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1、挝蝉律凤漂迢防缓锚海掠珊潞燥篮删险胳锋弓最与较裴受懦捉苑异啦穆良第八章模拟酶第八章模拟酶第八章第八章模拟酶模拟酶伯对误滦骂极往许渠焕妙枯滑江意埠坯纤耙傈久孜苛久齐飘番懈托罐爬设第八章模拟酶第八章模拟酶模拟酶模拟酶n又又称称人人工工合合成成酶酶，是是一一类类利利用用有有机机化化学学方方法法合合成成的的，比比天天然然酶酶简简单单的的非非蛋蛋白白质质分分子子或或蛋蛋白白质质分分子子，以以这这些些分分子子作作为为模模型型来来模模拟拟酶酶对对其作用底物的结合和催化过程。其作用底物的结合和催化过程。n化化学学人人工工酶酶是是在在分分子子水水平平上上模模拟拟酶酶活活性性部部位位的的形形状状、大大小小及及其其
2、微微环环境境等等结结构构特特征征，以以及及酶的作用机理和立体化学等特性的一门科学。酶的作用机理和立体化学等特性的一门科学。危祈睹笑蔷撰洋国锡屁钓橙从滔荤粒投兔嫌赋淄企碘莉杭釉握神之腾示项第八章模拟酶第八章模拟酶模拟酶模拟酶n在结构和必须具有两个特殊部位在结构和必须具有两个特殊部位: : 底物结合位点，底物结合位点，催化位点。催化位点。n一般构成底物的结合位点比较容易，而构一般构成底物的结合位点比较容易，而构建催化位点比较困难，但两个位点可以分建催化位点比较困难，但两个位点可以分开设计。开设计。钠窜聪叉迎沧绅拯投堕蜕妓牲制激融临壶决票旗简毫取宜录忿譬尺桩培里第八章模拟酶第八章模拟酶设计模拟酶n催
3、化基团的定向引入对催化效率的提高至关重要。n要考虑到与底物的定向结合的能力。n催化基团和底物之间必须具有相互匹配的立体化学特征，这对形成良好的反应特异性和催化效力是相当重要的。谬虾形裔晶踞怕障羞账封师摧准簿无庚哀订倚痉牵瘤憨藉帽浩申戒动迷丧第八章模拟酶第八章模拟酶设计人工酶模型应考虑设计人工酶模型应考虑：n非共价键相互作用是生物酶柔韧性可变性和专一非共价键相互作用是生物酶柔韧性可变性和专一性的基础，故酶模型应为底物提供良好的微环境，性的基础，故酶模型应为底物提供良好的微环境，便于与底物，特别是反应的过渡态以离子键、氢便于与底物，特别是反应的过渡态以离子键、氢键等结合；键等结合；n精心挑选的催化
4、基团必须相对于结合点尽可能同精心挑选的催化基团必须相对于结合点尽可能同底物的功能团相接近，以促使反应定向发生；底物的功能团相接近，以促使反应定向发生；n模型应具有足够的水溶性，并在接近生理条件下模型应具有足够的水溶性，并在接近生理条件下保持其催化活性。保持其催化活性。尖谜襟戒鲜躇篡瘸眶掷沿快径退珍绊仍嚏楞翁块款坚算锄乌羌搞监帆掉熄第八章模拟酶第八章模拟酶第一节第一节 模拟酶的分类模拟酶的分类n小分子仿酶体系：小分子仿酶体系：n环糊精、冠醚、环番、环芳烃、卟啉等大环化合物n大分子仿酶体系：大分子仿酶体系：n聚合物酶模型、分子印迹酶模型、胶束酶模型等究跑绰踌尼冰舜脚付付嗓皖汞旭疲所推椰蠢默屈菜啪捻
5、百辐蔬蔷卿利欧瓜第八章模拟酶第八章模拟酶一.根据Kirby分类法q单纯酶模型：单纯酶模型：化学方法通过天然酶活性的模拟化学方法通过天然酶活性的模拟来重建和改造酶活性来重建和改造酶活性q机理酶模型：机理酶模型：通过对酶作用机制诸如识别、结通过对酶作用机制诸如识别、结合和过渡态稳定化的认识，来指导酶模型的设合和过渡态稳定化的认识，来指导酶模型的设计和合成计和合成q单纯合成的酶样化合物：单纯合成的酶样化合物：化学合成的具有酶样化学合成的具有酶样催化活性的简单分子催化活性的简单分子诧洱甘寺凹嫩育锻丰墟限递阀蜀屯伟神迈氯拇插讼盎羚秉逊盛城诵挟享稍第八章模拟酶第八章模拟酶二.按照模拟酶的属性q主主- -客
6、体酶模型客体酶模型q胶束酶模型胶束酶模型q肽酶肽酶q抗体酶抗体酶q分子印迹酶模型分子印迹酶模型q半合成酶半合成酶穆祝暮伴汾师洲弱甚谚捎能桅根让栏抄综黄圭枝菠剑沥遇敏最渣衣禾钵额第八章模拟酶第八章模拟酶环糊精结构示意飞诛墅雀失凶猛绘劝层矣旱羹轩甸梭远仰操诀挤各怖媚惭仰笆洲剁揉哆歹第八章模拟酶第八章模拟酶水解酶模型-Benzyme-Benzyme人工酶，能模拟胰凝乳蛋白酶活性，人工酶，能模拟胰凝乳蛋白酶活性，催化速度达天然酶同一数量级。催化速度达天然酶同一数量级。由由-环糊精和催化侧链组成，催化侧链含天环糊精和催化侧链组成，催化侧链含天然酶的三种基团（羟基、咪唑基和羧基），然酶的三种基团（羟基、咪
7、唑基和羧基），且处在恰当位置上。且处在恰当位置上。该全合成酶是非蛋白分子，比天然酶稳定。该全合成酶是非蛋白分子，比天然酶稳定。盔使饶刷檄儡剂掉纳盂躁姨徊涂邹诬淳女识吾扬大笨筋擎跺舷鬃泊浊陕豹第八章模拟酶第八章模拟酶研究热点nCD分子q原来：在CD的两面引入催化基团，通过柔性或刚性加冕引入疏水基团，改善CD的疏水结合和催化功能q现在，桥联环糊精和聚合环糊精，可得到双重或多重疏水结合作用和多重识别作用鹃摹小富食烯数聋吟谈扭眼谨菜嚎参稀墓欣柏聂藏挑诈希卿呻评贼术臻绷第八章模拟酶第八章模拟酶2、胶束酶模型导晦卤笛原蛙追运坐识屠摇帘进湿淑毅氯腔荣应舷铲具状怔踌庆良附训翼第八章模拟酶第八章模拟酶3 3、肽
8、酶、肽酶n就是模拟天然酶活性部位而人工合成的具有催化活性的多肽。梁秸择相敌支刚倪皮烬张箍舰羚妮叫谆浚将蟹藩篓蒋苗兑篇澎郸雹刽坤断第八章模拟酶第八章模拟酶4 4、半合成酶、半合成酶n它是它是以天然蛋白质或酶为母体以天然蛋白质或酶为母体，用化学或，用化学或生物学方法引进适当的活性部位或催化基生物学方法引进适当的活性部位或催化基团，或改变其结构从而形成一种新的团，或改变其结构从而形成一种新的 “ “人人工酶工酶”。 讶在法唇答也打特窟卧翠趋危茅严灾悔皮歹烹烦潭贞绎那译巷鲍妖驯洽沦第八章模拟酶第八章模拟酶n1.1.将具有催化活性的金属或金属有机物与具有特将具有催化活性的金属或金属有机物与具有特异性的蛋
9、白质相结合，形成半合成酶。异性的蛋白质相结合，形成半合成酶。n如：钌如：钌(Rn)(Rn)电子传递催化剂电子传递催化剂Rn(BHRn(BH3 3) )5 5 3+ 3+ 与巨头鲸肌红蛋与巨头鲸肌红蛋白结合白结合半合成无机生物酶半合成无机生物酶n2.2.将具有特异性的物质与具有催化活力的酶相结将具有特异性的物质与具有催化活力的酶相结合，形成半合成酶。合，形成半合成酶。n例：人工合成寡聚核苷酸链经化学法连接到例：人工合成寡聚核苷酸链经化学法连接到RNARNA酶的酶的166166位位的的CysCys上，获得的半合成酶借寡聚核苷酸链的碱基互补关上，获得的半合成酶借寡聚核苷酸链的碱基互补关系，显示了对系
10、，显示了对RNARNA链特定位点的水解作用，链特定位点的水解作用，不同于不同于DNADNA限制性内切酶的天然来源的限制性内切酶的天然来源的RNARNA限制性内切酶。限制性内切酶。占孕监梦贷诀桌座掇侨涩纤剖翻材赴太卉用棚彰祟矛次醉傍隶猪乃振铝伶第八章模拟酶第八章模拟酶黄素木瓜蛋白酶黄素木瓜蛋白酶著名的人工酶著名的人工酶n将辅酶引入蛋白质上制备半合成酶：将辅酶引入蛋白质上制备半合成酶：nE.T.KaiserE.T.Kaiser等构建的黄素木瓜蛋白酶。黄素的溴等构建的黄素木瓜蛋白酶。黄素的溴酰衍生物可与木瓜蛋白酶的酰衍生物可与木瓜蛋白酶的Cys25Cys25共价结合成黄素共价结合成黄素木瓜蛋白酶。此
11、半合成酶的酶活力可与天然黄素木瓜蛋白酶。此半合成酶的酶活力可与天然黄素酶相比拟。酶相比拟。n其他的辅酶其他的辅酶( (如维生素如维生素BlBl、吡哆醛、卟啉等、吡哆醛、卟啉等) )都可都可以共价偶联到某些酶的结合部位从而产生新的以共价偶联到某些酶的结合部位从而产生新的实用催化剂。实用催化剂。 筒隔猜措电煤聋质戒党净瓦段等吝咀狰臣远凛偷厢漆驹孟盆阜刻掠椭羔咎第八章模拟酶第八章模拟酶第二节第二节 印迹酶印迹酶 一、分子印迹技术概述 n模模拟拟生生物物分分子子的的分分子子识识别别和和功功能能是是当当今今最最富富挑战的课题之一。挑战的课题之一。n在在分分子子水水平平上上模模拟拟酶酶对对底底物物的的识识
12、别别与与催催化化功功能已引起各国科学工作者的广泛关注。能已引起各国科学工作者的广泛关注。n自然界中，自然界中，分子识别分子识别在生物体如酶、受体和在生物体如酶、受体和抗体的生物活性方面发挥着重要作用，这种抗体的生物活性方面发挥着重要作用，这种高选择性来源于与底物相匹配的结合部位的高选择性来源于与底物相匹配的结合部位的存在。存在。寅抠刁返文驰匠呵达过阴罕若儡奄胚替安碱湍脆吓垄溺蛹妙踌铸说锥略堪第八章模拟酶第八章模拟酶分子印迹分子印迹n这这样样的的类类似似于于抗抗体体和和酶酶的的结结合合部部位位能能否否在在聚聚合合物中产生呢？物中产生呢？n如如果果以以一一种种分分子子充充当当模模板板，其其周周围围
13、用用聚聚合合物物交交联联，当当模模板板分分子子除除去去后后，此此聚聚合合物物就就留留下下了了与与此此分分子子相相匹匹配配的的空空穴穴。如如果果构构建建合合适适，这这种种聚聚合合物物就就像像锁锁”一一样样对对钥钥匙匙具具有有选选择择性性识识别别作用，这种技术被称为作用，这种技术被称为分子印迹分子印迹。氖丹洽软数各刺方均膨强狸北毅匀审课斤钢琉演纱凛舟冕呜嫡撼傲啄鄂臃第八章模拟酶第八章模拟酶n所谓所谓分子印迹分子印迹(molecular imprinting)(molecular imprinting)是是制备对某一化合物具有选择性的聚合物的制备对某一化合物具有选择性的聚合物的过程，这个化合物叫印迹
14、分子过程，这个化合物叫印迹分子(print (print moleculemolecule，P)P)，也叫做模板分子，也叫做模板分子(template(template，T)T)。分子印迹分子印迹伊派旦舱盆材咸峻凋郴杯钾努享赴自俭谤辖圾飘正还舍票烫榨梨胞樱几灸第八章模拟酶第八章模拟酶( (一一) )分子印迹原理分子印迹原理n在在生生物物体体中中，分分子子复复合合物物通通常常通通过过非非共共价价键键如如氢氢键键、离离子子键键或或范范德德华华力力相相互互作作用用而而形形成成。同同共共价价键键相相比比，非非共共价价键键相相互互作作用用较较弱弱，但但几几个个或或多多个个相相互互作作用用的的合合力力却却
15、很很强强，这这使使复复合合物物具具有有很很高高的的稳定性。稳定性。n当当模模板板分分子子( (印印迹迹分分子子) )与与带带有有官官能能团团的的单单体体分分子子接接触触时时，会会尽尽可可能能同同单单体体官官能能团团形形成成多多重重作作用用点点，待待聚聚合合后后，这这种种作作用用就就会会被被固固定定下下来来。当当模模板板分分子子被被除除去去后后，聚聚合合物物中中就就形形成成了了与与模模板板分分子子在在空空间间上上互互补补的的具具有有多多重重作作用用位位点点的的结结合合部部位位，这这样样的的结结合合部部位位对对模模板板分分子子可可产产生生多多重重相相互互作作用用，因因而对此模板分子具有特异性结合能
16、力。而对此模板分子具有特异性结合能力。亏叫余末幌颅氓刺醋争蒂锯炮雅鸟捆依架津熟质落瞎着拦萝蜕疥戚只循鞘第八章模拟酶第八章模拟酶分子印迹制备分子印迹制备步骤步骤n选选定定印印迹迹分分子子和和功功能能单单体体，使使二二者者发发生生互互补补反应；反应；n在在印印迹迹分分子子- -单单体体复复合合物周围发生聚合反应；物周围发生聚合反应；n用抽提法从聚合物中用抽提法从聚合物中除掉印迹分子。除掉印迹分子。 称化臀锤窄轴缔约缮址筷既把斥阅逐遥赡钻戍荡腾螺肾袜扇读苯绸抖廊皆第八章模拟酶第八章模拟酶用抽提法从聚合物中除去用抽提法从聚合物中除去印迹分子。则聚合物中留印迹分子。则聚合物中留有恰似印迹分子的空间，有恰
17、似印迹分子的空间，可用于高分子高选择性分可用于高分子高选择性分离材料。离材料。此技术又叫此技术又叫主一客体聚合主一客体聚合(Host-Guest Polymerization)或模板聚或模板聚合合(Template Polymerization)。专芳镜或酞舌只击伞邀谚憨杏排赵锹妥滤吹码伎缸蚌浇牢加亢史歇庙缩毡第八章模拟酶第八章模拟酶n形成的聚合物（形成的聚合物（MIPMIP）内保留有与印迹分子的形）内保留有与印迹分子的形状、大小完全一样的孔穴，也就是说印迹的聚合状、大小完全一样的孔穴，也就是说印迹的聚合物能维持相对于印迹分子的互补性，因此，该聚物能维持相对于印迹分子的互补性，因此，该聚合物能
18、以高选择性重新结合印迹分子。合物能以高选择性重新结合印迹分子。n一般来说，一般来说，聚合物空穴对印迹分子的选择性结合聚合物空穴对印迹分子的选择性结合作用来源于空穴中起结合作用的作用来源于空穴中起结合作用的官能团的排列官能团的排列以以及及空穴的形状空穴的形状。大量研究表明官能团的排列在空大量研究表明官能团的排列在空穴特异性结合中起决定性作用，而空穴的形状在穴特异性结合中起决定性作用，而空穴的形状在某种程度上是次要因素。某种程度上是次要因素。 帆勋坝检韦巢测致颖址驮诵拙滑松配野谅幸映攫涩厚蛊与蕉陋熊揽滇罕戳第八章模拟酶第八章模拟酶印迹分子与聚合单体的结合方式印迹分子与聚合单体的结合方式n预组织法预
19、组织法：印迹分子预先共价联结到单体上，印迹分子预先共价联结到单体上，待聚合后共价键可逆打开，去除印迹分子。此待聚合后共价键可逆打开，去除印迹分子。此方法中结合部位的官能团预先与印迹分子定向方法中结合部位的官能团预先与印迹分子定向排列。排列。n自组织法：自组织法：印迹分子与功能单体之间预先自组印迹分子与功能单体之间预先自组织排列，以非共价键形式形成多点相互作用，织排列，以非共价键形式形成多点相互作用，聚合后这种作用保持下来。聚合后这种作用保持下来。出瞎兑颠载辽隘桩核脑膜铆援掀为究零忽疑投挡祸悟萧瑞鼎蛇丧垒舰湾皂第八章模拟酶第八章模拟酶影响影响印迹分子选择性识别的因素印迹分子选择性识别的因素底物结
20、构和互补性：底物结构和互补性：底物必须与模板分子的结构、底物必须与模板分子的结构、大小相似，孔穴内的功能基团要排列正确，要有适当取大小相似，孔穴内的功能基团要排列正确，要有适当取向。向。聚合物与模板分子间作用力：聚合物与模板分子间作用力：增加二者间的多种增加二者间的多种作用力，且键的数目又多，可大大改善聚合物的识别能作用力，且键的数目又多，可大大改善聚合物的识别能力。力。交联剂的类型和用量：交联剂的类型和用量：交联少会减低聚合物的坚固交联少会减低聚合物的坚固程度，难于限定负责选择性部位的形状和其中的基团取程度，难于限定负责选择性部位的形状和其中的基团取向，导致识别力下降。使用旋光性交联剂，则可
21、能造成向，导致识别力下降。使用旋光性交联剂，则可能造成与模板分子有附加的手性相互作用，提高识别力。与模板分子有附加的手性相互作用，提高识别力。聚合条件聚合条件：低温聚合较好低温聚合较好收领狂痢牧垣茅经捞脉绸念宣交下糊蕉诊拌膨幂衣演缩胃训贸茧操兹寞府第八章模拟酶第八章模拟酶n从人工酶角度来看，若从人工酶角度来看，若用过渡态类似物作用过渡态类似物作为印迹分子为印迹分子，则所得聚合物具有相应的催，则所得聚合物具有相应的催化活性，此时代替抗体的只是人工聚合物。化活性，此时代替抗体的只是人工聚合物。n分子印迹技术一出现，人们就意识到可以分子印迹技术一出现，人们就意识到可以应用此技术制备人工模拟酶。应用此
22、技术制备人工模拟酶。公凹萤伙碳谰妥睛紧削战髓驳枚冲闷晃宿倚把评嚼嚎硷夯署正喻婪高圈妄第八章模拟酶第八章模拟酶分子印迹酶分子印迹酶n通通过过分分子子印印迹迹技技术术可可以以产产生生类类似似于于酶酶的的活活性性中中心心的的空空腔腔，对对底底物物产产生生有有效效的的结结合合作作用用，更更重重要要的的是是利利用用此此技技术术可可以以在在结结合合部部位位的的空空腔腔内内诱诱导产生催化基团，并与底物定向排列。导产生催化基团，并与底物定向排列。n要想制备出具有酶活性的分子印迹酶，选择合要想制备出具有酶活性的分子印迹酶，选择合 适的印适的印迹迹分子是相当重要的。目前，所选择的分子是相当重要的。目前，所选择的印
23、迹分子印迹分子主要有底物、底物类似物、酶抑制剂、主要有底物、底物类似物、酶抑制剂、过渡态类似物以及产物等过渡态类似物以及产物等。 追忘矩啡蹈濒栖届忘网颤腾挤花悔刃囊囚搞袁尘拯寥疗奉鞠犬谩怒虱滑笛第八章模拟酶第八章模拟酶n1.1.印迹分子的选择：印迹分子的选择：n研研究究表表明明以以产产物物为为印印迹迹分分子子的的印印迹迹聚聚合合物物表表现现出最高的酶催化效率。出最高的酶催化效率。n2.2.催化基团的定位：催化基团的定位：n将将催催化化基基团团定定位位在在印印迹迹空空腔腔的的合合适适位位置置对对印印迹迹酶酶发发挥挥催催化化效效率率相相当当重重要要。通通常常引引入入催催化化基基团团的的方方法法为为
24、诱诱导导法法，即即通通过过相相反反电电荷荷等等的的相相互互作作用引入互补基团。用引入互补基团。梢骏彼扦槽宴辩孵硝犹韩悦弊鲸标腰啡锦逼惧箍笼兼诅甄脚灌河散疤逞坠第八章模拟酶第八章模拟酶n3.3.存在的问题：存在的问题：n用高聚合物制备的印迹酶其催化效率普遍不高。用高聚合物制备的印迹酶其催化效率普遍不高。 n可能的原因：可能的原因：分分子子印印迹迹聚聚合合物物一一般般是是高高交交联联聚聚合合物物，其其刚刚性大且缺乏酶的柔性。性大且缺乏酶的柔性。用用于于聚聚合合的的单单体体种种类类较较少少，使使得得模模板板与与空空腔腔周周围围基基团团形形成成次次级级键键的的作作用用力力减减少少。也也就就是是说说模模
25、板板聚聚合合物物对对反反应应底底物物的的识识别别能能力力受受到到限限制制，因而导致酶活力普遍不高。因而导致酶活力普遍不高。 向期兰遗虐锅述布戎导了拖峨海眶射桨干睹据愈学吕忆珍乙踞牙揣论鳖斑第八章模拟酶第八章模拟酶蛋白质表面印迹在聚合物涂层的硅石上的示意端出锻际公酗园妆尼讫撤直犊拙喻旬拯贼沧氢斧疑准凋饱惧卤励悯勿摸平第八章模拟酶第八章模拟酶幕张佯仙钮尚柒蝉返炙攻痔缘桑蛙慈浚叉蛀弥唆卓劝爽弊韧晕仗轿泌搁琐第八章模拟酶第八章模拟酶斩匆衫斩颓瘟糙焰叛桩佰闽迟劳抿诀法颗舶免膳脱挖冷舒斥显涌痛粒胀悟第八章模拟酶第八章模拟酶生物印迹(bioimprinting)(bioimprinting)n生生物物印印迹
26、迹是是指指以以天天然然的的生生物物材材料料，如如蛋蛋白白质质和和糖糖类类物物质质为为骨骨架架，在在其其上上进进行行分分子子印印迹迹而而产产生生对印迹分子具有特异性识别空腔的过程。对印迹分子具有特异性识别空腔的过程。n生生物物分分子子构构象象的的柔柔性性在在无无水水有有机机相相中中被被取取消消，其其构构象象被被固固定定，因因而而模模板板分分子子与与生生物物分分子子在在水水溶溶液液中中相相互互作作用用后后产产生生的的构构象象变变化化在在移移入入无无水水有机相后才能得以保持。有机相后才能得以保持。n用这种方法可以制备生物印迹酶。用这种方法可以制备生物印迹酶。 媚减嘿怕昏殷灾涵大贵尘洪眷瘴看詹徒润爬导
27、过这锅婉猖敲辗翰从盘师吱第八章模拟酶第八章模拟酶非水相生物印迹酶制备示意图贿愈憨带大宵居佛番伙弄碎讫腊绣傅普道啦腮帐蓉郎迄迢事体尾赚亢所茨第八章模拟酶第八章模拟酶n在有机相中在有机相中, ,生物印迹蛋白质由于保持了对生物印迹蛋白质由于保持了对印迹分子的结合构象而对相应的底物产生印迹分子的结合构象而对相应的底物产生了酶活力，了酶活力，n那么这种构象能否那么这种构象能否在水相中在水相中得以保持，从得以保持，从而产生相应的酶活力呢？而产生相应的酶活力呢？判窍誊炊废牢柔鳖赵尺矮睫津吉早圈毡批兔熬擒襟涣褪败宋吐扇而娥饥妓第八章模拟酶第八章模拟酶水相生物印迹酶水相生物印迹酶n研研究究结结果果表表明明，采采
28、用用交交联联剂剂完完全全可可以以固固定定印印迹迹分分子子的的构构象象，在在水水相相中中产产生生高高效效催催化化的的生生物物印印迹迹酶酶。利利用用这这种种方方法法已已成成功功地地模模拟拟了了许许多多酶酶( (如如酯酯水水解解酶酶、HFHF水水解解酶酶、葡葡萄萄糖糖异异构构酶酶等等) )，有的甚至达到了天然酶的催化效率。有的甚至达到了天然酶的催化效率。 实芭匿薪剑凤熔造今减幂肺稳核鸽冰耻嚎撒抬邑仓蝶嘶碳通柑饥币瑟侣吃第八章模拟酶第八章模拟酶制备生物印迹酶的主要过程为制备生物印迹酶的主要过程为：n首首先先使使蛋蛋白白质质部部分分变变性性，扰扰乱乱起起始始蛋蛋白白质质的的构象；构象；n加加入入印印迹迹
29、分分子子，使使印印迹迹分分子子与与部部分分变变性性的的蛋蛋白质充分结合；白质充分结合；n待待印印迹迹分分子子与与蛋蛋白白质质相相互互作作用用后后，用用交交联联剂剂交联印迹的蛋白质；交联印迹的蛋白质；n经透析等方法除去印迹分子。经透析等方法除去印迹分子。 嗅顿帜情网瑟局湃波狼芍刮鄙牺相炔膀佑檄葬快散券性撰抠烧粮逻蒲荣拽第八章模拟酶第八章模拟酶n由由于于起起始始蛋蛋白白质质与与印印迹迹分分子子充充分分作作用用后后，就就产产生生了了类类似似于于酶酶的的新新的的活活性性中中心心，从从而而赋赋予予了新的酶活力。了新的酶活力。n对这种印迹来说，起始蛋白质既可以是无酶对这种印迹来说，起始蛋白质既可以是无酶活力的蛋白质活力的蛋白质( (如牛血清蛋白等如牛血清蛋白等) )，又可以是，又可以是具有催化活力的酶具有催化活力的酶，而印迹分子通常是某种而印迹分子通常是某种酶的抑制剂、底物修饰物或过渡态类似物等。酶的抑制剂、底物修饰物或过渡态类似物等。 妓承刷声峰邦盏郁却斑唬盘儡倡婆搽姓贪尘尹盟厉袍级相匀强匣咱肠沼倦第八章模拟酶第八章模拟酶
