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1、第六节第六节食品中维生素的测定食品中维生素的测定维生素维生素(vitamin)是维持人体正常生命活是维持人体正常生命活动所必须的天然有机化合物，但它们参与机动所必须的天然有机化合物，但它们参与机体重要的生理过程，是生命活动不可缺少的体重要的生理过程，是生命活动不可缺少的物质。物质。维维生生素素的的种种类类多多（20多多种种），结结构构复复杂杂，理理化化性性质质及及生生理理功功能能各各异异。根根据据溶溶解解性性，可可分为：分为： 2021/8/61名称名称英文名称英文名称食物来源食物来源脂溶脂溶性维性维生素生素维生素维生素AVitaminA鱼肝油、蛋黄、肝、肾、乳鱼肝油、蛋黄、肝、肾、乳维生素维
2、生素DVitaminD鱼肝油、肝脏、蛋黄、牛奶鱼肝油、肝脏、蛋黄、牛奶维生素维生素EVitaminE绿蔬、植物油、豆类、玉米绿蔬、植物油、豆类、玉米维生素维生素KVitaminK绿叶蔬菜、大豆绿叶蔬菜、大豆水溶水溶性维性维生素生素维生素维生素B族族VitaminBcomplex维生素维生素B1（硫胺素）（硫胺素）thiamine,糙米、麦麸、酵母、豆类糙米、麦麸、酵母、豆类维生素维生素B2（核黄素）（核黄素）riboflavin肝、肾、蛋黄、豆类、酵母肝、肾、蛋黄、豆类、酵母维生素维生素B3（泛酸）（泛酸）pantothenicacid蛋黄、动物肝脏、酵母蛋黄、动物肝脏、酵母维生素维生素B5（
3、烟酸、尼克酸）（烟酸、尼克酸）nicotinamide,金枪鱼、动物肝脏、蘑菇金枪鱼、动物肝脏、蘑菇维生素维生素B6（吡哆素）（吡哆素）pyridoxine肝脏、蛋黄、肉、大豆、谷肝脏、蛋黄、肉、大豆、谷维生素维生素B7（生物素）（生物素）vitaminH,biotin酵母、动物肝脏酵母、动物肝脏维生素维生素B11（叶酸）（叶酸）folicacid绿叶蔬菜、豆类、动物肝脏绿叶蔬菜、豆类、动物肝脏维生素维生素B12（钴胺素）（钴胺素）cobalamins肉类、鱼类、家禽、奶类肉类、鱼类、家禽、奶类维生素维生素C（抗坏血酸）（抗坏血酸）ascorbicacid新鲜蔬菜、豆芽、水果新鲜蔬菜、豆芽、水
4、果表表3-5维生素的类别及食物来源维生素的类别及食物来源2021/8/62根据溶解性，可分为：根据溶解性，可分为：l脂脂溶溶性性维维生生素素（fat-soluble)：维维生生素素A(包包括括胡胡萝萝卜卜素素)、维维生生素素D、维维生生素素E和和维维生生素素K等。等。l 水水溶溶性性维维生生素素(water-soluble)：维维生生素素B族族(包包括括B1、B2、烟烟酸酸、B6、泛泛酸酸、生生物物素、肌醇、胆碱、叶酸、素、肌醇、胆碱、叶酸、B12等等)和维生素和维生素C。2021/8/63一、一、脂溶性维生素的测定脂溶性维生素的测定（一）（一）概述概述维维生生素素A是是由由-紫紫罗罗酮酮环环
5、与与不不饱饱和和一一元元醇醇所所组组成成的的一一类类化化合合物物及及其其衍衍生生物物的的总总称称。包包括括维维生生素素A A1 1和和A A2 2，维维生生素素A A1 1又又称称视视黄黄醇醇，维维生生素素A2即即3-脱氢视黄醇。脱氢视黄醇。2021/8/641716192071115CH2OH18维生素维生素A维生素维生素A采用国际单位表示：采用国际单位表示：1国际单位维生素国际单位维生素A：0.3 g维生素维生素A(醇醇)；0.344 g乙酸维生素乙酸维生素A(酯）酯）149132021/8/65 -胡胡萝萝卜卜素素(carotene)在在肝肝脏脏、小小肠肠粘粘膜膜或或其其它它组组织织中中
6、可可转转化化为为维维生生素素A，故故胡胡萝萝卜卜素又称为维生素素又称为维生素A源。源。维维生生素素E，又又称称生生育育酚酚，有有多多种种异异构构体体，其中其中 -生育酚的生理活性最高，分布最广泛。生育酚的生理活性最高，分布最广泛。2021/8/66脂溶性维生素的理化性质：脂溶性维生素的理化性质：(1)溶解性：溶解性：不不溶溶于于水水，易易溶溶于于脂脂肪肪、乙乙醇醇、丙丙酮酮、三三氯氯甲烷、乙醚、苯等有机溶剂；甲烷、乙醚、苯等有机溶剂；(2)耐酸碱性：耐酸碱性：维生素维生素A、D对酸不稳定，对酸不稳定，对碱稳定对碱稳定；维维生生素素E对对酸酸稳稳定定，对对碱碱不不稳稳定定，但但在在抗抗氧氧化化剂
7、剂存存在在下下或或惰惰性性气气体体保保护护下下，也也能能承承受受与与碱一起煮沸。碱一起煮沸。2021/8/67(3)(3)耐热性和耐氧化性：耐热性和耐氧化性：维维生生素素A、D、E耐耐热热性性好好，能能经经受受煮煮沸沸。维生素维生素A易被氧化，光、热促进其氧化；易被氧化，光、热促进其氧化；维维生生素素E在在空空气气中中缓缓慢慢氧氧化化，光光、热热、碱碱能促进氧化；能促进氧化；维生素维生素D性质稳定，不易被氧化。性质稳定，不易被氧化。检测时脂溶性维生素时应避光检测时脂溶性维生素时应避光2021/8/68摄入量摄入量l根据我国居民营养素参考摄入量根据我国居民营养素参考摄入量l成人男性：成人男性：8
8、00 gRE,女性：女性：700 gREl视黄酮当量（视黄酮当量（retinolequivalents，RE）l1 gRE=1 g视黄酮视黄酮l=6 g -胡萝卜素胡萝卜素l=12 g其他类胡萝卜素其他类胡萝卜素2021/8/69l测测定定食食品品中中脂脂溶溶性性维维生生素素时时，通通常常采采用用皂皂化化法法处处理理样样品品，以以除除去去脂脂肪肪等等杂杂质质，在在皂皂化化和和浓浓缩缩时时，常常加加入入抗抗氧氧化化剂剂(如如焦焦性性没没食食子子酸酸、维维生生素素C等等),然然后后用用乙乙醚醚、石石油油醚醚等等有有机溶剂提取浓缩脂溶性维生素。机溶剂提取浓缩脂溶性维生素。2021/8/610( (二
9、二) )维生素维生素A A的三氯化锑比色法的三氯化锑比色法1.原理原理在在三三氯氯甲甲烷烷溶溶液液中中，维维生生素素A与与三三氯氯化化锑锑反反应应可可生生成成蓝蓝色色化化合合物物，在在620nm波波长长处处有有最最大大吸吸收收，其其吸吸光光度度与维生素与维生素A的含量成正比。的含量成正比。2021/8/6112. 2. 样品处理样品处理样样品品加加NaOH醇醇溶溶液液水水浴浴上上回回流流(使使脂脂肪肪转转变变成成肥肥皂皂并并溶溶于于水水中中) 加加乙乙醚醚提提取取维维生生素素A净净化化处处理理乙乙醚醚提提取取液液后后挥挥干干乙乙醚醚三三氯氯甲烷定容甲烷定容。2021/8/6123.3.注意事项
10、：注意事项：(1)三三氯氯甲甲烷烷中中不不应应含含有有水水分分，因因三三氯氯化化锑锑遇遇水水会水解出现沉淀，干扰比色测定会水解出现沉淀，干扰比色测定SbCl3十十H2OSbOCl十十2HCl在三氯甲烷中加入在三氯甲烷中加入乙酸酐乙酸酐，以保证脱水。，以保证脱水。(2)SbCl3与与维维生生素素A所所产产生生的的蓝蓝色色物物质质通通常常只只能能稳稳定定3 3 6s6s，6s以以后后便便开开始始退退色色，因因此此在在吸吸收收池中反应，产生颜色后立即读取吸光度值。池中反应，产生颜色后立即读取吸光度值。2021/8/613(3)维维生生素素A见见光光易易分分解解，实实验验操操作作应应在在暗暗处处进行。
11、进行。2 2胡萝卜素的纸色谱法胡萝卜素的纸色谱法以以丙酮丙酮- -石油醚石油醚提取提取水洗涤（除水洗涤（除去提取液中水溶性色素及丙酮）去提取液中水溶性色素及丙酮）石油石油醚提取液浓缩。醚提取液浓缩。2021/8/614层析滤纸层析滤纸提取液条状点样提取液条状点样石油醚展开石油醚展开将将Rf值值与标准胡萝与标准胡萝卜素相同的色斑剪下用石油醚溶解卜素相同的色斑剪下用石油醚溶解450nm波长下测定吸光度，与标准波长下测定吸光度，与标准系列比较定量。系列比较定量。2021/8/6153.3.维生素维生素A A和维生素和维生素E E的的HPLCHPLC测定法测定法食食品品样样品品经经皂皂化化处处理理后后
12、，用用乙乙醚醚提提取取维维生生素素A和和维维生生素素E，浓浓缩缩后后，挥挥去去乙乙醚醚，以以乙乙醇醇溶溶解解提提取取物物。在在反反相相C18色色谱谱柱柱上上，以以甲甲醇醇(+水水或或己己烷烷)为为流流动动相相进进行行色色谱谱分分离离，紫紫外外分分光光光光度度检测器检测，检测器检测，与标准比较定量与标准比较定量。2021/8/6162021/8/617二、水溶性维生素的测定二、水溶性维生素的测定l水溶性维生素水溶性维生素(VB1,VB2,Vc)的理化性质：的理化性质：ll溶溶解解性性：易易溶溶于于水水，不不溶溶于于苯苯、乙乙醚醚、三三氯甲烷等有机溶剂。氯甲烷等有机溶剂。ll稳稳定定性性：在在酸酸
13、性性介介质质中中稳稳定定，即即使使加加热热维维生生素素B1、B2也也不不被被破破坏坏；在在碱碱性性介介质质中中不不稳稳定定，易于分解。易于分解。Vc在酸性还原性介质中稳定。在酸性还原性介质中稳定。2021/8/618ll维维生生素素B B2 2对对光光敏敏感感，在在酸酸性性、中中性性及及碱碱性性环环境境中中都都易易被被光光线线破破坏坏，维维生生素素C C对对氧氧、铜铜离离子子敏敏感感，易易被被氧氧化。化。2021/8/619（一）维生素（一）维生素B1的测定的测定维维生生素素Bl又又名名硫硫胺胺素素(thiamine)，易易溶溶于于水水和和丁丁醇醇、异异丁丁醇醇、异异戊戊醇醇等等有有机机溶溶剂
14、剂。维维生生 素素 B1的的 测测 定定 主主 要要 采采 用用 荧荧 光光 分分 析析 法法(GB12390-90)。人人体体每每日日需需要要量量为为1 12 2mgmg。VBVB1 1参参与与糖糖代代谢谢及及乙乙酰酰胆胆碱碱( (Ach)Ach)的的代代谢谢，促促进进消消化化功功能能。维维生生素素B B1 1缺缺乏乏可可引引起起神神经经系系统统病病变变还还可可引引起起心心血血管管系系统统病病变变。在在酵酵母母、米米糠糠、花花生生、豆豆类、牛乳、蛋黄中含量丰富。类、牛乳、蛋黄中含量丰富。2021/8/620l食食品品中中的的维维生生素素Bl经经提提取取净净化化后后，在在碱碱性性铁铁氰氰化化钾
15、钾溶溶液液中中被被氧氧化化成成硫硫色色素素，在在紫紫外外光光照照射射下下，硫硫色色素素产产生生蓝蓝色色荧荧光光，溶溶液液的的荧荧光光强强度度与与维维生生素素B1的的浓浓度度成成正正比，与标准比较定量。比，与标准比较定量。1.测定原理测定原理2021/8/621本方法检出限为本方法检出限为0.05g，线性范围为线性范围为0.2g10g。硫胺素是由取代的嘧啶环和噻唑环由亚甲基相联而成的一类化合物硫胺素是由取代的嘧啶环和噻唑环由亚甲基相联而成的一类化合物2021/8/622l2.样样品品处处理理：样样品品粉粉碎碎或或匀匀浆浆于于低低温温冰冰箱箱中中保保存，测定前解冻存，测定前解冻。l(1)样品中硫胺
16、素的样品中硫胺素的提取提取：l稀稀盐盐酸酸提提取取高高压压锅锅（121）加加热热淀淀粉粉酶酶水水解解4550过过夜夜游游离离硫硫胺胺素。素。l(2)样品中硫胺素的样品中硫胺素的纯化纯化：l样样液液人人造造浮浮石石交交换换管管硫硫胺胺素素被被吸吸附附水水洗洗除除杂杂质质酸酸性性氯氯化化钾洗脱钾洗脱硫胺素。硫胺素。l(3)硫色素硫色素的生成、萃取和荧光测定的生成、萃取和荧光测定:2021/8/623l取一定体积样品提取液取一定体积样品提取液l和硫胺素标准液（各和硫胺素标准液（各2份）份）l加碱性铁氰化钾加碱性铁氰化钾加氢氧化钠加氢氧化钠l形成硫色素形成硫色素破坏硫胺素破坏硫胺素l用丁醇萃取，分层用
17、丁醇萃取，分层l有机相脱水，荧光测定。有机相脱水，荧光测定。2021/8/624l根根据据标标准准硫硫胺胺素素含含量量和和荧荧光光强强度度及及样样品品荧荧光光强强度度(均均扣扣除除空空白白)，计计算算样样品品中中硫硫胺胺素素的含量。的含量。l3.注意注意l(1)样样品品与与铁铁氰氰化化钾钾溶溶液液混混合合后后，所所呈呈黄黄色色至至少少应应保保持持15s，否否则则需需再再滴滴加加铁铁氰氰化化钾钾溶溶液液12滴。但滴。但铁氰化钾过多又会破坏硫色素铁氰化钾过多又会破坏硫色素。l(2)紫紫外外光光会会破破坏坏硫硫色色素素，硫硫色色素素形形成成后后应应迅迅速测定，并避光操作。速测定，并避光操作。2021
18、/8/625l(3)硫色素能溶于正丁醇，且稳定。硫色素能溶于正丁醇，且稳定。l(4)洗洗衣衣粉粉内内常常含含荧荧光光物物质质，故故所所用用的的仪仪器器，禁用洗衣粉洗涤。禁用洗衣粉洗涤。l2021/8/626(二二)维生素维生素B2的测定的测定l维维生生素素B B2 2又又名名核核黄黄素素(riboflavin)(riboflavin)，是是多多种种酶酶（含含有有核核黄黄素素的的氧氧化化还还原原酶酶）辅辅基基的组成成分，参与机体的氧化还原过程。的组成成分，参与机体的氧化还原过程。l 主主要要存存在在于于瘦瘦肉肉、肝肝、肾肾、心心、奶奶类类、蛋蛋类类、绿绿叶叶蔬蔬菜菜等等动动物物性性食食品品，许许
19、多多绿绿叶叶蔬蔬菜菜和和豆豆类类也也含含有有一一定定量量维维生生素素B2，而而谷谷类中则含量较少。类中则含量较少。2021/8/627猪肝猪肝2.082.08猪肾猪肾1.141.14猪心猪心0.480.48牛奶牛奶0.140.14鸡蛋鸡蛋0.320.32黄豆黄豆0.200.20芹菜芹菜0.190.19苋菜苋菜0.120.12西兰花西兰花0.130.13表表1 1 常见食品中维生素常见食品中维生素B B2 2的含量（的含量（mg/100gmg/100g）2021/8/628 维生素维生素B B2 2易溶于水，在易溶于水，在酸性和中性溶液酸性和中性溶液中稳中稳定，于定，于120120加热加热6h6
20、h仅有少量被破坏，但在仅有少量被破坏，但在碱碱性溶液性溶液中较易分解。游离核黄素中较易分解。游离核黄素对光敏感对光敏感，特特别是紫外光，在酸性、中性或碱性条件下都易别是紫外光，在酸性、中性或碱性条件下都易被光线破坏。只有当维生素被光线破坏。只有当维生素B B2 2与磷酸蛋白质结与磷酸蛋白质结合成复合物，对光才比较稳定。合成复合物，对光才比较稳定。VBVB2 2在水溶液在水溶液中呈现黄绿色荧光中呈现黄绿色荧光, ,测定维生素测定维生素B2常用荧光分常用荧光分析法。析法。2021/8/6291.测定原理测定原理l样品样品 酸解、酶解酸解、酶解使使VBVB2 2游离游离 高锰酸钾氧化色素高锰酸钾氧化
21、色素和杂质和杂质 硅镁吸附剂柱净化硅镁吸附剂柱净化 测定测定 荧光强度荧光强度( (激发波长为激发波长为440nm440nm，525nm525nm波长处检测。波长处检测。l试液中加试液中加连二亚硫酸钠连二亚硫酸钠 还原还原VBVB2 2为无荧光物质为无荧光物质 测定杂质的荧光强度。测定杂质的荧光强度。l 还原前后荧光强度的差值与维生素还原前后荧光强度的差值与维生素B B2 2含量成正比，含量成正比，与标准比较定量。与标准比较定量。l本方法检出限为本方法检出限为0.006g，线性范围为，线性范围为0.1g20g。2021/8/630l2.2.样品处理样品处理l样样品品酸酸性性条条件件下下于于12
22、0水水解解核核黄黄素素游游离离调调节节pH值值使使蛋蛋白白质质在在等电点沉淀等电点沉淀过滤除去杂质过滤除去杂质l核核黄黄素素溶溶液液KMnO4酸酸性性条条件件氧氧化化色色素素和和杂杂质质H2O2除除去去多多余余的的KMnO4。2021/8/631l3.核黄素的吸附和洗脱核黄素的吸附和洗脱l核黄素溶液核黄素溶液硅镁吸附剂柱硅镁吸附剂柱热水洗除杂质热水洗除杂质丙酮丙酮-冰乙酸冰乙酸-水水(5+2+9)洗脱洗脱收集洗脱液。收集洗脱液。2021/8/632l4.4.荧光测定荧光测定l测定样品的荧光读数测定样品的荧光读数A，样品空白，样品空白的荧光读数的荧光读数Ao，标准溶液的荧光读数，标准溶液的荧光读
23、数B，标准管空白荧光读数，标准管空白荧光读数Bo,可计算样品可计算样品中维生素中维生素B2的含量。的含量。2021/8/6334.说明说明(1)加加入入连连二二亚亚硫硫酸酸钠钠(Na(Na2 2S S2 20 04 4) )，还还原原维维生生素素B2使使生生成成无无荧荧光光的的物物质质，可可排排除除杂杂质质荧荧光光所所引引起起的的干干扰扰。加加入入后后应应尽尽快快进进行测定，否则会氧化成有荧光的核黄素。行测定，否则会氧化成有荧光的核黄素。2021/8/634l(2)(2)操作应在避光条件下进行。操作应在避光条件下进行。2021/8/635(三）三）HPLC同时测定同时测定B族维生素族维生素B族
24、维生素的检测方法很多，高效液相色谱族维生素的检测方法很多，高效液相色谱法分析速度快、灵敏度高、准确性好，样品法分析速度快、灵敏度高、准确性好，样品量需用量少，可以同时测定多种量需用量少，可以同时测定多种B族维生素。族维生素。国家卫生标准方法国家卫生标准方法(GB/T5009.197-2003)可可以同时测定保健食品中的以同时测定保健食品中的VB2、烟酸和烟酰烟酸和烟酰胺的高效液相色谱法。胺的高效液相色谱法。2021/8/636l样品经甲醇、水和磷酸的混合液提取，样品经甲醇、水和磷酸的混合液提取，滤膜过滤后，以滤膜过滤后，以1-葵烷磺酸钠葵烷磺酸钠-乙腈乙腈-磷酸为磷酸为流动相，用流动相，用C1
25、8柱分离，紫外柱分离，紫外280nm检测，检测，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。以保留时间定性，峰高或峰面积定量。1.实验原理实验原理2021/8/6372.样品处理样品处理称取适量研磨混匀的样品，加入甲称取适量研磨混匀的样品，加入甲醇、水和磷酸的混合液（醇、水和磷酸的混合液（100+400+0.5100+400+0.5）超声提取超声提取5min5min，3000r/mim3000r/mim离心离心5min5min，上，上清液经滤膜过滤后即可进样。清液经滤膜过滤后即可进样。2021/8/6383.色谱条件色谱条件C18柱（柱（150mm4.6mm,5m），流速），流速1ml/min，柱温：室
26、温，检测波长为，柱温：室温，检测波长为280nm，流动相为，流动相为1-葵烷磺酸钠溶液葵烷磺酸钠溶液（0.22g1-葵烷磺酸钠溶解于葵烷磺酸钠溶解于850ml水中）水中）+乙腈乙腈+磷酸磷酸=850+150+1。2021/8/639l4.方法说明方法说明l1）可通过调节流动相的）可通过调节流动相的pH值来控制维生值来控制维生素的电离，从而调节其保留时间和分离度。素的电离，从而调节其保留时间和分离度。l2）可在测定过程中变换检测波长，提高）可在测定过程中变换检测波长，提高检测灵敏度，如维生素检测灵敏度，如维生素B1、烟酸、烟酰胺、烟酸、烟酰胺最大吸收波长为最大吸收波长为254nm，维生素，维生素
27、B2、维生、维生素素B6、叶酸为、叶酸为280nm。l2021/8/6403 3）流动相中加入）流动相中加入1%1%磷酸，可降低维生磷酸，可降低维生素的离子化，改善峰形，减缓峰的拖尾素的离子化，改善峰形，减缓峰的拖尾现象。现象。 4 4）由于）由于B B族维生素在水中可以解离为族维生素在水中可以解离为带电荷的离子，在系统中加入一种与上带电荷的离子，在系统中加入一种与上述电荷相反的离子对试剂，使其形成中述电荷相反的离子对试剂，使其形成中性离子对，即可于反相离子对色谱中进性离子对，即可于反相离子对色谱中进行分离。行分离。2021/8/641维维 生生 素素 C C， 又又 称称 为为 抗抗 坏坏
28、血血 酸酸(ascorbic (ascorbic acid)acid)，具具有有较较强强的的还还原原性性，被被氧氧化化后后形形成成脱脱氢氢型型抗抗坏坏血血酸酸，仍仍然然具具有有生生理理活活性性。脱脱氢氢型型抗抗坏坏血血酸酸水水解解成成2,3-2,3-二二酮酮古古洛洛糖糖酸酸后后，便便失失去去生生理理活性。活性。在蔬菜和水果中含量很丰富在蔬菜和水果中含量很丰富。(三三)维生素维生素C的测定的测定2021/8/642lO=CO=CCOOHlHO-CO=CC=OlHO-COO=COC=OlHO-CH-CH-C-OHlHO-C-HHO-C-HHO-C-HlCH2OHCH2OHCH2OHl（还原型（还原
29、型）（脱氢型）（脱氢型）（二酮古洛糖酸）（二酮古洛糖酸）2021/8/643l2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚在在酸酸性性溶溶液液中中呈呈红红色色，VC能能将将其其还还原原成成无无色色。将将2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚装装入入滴滴定定管管中中，滴滴定定样样品品中中的的维维生生素素C，当当维维生生素素C全全部部氧氧化化后后，滴滴下下的的染染料料使使溶溶液液显显示粉红色，指示滴定终点。示粉红色，指示滴定终点。l1.还原型抗坏血酸的测定还原型抗坏血酸的测定（1.2,6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛酚滴定法）2021/8/644本本法法是是测测定定还还原原型型维维生生素素C最最简简便便方方法法，适适合合于于
30、蔬蔬菜菜水水果果中中维维生生素素C含含量量的的测测定定，但但不不适适宜于红色蔬菜。宜于红色蔬菜。样样品品中中某某些些杂杂质质可可还还原原染染料料，但但速速度度较较慢慢，终点以粉红色出现终点以粉红色出现15s不退为准。不退为准。整整个个测测定定过过程程要要迅迅速速，以以免免维维生生素素C被被空空气气中中氧所氧化，并避免接触金属离子。氧所氧化，并避免接触金属离子。2021/8/6452.总抗坏血酸的测定（总抗坏血酸的测定（2,4-二硝基二硝基苯肼比色法苯肼比色法,GB/5009.86-2003）l用用酸酸处处理理过过的的活活性性炭炭作作氧氧化化剂剂，将将还还原原型型维维生生素素C全全部部氧氧化化成
31、成脱脱氢氢型型维维生生素素C。然然后后与与2,4-二二硝硝基基苯苯肼肼作作用用，生生成成红红色色的的脎脎，根根据据脎脎在在硫硫酸酸溶溶液液中中的的含含量量与与维维生生素素C总量成正比，在总量成正比，在520nm波长下比色定量。波长下比色定量。2021/8/646注意事项l1.1.样品用样品用20g/L20g/L草酸草酸匀浆或研磨。匀浆或研磨。l2.2.活性炭置于活性炭置于1mol/L HCl1mol/L HCl中回流中回流1 12 2 h h，过滤，滤液用水洗至无铁离子，于，过滤，滤液用水洗至无铁离子，于110110度烘箱中烘干，备用。度烘箱中烘干，备用。l3.3.检出限为检出限为0.1ug/
32、mL0.1ug/mL2021/8/647l (1) (1)原理：原理：样品中还原型抗坏血酸经样品中还原型抗坏血酸经活性炭活性炭氧化为脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺反应氧化为脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺反应生成具有荧光的喹喔啉（生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline) ,quinoxaline) ,其其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比。下成正比。l 适用于蔬菜、水果及其制品中还原型和适用于蔬菜、水果及其制品中还原型和脱氢型抗坏血酸的测定。脱氢型抗坏血酸的测定。3.抗坏血酸的荧光分析法抗坏血酸的荧光分析法（GB/T5009.86-2003)2
33、021/8/648(2)样品处理：样品处理：l样品制备样品制备：取一定量样品，加偏磷酸：取一定量样品，加偏磷酸- -乙酸乙酸溶液，匀浆，用酸碱度（溶液，匀浆，用酸碱度（pH 1.2pH 1.2），过滤。），过滤。l氧化氧化：分别取滤液及标准液，加适量活性分别取滤液及标准液，加适量活性炭，振摇过滤，分别收集滤液炭，振摇过滤，分别收集滤液l除去干扰：除去干扰：各取试样氧化液和标准氧化液各取试样氧化液和标准氧化液作为空白，分别加入作为空白，分别加入硼酸硼酸- -乙酸钠乙酸钠溶液，放置溶液，放置在冰箱中，备用。在冰箱中，备用。l 再分别取试样氧化液和标准氧化液各一份，再分别取试样氧化液和标准氧化液各一
34、份，加入加入乙酸钠乙酸钠溶液溶液，备用。，备用。2021/8/649l邻苯二胺溶液在空气中颜色变暗，邻苯二胺溶液在空气中颜色变暗，影响显色，应临用前配制。影响显色，应临用前配制。l活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于基于其表面吸附的氧进行界面反应其表面吸附的氧进行界面反应，应加入适量，否则测定结果偏低。应加入适量，否则测定结果偏低。(3）方法说明）方法说明2021/8/650l 当食物中含当食物中含丙酮酸时丙酮酸时，可与邻苯，可与邻苯二胺反应生成一种荧光物质，干扰二胺反应生成一种荧光物质，干扰测定。测定。l 加入加入硼酸硼酸可与脱氢抗坏血酸结可与脱氢抗坏血酸结合而不
35、与合而不与邻苯二胺邻苯二胺反应，以此消除反应，以此消除样品中丙酮酸产生的荧光干扰。样品中丙酮酸产生的荧光干扰。2021/8/6514.维生素维生素C的高效液相色谱分析的高效液相色谱分析l(1)(1)原理：原理：样品用样品用0.5%0.5%草酸超声波提取，草酸超声波提取，以以0.010mol/L NH4Ac-HAc0.010mol/L NH4Ac-HAc缓冲溶液缓冲溶液(pH4.5)(pH4.5)作流动相，反相作流动相，反相C18C18液相色谱柱液相色谱柱分离，紫外检测器于分离，紫外检测器于262nm262nm波长下测定维波长下测定维生素生素C C的吸光度值。样液经的吸光度值。样液经0.45 m
36、0.45 m滤膜滤膜过滤后进行高效液相色谱分析。根据保过滤后进行高效液相色谱分析。根据保留时间定性，标准曲线法定量。留时间定性，标准曲线法定量。2021/8/652(2) (2) 样品处理样品处理饮料：取一定量饮料经饮料：取一定量饮料经0.450.45mm滤膜过滤后滤膜过滤后进样分析。进样分析。保健食品：称取一定量粉碎、混匀的样品，保健食品：称取一定量粉碎、混匀的样品，用用5 5g/Lg/L草酸溶液超声波提取草酸溶液超声波提取1515min,min,定容后经定容后经0.450.45mm滤膜抽滤后进样分析。滤膜抽滤后进样分析。蔬菜和水果样品：用蔬菜和水果样品：用5 5g/Lg/L草酸溶液匀浆，草
37、酸溶液匀浆，取部分上清液经取部分上清液经0.450.45mmmm滤膜抽滤后进样分析。滤膜抽滤后进样分析。2021/8/653(3) (3) 测测 定定色谱条件：色谱条件：C18C18柱（柱（4.62504.6250mmmm，5mm5mm）；）； 流动相为流动相为0.010.01mol/L NH4Ac-mol/L NH4Ac-HAcHAc（pH4.5pH4.5），）， 检测波长为检测波长为262262nmnm； 流速为流速为1.01.0ml/min; ml/min; 进样量为进样量为1010ll；2020 C C柱温。柱温。2021/8/6541 1维生素维生素C C极易被氧化，因而在操作过程极易被氧化，因而在操作过程中标准溶液的配制和样品的处理均用具有中标准溶液的配制和样品的处理均用具有还原性的草酸溶液，标准溶液和处理后的还原性的草酸溶液，标准溶液和处理后的样液应放冰箱保存，并尽快测定。样液应放冰箱保存，并尽快测定。2 2该方法在该方法在0.0500.0501000.01000.0g/mlg/ml浓度范围浓度范围内线性良好，检出限为内线性良好，检出限为5050ng/mlng/ml。2021/8/655部分资料从网络收集整理而来，供大家参考，感谢您的关注！
