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1、微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应l在生活细胞中存在的化学反应称之为代谢。在生活细胞中存在的化学反应称之为代谢。l微生物在代谢活动中的生理生化反应呈现出很微生物在代谢活动中的生理生化反应呈现出很大的多样性。大的多样性。微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应l淀粉的水解实验淀粉的水解实验l糖发酵实验糖发酵实验l吲哚、甲基红、吲哚、甲基红、V-P V-P 反响反响 l微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸收利用。l微生物的胞外酶如淀粉酶、脂肪酶等将大分子物质的分解过程可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。l淀粉遇碘液呈蓝色，但在淀粉被细菌水解的区域，遇
2、碘不再呈蓝色，这可作为细菌产生淀粉酶的证据。 1 1、淀粉的水解试验、淀粉的水解试验l菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。l培养基：固体淀粉培养基。培养基：固体淀粉培养基。l溶液或试剂：卢戈氏碘液。溶液或试剂：卢戈氏碘液。l器材：无菌培养皿，接种环，试管架。器材：无菌培养皿，接种环，试管架。1 1、淀粉的水解试验、淀粉的水解试验操作步骤： （1无菌操作制备淀粉固定培养基平板。 （2将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别在同一平板不同的部分划线接种，在平板的反面分别写上菌名。 （4将平板倒置在37温箱中培养24h。 （5观察各种细菌的生长情况。滴入少量卢戈氏碘液于平皿中,轻轻旋转平
3、板,使碘液均匀铺满整个平板。1 1、淀粉的水解试验、淀粉的水解试验+枯草大肠结果：将结果填入下表。“”表示阳性，“”表示阴性。菌名枯草芽孢杆菌大肠杆菌淀粉水解实验1 1、淀粉的水解试验、淀粉的水解试验2 2、糖发酵试验、糖发酵试验l糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应。某些细菌能利用糖类作为碳源和能源，使糖类分解而产酸产气或产酸不产气。不同种的细菌对于各种糖类利用能力不同，分解产物也不同。l大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；l普通变形杆菌只能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。l伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖。 1.菌种：大肠杆菌，普通变形杆菌斜面各一 支。 2.培养基：葡萄糖
4、发酵培养基试管和乳糖发 酵培养基试管各3支内装有倒置的杜汉氏 小管）。 3.仪器或其他用具：试管架，接种环等。2 2、糖发酵试验、糖发酵试验 产酸指示剂、倒置小管l1.用标签纸在各试管外壁上分别标明发酵培养基名称和所接种的细菌菌名。l2.取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接入大肠杆菌，普通变形杆菌，第三支不接种，作为对照。l另取乳糖发酵培养基试管3支，同样分别接入大肠杆菌，普通变形杆菌，第三支不接种，作为对照。2 2、糖发酵试验、糖发酵试验l在接种后，轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡。l 3.将接种过和作为对照的6支试管均置37培养2448h。l 4.观察各试管颜色变化及杜汉氏小管
5、中有无气泡。2 2、糖发酵试验、糖发酵试验l实验报告l 将结果填入下表。“+”表示产酸或产气，“-”表示不产酸或不产气。l糖类发酵大肠杆菌普通变形杆菌对照葡萄糖发酵乳糖发酵2 2、糖发酵试验、糖发酵试验吲哚试验、甲基红试验与吲哚试验、甲基红试验与V.P.V.P.反响反响l吲哚试验吲哚试验indol testindol test）l甲基红试验甲基红试验methyl red testmethyl red test）lV.P.V.P.反响反响Voges-Prokauer testVoges-Prokauer test）一、目的要求一、目的要求l了解试验原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。二、基本原理
6、二、基本原理l吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验主要用来鉴别大肠杆菌与产气肠杆菌Enterobacter aerogenes）。l主要是用于水的细菌学检查，因为大肠杆菌虽非致病菌，但在饮水中若大肠杆菌超过一定数量则表示受粪便污染；l而产气肠杆菌则广泛存在于自然界中，因此，检查水时要将二者区分开来。 l有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，就会形成红色的玫瑰吲哚。l色氨酸水解反应l吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应l大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。吲哚试验吲哚试验l某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基变酸，
7、加入培养基中的甲基红指示剂pH4.2红色）-6.3黄色），可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即甲基红阳性反应。l大肠杆菌发酵葡萄糖产酸;l产气肠杆菌将有机酸转化为非酸性末端产物,如乙醇、丙酮酸等。甲基红试验甲基红试验伏伏- -普试验普试验l某些细菌可利用葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进行缩合，脱羧变成乙酰甲基甲醇，此物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即伏-普反应阳性，没有红色化合物产生则为阴性。l产气肠杆菌伏-普反应阳性，大肠杆菌伏-普为阴性。 三、器材 l菌种 大肠杆菌，产气肠杆菌；l培养基 蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基；l溶液或
8、试剂 甲基红试剂，40KOH，5-萘酚，乙醚，吲哚试剂等。四、操作步骤 l1接种与培养l (1)将大肠杆菌、产气肠杆菌分别接种于2支蛋白胨水培养基中做吲哚试验），置37温室中培养2天。l (2)将上述二菌分别接种于2支葡萄糖蛋白胨水培养基中做甲基红试验与伏-普试验），置37温室培养2天。l2观察结果l (1)吲哚试验l 于培养48小时后的蛋白胨水培养物内加34滴乙醚，摇动数次，静置13分钟，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。l (2)甲基红试验l 培养48小时后，将葡萄糖蛋白胨水培养物分为两小管其中一管留做伏-普试验），在一管内加甲基红试剂2
9、滴，培养基变红色者为阳性，黄色者为阴性。 (3)伏普试验 培养两天后，将另一支葡萄糖蛋白胨水培养物内加入510滴40KOH，然后加入等量的5-萘酚溶液，用力振荡，再放入37温箱中保温1530min，以加快反应速度。培养物呈红色者，为阳性。五、实验报告 1结果将实验结果填入下表。“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应。菌名吲哚试验甲基红实验 伏普试验大肠杆菌产气肠菌对 照 2思考题（1解释在细菌培养中吲哚检测到的化学原理，为什么在这个实验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？（2为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气杆菌为阴性？这个试验与伏普试验最初底物与最终产物有何异同处？为什么会出现不同？
