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1、生化检验实验室根本知识生化检验实验室根本知识邓益斌内容简介内容简介一、生化检验标本一、生化检验标本二、生化试剂盒二、生化试剂盒三、检验工程三、检验工程四、生化仪器四、生化仪器五、室内质量控制五、室内质量控制六、实验室信息系统六、实验室信息系统LIS七、常用生化分析技术七、常用生化分析技术一、生化检验标本一、生化检验标本n生化检验最常用的标本为血液标本，其他有尿液、脑脊液和胸腹水等n不恰当的标本收集与保存，不注意影响标本成分变化的各种因素，往往是导致实验结果不可靠的主要原因一标本采集1.血标本采集方法采血部位：静脉、动脉、毛细血管2.血标本类型与选择血标本可分为全血、血浆与血清血清与血浆有何区别
2、血清与血浆有何区别？血清与血浆有何区别？1.血浆是抗凝血释出，而血清是非抗凝血释出2.血浆中含有纤维蛋白原，而血清中不含有纤维蛋白原3. 血清与血浆中：ALT、AST、GLU、CK、TBIL、BUN、Ca2+等无统计学意义;Alb、TG、ALP、UA、钠磷等有统计学意义无临床意义二影响血标本成分变化因素1.生理因素：年龄、性别、体型、情绪、运动2.饮食因素：3.药物因素：4.溶血因素：5.储存因素：Cho/UA/ALP性激素 TG皮质醇、催乳素、生长素、GLU下降：Alb、铁、钾、总胆增高：ALT/AST/ACP/ALP/TP/BUN/CR/UA/GLU/AMY受饮食影响的工程n工程：GLU、
3、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳酸、BUN、UA、转氨酶等n原那么：空腹6-12h后采血受药物影响的工程n药物影响检验结果途径：n1.药物本身对检验方法的影响n2.药物代谢产物对检验方法的影响n3.药物对代谢器官功能的影响n原那么：检验受某种药物影响的工程之前3天，停止该药物的使用受溶血因素影响的工程n当待测物在红细胞内的浓度高于血清时，溶血可使该待测物结果偏高，如LDH，AST，ALT，ACP，K+等n红细胞溶解所释放出来的大量血红素，可干扰某些工程的检测，如CHO的酶法测定，BIL的重氮反响，光谱分析等n防止溶血的几个环节：一是采血过程;一是血清别离过程n防止溶血的方法：？1.采血器要洁净;
4、2.扎脉时间要短;3.抽血后，排血动作要轻、慢;4.血清别离动作轻受储存条件影响的工程n原那么：采血后，2h内尽快将血清与细胞别离，并检测完毕。为什么n受放置时间影响最大的工程有：n增高：TP、ALB、CHO、K+、Na+、AST、ALP、GGTn降低：GLU、TBIL、CL-、ALT因为细胞仍然活着，仍进行代谢活动，消耗能量，并产生代谢产物，影响血清成分变化3h:GLU、CO28h：GLU、CO2、TP、K+、AST24h:GLU、CO2、TP、K+、AST、ALB、TBIL、CHO、Na+、CL-、ALT、ALP、GGT二、生化试剂盒二、生化试剂盒n商品化试剂盒的广泛应用，对检验医学的开展
5、产生了深远的影响，它不仅使检验操作更简便，而且使试剂生产和检验操作更易标准化和标准化，尤其是有利于提高检验质量二、生化试剂盒二、生化试剂盒化学法化学法酶酶 法法方法学方法学免疫法免疫法物理性状物理性状液体型试剂自配液体型试剂自配冻干型试剂冻干型试剂片剂或冻干粉剂片剂或冻干粉剂液体型试剂商品液体型试剂商品组合方式组合方式多剂型试剂多剂型试剂单剂型试剂单剂型试剂双剂多剂试剂双剂多剂试剂操作方式操作方式手工多步骤操作手工多步骤操作离心式自动分析仪离心式自动分析仪分列式多功能分析仪分列式多功能分析仪二、生化试剂盒二、生化试剂盒一液体型试剂与粉剂型试剂优点优点缺点缺点液体液体1.组分均一、瓶间差异小、重
6、复性好;2.无外源水质影响，试剂性能稳定，准确性好保存时间短，不便运输粉剂粉剂保存时间较长，便于运输1.重复性差2.准确性差二、生化试剂盒二、生化试剂盒二单试剂与双试剂优点优点缺点缺点单操作简单、快速1.抗干扰能力差2.分析误差较大双1.简便、快速;2.抗干扰能力强，稳定性好;3.分析误差小，准确性高试剂：消耗或清除干扰物试剂：与待测物起反应比方：TG测定，试剂1含甘油激酶、3-磷酸甘油氧化酶、辣根过氧化物酶、坏血酸氧化酶，但不含脂蛋白脂肪酶，消耗游离甘油。试剂2含脂蛋白脂肪酶起动TG反响。比方酶法测定GLU、CHO、UA、HDL等，试剂1含维生素C氧化本科酶，去除维C对Trinder反响的干
7、扰二、生化试剂盒二、生化试剂盒三试剂盒质量评价1.线性范围2.酶促反响时间曲线或化学反响速度时间曲线1终点法：空白值、反响时间2连续监测法：空白、斜率、反响曲线3.稳定性试验三、生化检验工程三、生化检验工程(一)常规检验工程1.单检验工程实用性：经济、快速可靠性：针对性强2.组合检验工程全面性：提供全面的检验信息高效性：提高检验和诊断效率三、生化检验工程三、生化检验工程二急诊生化检验工程急诊工程：指对临床危急、重症病人的诊断、抢救和治疗有重要指导意义的检验工程。一般要求从“标本采取到“检验报告发出控制在2h内。如血气分析、肾功、电解质、心功等常规工程急诊工程危急值检验工程检验工程三、生化检验工
8、程三、生化检验工程三特殊工程指标本采集技术高，或标本数量少，或含有传染性病毒或细菌的标本，这些标本中的工程不管是急诊还是常规工程均属于特殊工程四、生化仪器四、生化仪器(一)离心机(二)电解质分析仪(三)血气分析仪(四)生化分析仪一离心机离心机：利用离心力分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械一离心机利用离心机转子高速旋转产生的强大离心力，加快液体中颗粒的沉降速度，把样品不同沉降系数和浮力物质的密度别离开来。微粒移动速度与其大小、形态和密度有关，又与重力场的强度及液体的粘度有关1.按别离因素：常速、高速和超速2.按操作方式：间隙式、连续式一离心机n本卷须知n1.离心前要平衡n2.离
9、心机套管底部要垫棉花或试管垫 n3.离心管必须对称放入套管中，防止机身振动 n4.电动离心机如有噪音或机身振动时，应立即切断电源，即时排除故障 n5.启动离心机时，应盖上离心机顶盖后n6.别离结束后，先关闭离心机，在离心机停止转动后，方可翻开离心机盖，取出样品 (二)电解质分析仪溶液中被测离子接触电极时，在离子选择电极基质的含水层内发生离子迁移，迁移离子的电荷改变存在电势，使膜面间的电位发生变化，在测量电极与参比电极间产生一个电位差，测量电位差大小可求得待测离子浓度(三)血气分析仪血气分析仪不仅能在几分钟血气分析仪不仅能在几分钟内检测出病人血液中的氧气、内检测出病人血液中的氧气、二氧化碳等气体
10、的含量和血二氧化碳等气体的含量和血液酸碱度及相关指标的变化，液酸碱度及相关指标的变化，还能快速反映血液中钾、钠、还能快速反映血液中钾、钠、钙的含量，为危重病人抢救钙的含量，为危重病人抢救中快速、准确的检测提供了中快速、准确的检测提供了有利的保障。有利的保障。(四)生化分析仪日立7060 v:400T/h日立7600 v:3200T/h五、室内质量控制五、室内质量控制1.标本质量控制2.试剂质量控制3.仪器质量控制4.操作过程质量控制标准化与标准化5.质量控制标准的建立6.失控原因分析与处理六、实验室信息系统六、实验室信息系统nLIS:laboratory information system,
11、实验室信息系统，是通过计算机对实验室日常工作、科研管理、学科建设等多个方面所需信息，进行收集、处理、存储和应用的系统nHIS：hospital information system,医院信息系统六、实验室信息系统六、实验室信息系统七、常用生化分析技术七、常用生化分析技术一光谱分析技术二电泳技术三离心技术四层析技术五电化学分析技术六生物芯片技术一光谱分析技术n定义：利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称之为光谱分析技术。根据光谱谱系特征，可分为发射光谱分析、吸收光谱分析和散射光谱分析三大类一光谱分析技术类型优点缺点种类吸收光谱分析1.灵敏度高，
12、达10-5mol/L;2.操作简单、快速，选择性好和应用广泛;1.比色法需有标准品;2.紫外法的吸收池需用石英杯;3.原子吸收法需特定元素的空心阴极灯1.可见光及紫外光分光度法2.原子吸收分光光度法发射光谱分析1.荧光分析法灵敏度高，取样量少，检测范围广，临床应用广泛;1.火焰光度法操作繁杂、干扰因素多，被离子选择性电极法取代;1.火焰光度法2.荧光分析法散射光谱分析操作简单、快速，主要用于免疫球蛋白、载脂蛋白和补体等项目检测1.易受混悬液中微粒的分散度影响;2.混悬液的稳定性较差常用法为免疫比浊法一光谱分析技术影响光谱分析的主要因素：1.化学因素：浓度、pH、时间、杂质2.主观因素：操作不当
13、有关3.光学因素：仪器性能有关二电泳技术n定义：在电场中，带电粒子向所带电荷相反的电板移动的现象称为电泳。根据电泳原理可分为移动界面电泳、区带电泳和稳态电泳等二电泳技术类型优点缺点种类移动界面电泳已被区带电泳取代复杂、干扰因素多已淘汰区带电泳凝胶电泳使用更广泛：1.分辨率高2.无拖尾现象3.电泳后无需透明1.滤纸电泳2.凝胶电泳3.毛细管区带电泳稳态电泳复杂1.等电聚焦2.等速电泳二电泳技术n影响电泳的因素：颗粒性质、电场强度、溶液性质、pH、离子强度、溶液粘度等n影响电泳的三大要素：电场、带电粒子和促使粒子移动的介质三离心技术n定义：根据颗粒的密度不同，在受到同一离心力的作用下可分成不同界面
14、的技术n根据原理可分为平衡离心法、等密度离心法和沉降平衡离心法n根据速度可分为低、高、超速离心机三离心技术类型特点与应用种类低速离心机 初级分离和大量生物标本制备1.锥型台式2.水平型桶式3.大容量立式高速离心机适用于各种生物细胞、病毒、血浆蛋白等分离，是细胞生物学和分子生物学研究的重要工具超速离心机1.用于细胞器、病毒的分离2.用于生物大分子的分子量、沉降系数、纯度等检测1.制备型2.分离型四层析技术n定义：利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术，由固定相和流动相组成n原理：当待别离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分与固定相的吸附、溶解、结合等能力不同，在两相中的分配也不同。与固定
15、相相互作用弱的组分，受阻力小，移动速度快，先别离出来，反之，后别离出来四层析技术n按两相所处状态分为液-液、液-固、气-液和气-固层析法n按层析原理分为吸附、分配、离子交换、凝胶和亲和层析法n按操作模式分为柱层析、薄层层析、纸层析和薄膜层析法四层析技术类型特点与应用凝胶层析法凝胶属惰性载体，不带电荷，吸附力弱，较温和，且不需有机溶剂。主要用于脱盐、分离纯化、测定大分子物质分子量等离子交换层析法固定相具有离子交换性能。主要用于分离氨基酸、多肽、蛋白质、核酸、同工酶等高效液相层析法分离能力强、测定灵敏度高、可室温下进行。主要用于分离蛋白质、核酸、氨基酸等亲和层析法操作简单、快速、分离效率高，但必须
16、针对某一分离对象，制备专一配基和寻求层析的稳定条件，应用范围受到限制。主要用于免疫物质、核酸、受体等的分离五电化学分析技术n定义：利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化进行分析的方法。主要有电位法、电导法和电容量分析法等n离子选择性电极分析法是电位分析法中开展最快的一支，主要用于电解质和血气分析六生物芯片技术n定义：通过微加工技术和微电子技术在固体芯片外表构建的微型生物化学分析系统，具有高能量、微型化和自动化的特点，可对细胞、蛋白质、DNA等生物分子进行检测n类型：基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室n应用：临床疾病诊断、基因测序、药物筛选六生物芯片技术n操作要点n1.芯片制备：玻片、硅片、聚乙烯板等。用小牛血清蛋白修饰玻片。外表点上序列或结构的基因或蛋白质n2.样品制备：用生物素或酶标记样品中的待测基因或蛋白n3.生物分子反响：最适温度、pH、缓冲液n4.芯片信号检测：小结n回忆总结：
