE SCIENCE*鉴别方法：鉴别方法：化学反应方法光学分析方法色谱分析方法 其他方法：如溶解性能分析。17JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 药物制剂含量测定结果的表示方法 占标示量的百分率(浓度单位用mol / L)如：10葡萄糖注射液 当测定结果为9.6时测定结果表示为：占标示量的百分率9.610 1009618JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*小 结1 什么是什么是中华人民共和国药典中华人民共和国药典？2中华人民共和国药典中华人民共和国药典共有几个版本？共有几个版本？3 中国
12、药典的基本结构如何？中国药典的基本结构如何？4 中国药典采用计量单位的转换中国药典采用计量单位的转换5 专业术语：（溶解度、温度、百分比、溶液专业术语：（溶解度、温度、百分比、溶液的滴、的滴、“（110）”）6 “称取称取”或或“量取量取”、“精密称定精密称定”、“称定称定”、 空白实验空白实验7 常用的国外药典有那些？常用的国外药典有那些？19JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*药品检验工作的基本程序药品检验工作的基本程序取样取样鉴别鉴别检查检查含量测定含量测定写出检验报告写出检验报告20JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIF
13、E SCIENCE*第二章药物鉴别第二章药物鉴别二二. 鉴别试验的项目鉴别试验的项目 三三. 药物的鉴别方法药物的鉴别方法 四四. 鉴别试验的条件鉴别试验的条件一一. 概概 述述21JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、概述一、概述药物的鉴别试验（药物的鉴别试验（identification identification testtest） 判断药物的真伪判断药物的真伪 药品质量检验的首药品质量检验的首项任务项任务药典收载的鉴别试验均为用来证实贮藏的药物是否为其所标示的药物。这些方法有一定的专属性，但不能赖以鉴别未知物。对于原料药，还应结合性状项下
14、的外观和物理常数进行综合判断。22JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、鉴别试验的项目二、鉴别试验的项目性状性状-反映了药物特有的物理性质反映了药物特有的物理性质外观外观聚集状态、晶型、色、臭、味聚集状态、晶型、色、臭、味物理常数物理常数mp, mp, bpbp, , t tD D, , E E1%1%1cm,1cm, , 等等溶解度溶解度鉴别性状(description)鉴别(identification)23JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*固体 液体的温度熔融同时分解的温度初熔-全熔的一段温度Ch
15、. P 收载方法第一法：测定易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品第三法：测定凡士林或其他类似物要求报告初熔和终熔熔熔 点点24JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*在 一 定 波 长 （ 589.3nm） 与 温 度（20C）下，偏振光透过长1dm，含旋光性物质1g/1mL的溶液时测得的旋光度，称为比旋度。 tD = 是手性药物特性及其纯度的主要指标。100CL 比旋度比旋度25JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*物质的旋光度与化学结构、溶液的浓度、液层的物质的旋光度与化学结构、溶液的浓度、液层的厚
16、度及测定时的温度有关厚度及测定时的温度有关= c l :旋光度旋光度; ：物质的比旋：物质的比旋度度 c：浓度浓度(g/ml); l：液层厚度液层厚度 (dm)c = / l 若若c以百分比表示则以百分比表示则c = 100 / l 测定方法：测定方法： 比旋度比旋度26JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 吸收系数在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度（C）、单位液层厚度（L）时的吸收度，称为吸收系数（ E1%1cm 或 ）。C= 1%或1mol/L，L= 1cm E1%1cm = A / CL吸收系数吸收系数27JILIN UNIVE
17、RSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*28JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*反应原理如下：29JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*阴、阳离子的特殊反应例 钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应 取铂丝，盐酸湿润，蘸取供试品，无色火焰中燃烧，火焰显各离子的特征色钠离子钠离子钾离子钙离子30JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*加热铵盐鉴别方法铵盐鉴别方法 供试品加过量加过量NaOH 氨臭硝酸亚汞试纸硝酸亚汞试纸 黑色黑色红色石蕊试纸红色石蕊试纸 蓝色蓝色31
18、JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*氯化物氯化物鉴别鉴别供试液供试液 硝酸硝酸 硝酸银硝酸银 白色白色 白色白色 氨试液氨试液沉淀溶解沉淀溶解 硝酸硝酸 白色白色硫酸盐硫酸盐鉴别鉴别供试液供试液 氯化钡氯化钡 白色白色 白色白色 硝酸（盐酸）硝酸（盐酸） 沉淀不溶沉淀不溶32JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*光谱鉴别法紫外法在指定溶剂中测定23个特定波长处的吸收度比值（峰值与峰值比或峰值与峰谷比），以提高专属性。例 地蒽酚的鉴别试验： 取含量测定项下的溶液，照分光光度法测定，于240400nm的波长范围内
19、测定吸收度，在257、289与356nm的波长处有最大吸收。 规定：A257/A289应为1.061.10； A356/A289应为0.900.94。33JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*综上所述，紫外鉴别方法通常有（1）max，min（2） -A（3） -吸收系数（4） A1/ A2（5）化学处理后测定产物的光谱特性 34JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*红外光谱鉴别法 红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于用其他方法不易
20、区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类药品。35JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*中国药典试样制备有四种方法：压片法用于固体（溴化钾）糊法用于固体膜法用于液体溶液法用于液体%测定前应录制聚苯乙烯薄膜光谱图，并与标准谱图对照，以检查仪器性能。36JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*色谱（TLC，HPLC，GC）鉴别法 利用物质各自的特征色谱行为（Rf值或tR值）进行鉴别试验。 采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。 37第九章 药物的杂质检查
21、第一节 杂质和杂质限量检查JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*种类：按来源分：按结构分：按性质分：无机杂质有机杂质一般杂质特殊杂质信号杂质有害杂质39JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、杂质的限量检查三、杂质的限量检查杂质限量（ L ） = 式中：杂质最大允许量=(浓度C 体积V)标所以：L = C V / S 100%杂质最大允许量供试品量（ S ） 100%40JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*例例1 1 对乙酰氨基酚中检查氯化物。取对乙酰对乙酰氨基酚中
22、检查氯化物。取对乙酰氨基酚氨基酚1.0g,1.0g,加水加水100100ml,ml,加热溶解后冷却，滤加热溶解后冷却，滤过，取滤液过，取滤液2525mlml，依法检查氯化物，发生的依法检查氯化物，发生的浑浊与标准氯化钠溶液浑浊与标准氯化钠溶液5.05.0ml ml （每每1 1ml ml 相当相当于于1010ugug 的的ClCl）制成的对照液比较，不得更制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少？浓。问氯化物的限量是多少？C VL= 100% S10 5125100 1000000100% =0.02%41JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*
23、例例2 2 葡萄糖中检查重金属。取葡萄糖葡萄糖中检查重金属。取葡萄糖4.04.0g g，加水加水2323mlml溶解后，加醋酸盐缓冲液溶解后，加醋酸盐缓冲液( (pH3.5)2mlpH3.5)2ml，依法检查重金属，含重金属依法检查重金属，含重金属不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少少mlml（每每1 1ml ml 相当于相当于1010ugug的的PbPb）? ?L SV=C2 5 /1000000 10 1/1000000=1(ml)42JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*例例3 3 溴化钠中砷盐检查，规定含砷
24、量不得溴化钠中砷盐检查，规定含砷量不得过过0.0000.0002%2%，药典规定，取标准砷液，药典规定，取标准砷液2.02.0mlml（1ugAs/ml1ugAs/ml）。）。应取供试品多少克？应取供试品多少克？ C VS=L2 1 /1000000 0.0002%=1.0 (g)43JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*例例4 4 磷酸可待因中检查吗啡。取本品磷酸可待因中检查吗啡。取本品0.100.10g g，加盐酸溶液（加盐酸溶液（9100091000）使溶解成）使溶解成5 5mlml，加亚硝加亚硝酸钠试液酸钠试液2 2mlml，放置放置1515分
25、钟，加氨试液分钟，加氨试液3 3mlml，所所显颜色与吗啡溶液显颜色与吗啡溶液 取无水吗啡取无水吗啡2.02.0mgmg，加盐酸加盐酸溶液（溶液（ 9 1000 9 1000 ）使溶解成）使溶解成100100ml5.0mlml5.0ml用用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量为多少？量为多少？C VL= 100% S2.0 /100 5.00.20 1000100% =0.05%44JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、氯化物检查法供试液：取规定量供试品，加水溶解成供试液：取规定量供试品，加水溶解成25
26、ml25ml，加，加稀硝酸稀硝酸10ml10ml；如不澄清，应过滤，如不澄清，应过滤，置置50ml50ml纳氏比色官中，加水成纳氏比色官中，加水成40ml40ml标准液：规定量标准氯化钠溶液，加稀硝标准液：规定量标准氯化钠溶液，加稀硝酸酸10ml10ml，置置50ml50ml纳氏比色官中，加水成纳氏比色官中，加水成40ml40ml于供试液、标准液中，分别加入硝酸银于供试液、标准液中，分别加入硝酸银1.0ml1.0ml，用水稀释到用水稀释到50ml50ml，在暗处放在暗处放5min5min，在黑色背景下从上到下比较。在黑色背景下从上到下比较。45JILIN UNIVERSITYCOLLEGE O
27、F LIFE SCIENCE*二、硫酸盐检查法供试液：取规定量供试品，加水溶解成供试液：取规定量供试品，加水溶解成40ml40ml，如不澄清，应过滤，置如不澄清，应过滤，置50ml50ml纳氏比纳氏比色官中，加稀盐酸色官中，加稀盐酸2ml2ml，摇匀。摇匀。标准液：规定量标准硫酸钾溶液，置标准液：规定量标准硫酸钾溶液，置50ml50ml纳氏比色官中，加水成纳氏比色官中，加水成40ml40ml，加稀盐酸加稀盐酸2ml2ml，摇匀。摇匀。于供试液、标准液中，分别加入于供试液、标准液中，分别加入25%25%氯化氯化钡钡5ml5ml，用水稀释到用水稀释到50ml50ml，在暗处放在暗处放10min10
28、min，在黑色背景下从上到下比较。在黑色背景下从上到下比较。46JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、铁盐检查法OHSCNNOHSCNHNO22+- -+ + + + + + +2 24 44 42 24 43 38 82 22 24 42 2) )( (2 2) )( (2 2SOSOSOSONHNHFeFeO OS SNHNHFeFeH HFe3+6SCN-H+Fe(SCN)63-47JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*四、重金属检查法重金属是指在实验条件下能与重金属是指在实验条件下能与S S2-2-
29、作用显作用显色的金属杂质，如银、铅、贡、铜等。主色的金属杂质，如银、铅、贡、铜等。主要以铅为主。要以铅为主。48JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法取取各各药药品品项项下下规规定定量量的的供供试试品品 , ,加加醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液 ( (p pH H 3 3. . 5 5) )2 2m m l l 与与水水适适量量使使成成 2 25 5m m l l, , 加加硫硫代代乙乙酰酰胺胺 2 2m m l l, , 放放 置置 2 2m m i i n n后后, ,与与标标准准铅铅溶溶液液一一定定量量按按同同法法制制成成的的对
30、对照照液液所所形形成成的的棕棕色色 进进 行行 比比 较较 。 . . CH CH3 3CSNHCSNH2 2+ H+ H2 2O CHO CH3 3CONHCONH2 2 + H + H2 2S S H H2 2S + PbS + Pb2+2+ PbSPbS + + 2H2H+ +49JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二种方法将将供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查检查用于在水、乙醇中难溶或能与重金属形成配位化合物而干扰用于在水、乙醇中难溶或能与重金属形成配位化合物而干扰检查的
31、有机药物。检查的有机药物。温度影响较大，温度影响较大，500600500600度为宜。度为宜。必须蒸干除尽氧化氮。否则形成亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，必须蒸干除尽氧化氮。否则形成亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。影响比色。蒸干后加盐酸使成盐酸盐，再蒸干残留的盐酸，加水溶解，蒸干后加盐酸使成盐酸盐，再蒸干残留的盐酸，加水溶解，以氨调以氨调pHpH至中性，加醋酸盐缓冲液至中性，加醋酸盐缓冲液(Ph3.5)(Ph3.5)微热溶解，依法微热溶解，依法测量。测量。对照液按同法处理，保持平行对照液按同法处理，保持平行50JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第三法
32、 在碱性条件下，以硫化钠为试液，适合于不溶于稀酸而溶于碱的药物。 取供试品适量+NaOH+H2O溶解+Na2S试液，与一定量标准铅液同法处理后的颜色比较。第四法 微孔滤膜过滤法，适合于重金属含量低的药物（原理与一法同）。 显色后用 50ml注射器转移至滤器中进行压滤，取下滤膜，干燥，比较生成的斑点颜色。51JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*上盖上盖垫圈滤膜辅助 滤板连接头滤器下部支撑器滤器下部支撑器52JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*五、砷盐检查法砷盐是有毒的物质砷盐是有毒的物质中国药典（中国药典（2
33、0002000年版）采用古蔡法和二年版）采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDCAg-DDC）检检查药物中的砷盐。查药物中的砷盐。53JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第一法第一法 古蔡法古蔡法原理原理: :As3+ 3Zn +3H+ AsH3+3Zn2+AsO33+ 3Zn +9H+ AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+ 3HgBr2 3HBr+As(HBr)3（试纸） 砷斑与2ml标准砷溶液同法操作。 砷斑： As(HgBr)3 (黄色)； AsH(HgBr)2(棕色)； As2Hg3 (棕黑色)54JILI
34、N UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二法 二乙基二硫代氨基甲酸银法 简称 Ag(DDC)法AsH3+ 6Ag(DDC) +3吡啶 As (DDC) 3 + 6Ag （红色胶态银） +3吡啶 HDDC于510nm波长处测定吸收度，以Ag(DDC) 溶液为空白。55JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 七、干燥失重（Loss on drying） 是指药物在规定的条件下经干燥后所减失的重量。主要指水分，也包括其他挥发性杂质。测定方法有：1 1 常压恒温干燥法（105 ） 适用于受热较稳定的药物。 将样品（研细）平铺于
35、扁称量瓶中，厚度5mm。干燥时间一般在达到指定温度后干燥2-4h，称重，再干燥，直至恒重。56JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*2 2 干燥剂干燥法本法适用于受热易分解或易挥发的药物。 将样品置干燥器内干燥至恒重。常用干燥剂有：硅胶、硫酸、无水氯化钙、五氧化二磷等。其中五氧化二磷吸水效力最强，但P2O5吸水后产生H3PO4，若样品对酸不稳定，可能会受影响。57JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*3 3 减压干燥法适用于mp低，受热不稳定及难除去水分的药物。减压干燥时可用减压干燥器或恒温干燥箱，一般压力2.
36、67KPa20mmHg。N通常分析一个药物时，干燥失重与含量测定应同时进行，然后根据干燥失重%，将样品折算成干燥品，再计算含量。58JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*八、水分测定法八、水分测定法I2 +SO2+H2O=2HI+SO3(A-B)F供试品中水分含量= *100%W59JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE* 九、有机溶剂残留量测定法用以检查药物在合成过程中引入的有害有机溶剂。ChP规定：二氧六环 0.038 % 吡啶 0.02 %苯 0.0002 %甲苯 0.089 %氯仿 0.006 %二氯甲烷
37、 0.06 %环氧乙烷 0.001 %60JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第三节 特殊杂质检查方法色谱法（ TLC、HPLC、GC）光谱法化学分析法物理分析法61JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*TLC法杂质对照品法（A）供试品自身对照法（高低浓度法）（B）对照物质法（C）不允许有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量） 样样 对对 样样 对对 样样 对对A B C62JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*HPLC（GC）法峰面积归一化法A杂总/A总100%=杂%
38、 A总=A杂1A杂2A样 杂1 杂2 样63JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*内标法校正因子测定液=对照品内标样品测定液=样品同样量内标 分别进样，记录色谱图。校正因子F=A内/A对m对/m内m杂=FA杂/ A内m内杂质限量%= m杂/W样100%64JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*F=(A内/A对)(m对/m内)m杂=F(A杂/ A内) m内对照样品杂质限量%= m杂/W样100%65JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*外标法m杂= A杂/ A对m对杂质限
39、量%= m杂/W样100%杂质对照品样品66JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*不加校正因子的主成分自身对照法A杂总/A自C自/取样100%=杂质%样品测定液 1 2 3A杂总杂总=A1A2A3自身对照液（1%）67JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第三章 药物的杂质检查药物的纯度概念药物的纯度概念 杂质的来源杂质的来源( (生产和贮藏生产和贮藏) )杂质的种类杂质的种类( (一般和特殊一般和特殊) )杂质的限量检查杂质的限量检查(L = C (L = C V / S V / S 100%)100%)一般
40、杂质检查一般杂质检查(Cl,SO4,Fe,(Cl,SO4,Fe,重金属重金属, ,砷等砷等) )特殊杂质检查特殊杂质检查(TLC,HPLC,UV(TLC,HPLC,UV等等) )68JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*AsO杂质杂质原理原理反应条件反应条件适宜浓度范围适宜浓度范围标准溶液标准溶液氯化物氯化物 Cl+ Ag AgCl(白)稀硝酸5080g/50ml(标准液58ml)氯化钠(10g Cl/ml)硫酸盐硫酸盐 SO42 + Ba2+ BaSO4(白)稀盐酸100500g/50ml(标准液15ml)硫酸钾(100g SO4/ml)铁铁Fe3+
41、 + 6SCN Fe(SCN)63(红)盐酸1050g/50ml(标准液15ml)硫酸铁铵(10g Fe/ml)重金属重金属Pb2+ + S2 PbS （黄-黑）均匀混悬液醋酸盐缓冲液(pH3.5)1020/27ml(标准液12ml)硝酸铅(10g Pb /ml)砷盐砷盐AsO33-+ 3Zn +9H+ AsH3+Zn2+AsH3+ 2HgBr2(试纸) 砷斑盐酸2g/反应液中(标准砷液2ml)三氧化二砷(1gAs/ml)69JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*杂质杂质加酸的作用加酸的作用供试品不澄明供试品不澄明供试品有色供试品有色氯化物氯化物加速A
42、gCl，产生好的乳浊，避免Ag2CO3, Ag2O, Ag3PO4的形成用含硝酸的水洗净滤纸中Cl后过滤供试液内消色法或外消色法硫酸盐硫酸盐防止BaCO3,Ba3(PO4)2 形成 用含盐酸的水洗净滤纸中(SO4)2 后过滤供试液内消色法或外消色法铁铁防止Fe3+水解。Fe2+无反应，加过硫酸铵氧化Fe2+Fe3+标准液与样品液色调不一致，用正丁醇或异戊醇提取红色产物重金属重金属PbS完全。若酸度增大，呈色变浅，甚至不呈色。加稀焦糖液或用内消色法70JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*TLC法杂质对照品法供试品自身对照法（高低浓度法）对照药物法不允许
43、有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量）HPLC（GC）法峰面积归一化法不加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法内标法外标法71JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第四章第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证二二二二. .定量分析方法的特点定量分析方法的特点定量分析方法的特点定量分析方法的特点 三三三三. .药物分析方法的验证药物分析方法的验证药物分析方法的验证药物分析方法的验证 四四四四. .生物样品分析方法的基本要求生物样品分析方法的基本要求生物样品分析方法的基本要求生物样品分析方法的基本要求一一一一. .定
44、量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法72JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第一节 定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定碱水解酸水解经还原分解后测定湿法破坏凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法73JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*74JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、容量分析方法一、容量分析方法1.滴定度滴定度每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测
45、药物浓度。被测药物被测药物 滴定液滴定液第二节 定量分析方法的特点75JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*76JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二节 定量分析方法的特点二、光谱分析法二、光谱分析法( (一一) )紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法u 仪器校正u 空白溶剂校正u 吸收峰波长确定u A(0.30.7)77JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二节 定量分析方法的特点含量测定方法1.对照品比较法原料药78JILIN UNIVERSITYCOL
46、LEGE OF LIFE SCIENCE*特点： 灵敏度高，可达灵敏度高，可达1010-10-101010-12-12g/mlg/ml 要求低浓度下测定要求低浓度下测定 须做空白测定须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定荧光弱的药物可衍生化后测定( (二二) )荧光分析法荧光分析法79JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*定量分析的方法(外标法)0.20.61.01.41.82.22.63.0Time, min0%50%100%Rel . Int. (%)80JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*定量分析的方
47、法(内标法)0.20.61.01.41.82.22.63.0Time, min0%50%100%Rel . Int. (%)81JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第三节 药品分析方法的验证目的： 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标： 评价分析方法的尺度评价分析方法的尺度 效能指标包括: 精密度精密度, , 准确度准确度, , 检测限检测限, ,定量限定量限, ,选择性选择性, , 线性线性与范围与范围, , 耐用性耐用性82JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIE
48、NCE*一、准确度（一、准确度（accuracy） 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。( (一一) )含量测定方法含量测定方法回收率(Recovery)回收试验加样回收试验33，至少9个测定结果83JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、精密度二、精密度(Precision) 系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。表示：偏差(d)、标准偏差(s),、 相对标准偏差(RSD)重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性: 不同实验室，不
49、同人测定的精密度84JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、专属性三、专属性(Specificity) 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。目视法信噪比法 S/N=3四、检测限四、检测限(Limit of Detection, LOD)药物能被检出的最低浓度(g/ml)五、定量限五、定量限(Limit of Quantitation, LOQ)药物能被定量测定的最低浓度(g/ml)信噪比法 S/N=1085JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*影响因素：被测溶
50、液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等六、线性与范围六、线性与范围(Linearity And Range)待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比关系的程度。 Y=Y=a+bxa+bx （r=0.9999)r=0.9999)七、耐用性七、耐用性(Robustness)测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度86JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*已有重现性验证，不需验证中间精密度如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充视具体情况予以验证87JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*
51、第四节 生物制品分析方法的基本要求一、常用样品的种类、采集和贮藏一、常用样品的种类、采集和贮藏( (一一) )血样血样 血浆 (plasma) 血清 (serum) 全血( (二二) )唾液唾液( (三三) )尿液尿液 用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度，药物代谢物及其代谢途径、类型、速率等的研究；临床上用于判断患者是否违反医嘱用药。88JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*蛋白质的去除加入与水混融的有机溶剂加入与水混融的有机溶剂( (乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃) )加入中性盐加入中性盐( (饱和硫酸铵、硫酸钠、枸橼酸盐饱
52、和硫酸铵、硫酸钠、枸橼酸盐) )加入强酸加入强酸( (三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸) )加入金属沉淀剂加入金属沉淀剂( (CuSOCuSO4 4-Na-Na2 2WOWO4 4、ZnSOZnSO4 4-NaOH-NaOH) )缀合物的水解酸水解酸水解( (盐酸盐酸) )酶水解酶水解( (葡糖酸苷酶、硫酸酯酶、枯草菌溶素葡糖酸苷酶、硫酸酯酶、枯草菌溶素) )有机破坏 ( (硝酸硝酸- -高氯酸消化高氯酸消化) )分离、纯化与浓集液液- -液萃取法液萃取法 (Liquid-Liquid Extraction,LLE)液液- -固萃取法固萃取法 (Liquid-Solid Ext
53、raction,LSE)第四节 生物制品分析方法的基本要求89JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、定量分析方法的验证三、定量分析方法的验证药典附录 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则国家食品药品监督管理局新药评审中心 化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则 化学药物临床药代动力学研究技术指导原则 化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则90JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*(一一)特异性特异性( (二二) )线性和范围线性和范围( (三三) )精密度与准确度精密度与准确度(
54、 (四四) )定量下限定量下限( (五五) )稳定性稳定性( (六六) )提取回收率提取回收率( (七七) )质控样品质控样品( (八八) )质量控制质量控制( (九九) )测定结果测定结果91JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第五章巴比妥类药物的分析第五章巴比妥类药物的分析二二二二. . . .鉴别试验鉴别试验鉴别试验鉴别试验 三三三三. . . .特殊杂质检查特殊杂质检查特殊杂质检查特殊杂质检查四四四四. . . .含量测定含量测定含量测定含量测定一一一一. . . .基本结构与主要性质基本结构与主要性质基本结构与主要性质基本结构与主要性质92
55、JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、基本结构与主要性质环状丙二酰脲类化合物环状丙二酰脲类化合物( (一一) )基本结构基本结构93JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*( (二二) )主要性质主要性质u性状性状白色结晶或结晶性粉末白色结晶或结晶性粉末u溶解度溶解度微溶或极微溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂微溶或极微溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂 钠盐易溶于水，难溶于有机溶剂钠盐易溶于水，难溶于有机溶剂1.1.弱酸性弱酸性 ( (pKa:7.38.4) )94JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF
56、LIFE SCIENCE*2.2.水解反应水解反应95JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、基本结构与主要性质3.3.与金属离子反应与金属离子反应a.与银盐的反应1,5,51,5,5取代的巴取代的巴比妥类药物比妥类药物AgNO3可溶性的一银盐可溶性的一银盐Na2CO3b.与铜盐的反应巴比妥类巴比妥类铜吡啶铜吡啶显色显色巴比妥类紫色或紫色沉淀硫巴比妥类绿色5,55,5取代的巴取代的巴比妥类药物比妥类药物AgNO3Na2CO3可溶性的一银盐可溶性的一银盐AgNO3二银盐白色沉淀二银盐白色沉淀96JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LI
57、FE SCIENCE*5.5.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征(nm)2902702502300.51.01.5A巴比妥类药物的紫外吸收光谱ABC240nm255nmA.H2SO4液(0.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH13NaOH液(1mol/L,二级电离)1,5,5-1,5,5-三取代巴比妥类三取代巴比妥类药物不存在二级电离，药物不存在二级电离，最大吸收波长不变。最大吸收波长不变。97JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、基本结构与主要性质3202802402000.80.50.2(nm)A238287304硫代
58、巴比妥的紫外吸收光谱A.HCl液(0.1mol/L)B.NaOH液(0.1mol/L)6.6.薄层色谱行为特征薄层色谱行为特征98JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、鉴别试验1.1.司可巴比妥钠的鉴别司可巴比妥钠的鉴别I I2 2褪色BrBr2 2KMnOKMnO4 499JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、鉴别试验2.2.苯巴比妥的鉴别苯巴比妥的鉴别a.硝化反应 b.硫酸-亚硝酸钠反应 苯巴比妥与苯巴比妥与NaNONaNO2 2-H-H2 2SOSO4 4反应生成橙黄色反应生成橙黄色橙红色橙红色c
59、.甲醛-硫酸反应 苯巴比妥与甲醛苯巴比妥与甲醛-H-H2 2SOSO4 4反应生成玫瑰红色环反应生成玫瑰红色环 区分苯巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物。100JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、鉴别试验3.3.硫代巴比妥类的鉴别硫代巴比妥类的鉴别硫色素反应硫色素反应硫代巴比妥类与巴比妥类的区别101JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、特殊杂质试验1.酸度酸度中间体中间体乙酰化不完全时，乙酰化不完全时，与尿素缩合产生的杂质与尿素缩合产生的杂质苯基丙二酰脲酸性较强检查方法取本品0.20g，加水10ml
60、，煮沸搅拌1min，放冷，滤过后，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色102JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*2.乙醇溶液澄清度乙醇溶液澄清度三、特殊杂质试验检查中间体、等乙醇中不溶物。取本品1.0g，加乙醇5ml，加热回流3min，溶液应澄清 3.中性或碱性物质中性或碱性物质( (提取重量法提取重量法) ) 副产物：2-苯基丁酰(胺)脲或分解产物 不溶于NaOH T.S.而溶于醚分液漏斗NaOH T.S.乙醚H2O过滤干燥滤纸蒸发皿1051hr1.05 拖尾峰Fs0.95 前延峰143JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF
61、LIFE SCIENCE*基本概念基本概念t0tR1tR2420.607h0.5hhW1/2h144JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*W1 W2 tR2 tR1 ()21R1R2WWtt2R+-=分离度的概念分离度的概念145JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*检测器检测器紫外-可见光检测器示差折光检测器荧光检测器放射性检测器电化学检测器质谱检测器146JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*真空系统真空系统样品入口样品入口检测器检测器数据系统数据系统质量分析器质量
62、分析器离子源离子源质谱仪的组成大气大气离子源离子源 离子生成离子生成质量分析器质量分析器 离子分离离子分离检测器检测器 离子收集离子收集 147JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*MS/MS Product Ion Scanm1+ fixedm3+ scanned148JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*MS/MS Precursor Ion Scanm3+ fixedm1+ scanned149JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*MS/MS Neutral Lo
63、ss Scanm1+ scannedm3+ scanned m150JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*MS/MS MRM (Multiple Reaction Monitoring)Precursor ion fixedProduct ion fixedFragmentation(CAD)151JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*0%50%100%TIC m/z 2005000%50%100%12.51m/z 2270%50%100%10.66m/z 2090%50%100%135791113151719
64、7.16m/z 2250%50%100%7.13m/z 385质谱检测的优势质谱检测的优势152JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*The transfer of ions present in a liquid phase into the gas phaseGentlest ionization techniqueApplicable to polar and ionic substancesElectrospray ionization (ESI)153JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*Electr
65、ospray ionization Ion EvaporationM+nHn+Quasi-molecular ion (or multicharged ion)Protonated molecule154JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*ESI Multiply Charged IonsMolecules which can be multiply protonated or deprotonated can exist in more than one charge statePeaks at M nHn (n = number of charges)155JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI)Ionization occurs in the gas phasecorona dischargepolar to non-polar thermally stable compounds156
