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1、实验五实验五肠道杆菌和厌氧菌、真菌肠道杆菌和厌氧菌、真菌一、肠道杆菌形态、培养特性及生化反应一、肠道杆菌形态、培养特性及生化反应 1. 1. 形态形态: : 大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌 2. 2. 培养（中国兰平板）培养（中国兰平板） 大肠杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、 伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、痢疾杆菌伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、痢疾杆菌3. 3. 生化反应：生化反应： （示）（示） 双糖铁基培养基双糖铁基培养基 尿素培养基尿素培养基 双糖铁基培养基半固体培养基固体斜面培养基成分：成分：硫酸亚铁铵硫酸亚铁铵硫代硫酸钠硫代硫酸钠乳糖乳糖酚红酚红H2S试验试验乳
2、糖发酵试验乳糖发酵试验成分：成分：琼脂琼脂(0.35%)(动力观察动力观察)蛋白胨水蛋白胨水葡萄糖葡萄糖 酚红酚红葡萄糖发酵试验葡萄糖发酵试验A.A.接种大肠杆菌接种大肠杆菌B.B.接种痢疾杆菌接种痢疾杆菌C.C.未接种的对照管未接种的对照管3. 3. 生化反应：生化反应： （示）（示） 双糖铁基培养基双糖铁基培养基 尿素培养基尿素培养基 尿素培养基尿素培养基成份：成份：20%20%尿素水溶液尿素水溶液 0.6% 0.6%酚红溶液酚红溶液原理：尿素酶分解尿素产氨气原理：尿素酶分解尿素产氨气二、肠道杆菌分离鉴定步骤二、肠道杆菌分离鉴定步骤 1.1.粪便粪便中国兰平板中国兰平板 兰色、较大、不透明
3、菌落兰色、较大、不透明菌落-大肠杆菌大肠杆菌 无色、较小，半透明菌落无色、较小，半透明菌落-致致 病病 菌菌 2. 2.生化试验：生化试验： 双糖铁基、尿素、吲哚双糖铁基、尿素、吲哚 3. 3.血清诊断血清诊断操作：生化反应操作：生化反应 接接 种种：双糖铁基双糖铁基菌菌 株株： 中国兰平板中国兰平板(1-8)：单号；双号：单号；双号 致致 病病 菌菌 接接 种种： 1、双糖铁基、双糖铁基 葡萄糖发酵管葡萄糖发酵管 2 蛋白胨水培养基蛋白胨水培养基 硫酸亚铁半固体培养基硫酸亚铁半固体培养基 菌菌 株株： 中国兰平板中国兰平板(1-8)：单号；双号：单号；双号 致致 病病 菌菌示示示示教教教教1
4、. 厌氧培养厌氧培养 2. 双糖铁基双糖铁基 3. 尿素培养基尿素培养基 4. R质粒接合传递质粒接合传递 操作操作操作操作实验结果观察实验结果观察药敏试验药敏试验R质粒接合传递试验质粒接合传递试验供体菌：福氏痢疾杆菌供体菌：福氏痢疾杆菌 耐链霉素、氯霉素、四环素和磺胺药物耐链霉素、氯霉素、四环素和磺胺药物受体菌：大肠杆菌受体菌：大肠杆菌 耐利福平耐利福平培养基：中国兰平板培养基：中国兰平板 100g/ml利福平；利福平；20g/ml氯霉素氯霉素厌氧芽胞梭菌与厌氧培养法厌氧芽胞梭菌与厌氧培养法 1 1、形态观察、形态观察 破伤风梭菌破伤风梭菌 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌 肉毒梭菌肉毒梭菌 破伤风
5、梭菌鞭鞭毛毛芽芽胞胞产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌2 2、厌氧培养法、厌氧培养法 用于专性厌氧菌的培养用于专性厌氧菌的培养方法：方法：1)1)将普通培养基置于无氧环境中培养将普通培养基置于无氧环境中培养 如如: :焦性没食子酸吸氧法焦性没食子酸吸氧法2)2)厌氧培养基厌氧培养基: :在培养基中加氧化还原剂在培养基中加氧化还原剂 如如: :疱肉培养基疱肉培养基 a. a. 原理：焦性没食子酸在原理：焦性没食子酸在碱性碱性溶液溶液中能迅速吸收氧气，生成深棕中能迅速吸收氧气，生成深棕色色焦性没食子橙焦性没食子橙，利用此法可除去，利用此法可除去试管或平皿等容器中的氧气。试管或平皿等容器中的氧
6、气。（1 1）焦性没食子酸法）焦性没食子酸法焦性没食子酸培养基焦性没食子酸培养基示意图血平板纱布石蜡b.培养结果观察产气荚膜梭菌血平板厌氧培养（2）疱肉培养基a.原理原理 动物组织耗氧法动物组织耗氧法 还原型氨基酸还原型氨基酸 谷胱甘肽谷胱甘肽 凡士林凡士林 不饱和脂肪酸不饱和脂肪酸破破伤伤风风梭梭菌菌产产气气荚荚膜膜梭梭菌菌正正常常对对照照梅毒螺旋体梅毒螺旋体（暗视野映光法）暗视野映光法） 1 1、形态形态: : 单细胞单细胞酵母菌酵母菌 如白假丝酵母菌如白假丝酵母菌 新生隐球菌新生隐球菌 多细胞多细胞丝状菌丝状菌真菌的形态与培养真菌的形态与培养白假丝酵母菌新生隐球菌（墨汁染色）2 2、培养
7、特性、培养特性: : 沙保弱培养基沙保弱培养基成份：成份： 蛋白胨蛋白胨 1g 1g 琼脂琼脂 2g 2g 葡萄糖葡萄糖 4g 4g 蒸馏水蒸馏水 100ml 100ml pH 45 pH 45左右左右菌落特征菌落特征: : 酵母型菌落酵母型菌落 类酵母型菌落类酵母型菌落 丝状型菌落丝状型菌落单细胞多细胞白假丝酵母菌白假丝酵母菌新生隐球菌新生隐球菌 酵母型菌落类酵母型菌落酵母型菌落类酵母型菌落狂犬病病毒包涵体（内基小体）巨细胞病毒包涵体分枝杆菌与抗酸染色分枝杆菌与抗酸染色1 1、 形态形态2 2、结构特点、结构特点3 3、抗酸染色、抗酸染色结核杆菌结核杆菌（抗酸染色）（抗酸染色）结核杆菌结核杆菌（抗酸染色）（抗酸染色）抗酸染色抗酸染色 （1）温染温染：石炭酸复红溶液：石炭酸复红溶液 5 min （2）脱色脱色：3%盐酸酒精溶液盐酸酒精溶液 0.5-1 min （3）复染复染：碱性美兰：碱性美兰 溶液溶液 0.5 min
