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1、主讲：主讲：主讲：主讲： 窦窦窦窦 辉辉辉辉班别：高二（班别：高二（班别：高二（班别：高二（2222）班）班）班）班1番茄番茄-马铃薯马铃薯（理想图）（理想图）2有梦想，才会有创造！3人人鼠鼠（想像图）（想像图）如何实现人、如何实现人、动物之间动物之间细胞的融合细胞的融合呢？呢？4A细胞细胞B细胞细胞人工诱导人工诱导1.11.1动物动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指交）：是指两个或多个细胞两个或多个细胞融融合形成一个合形成一个单核细胞单核细胞的过程。的过程。5诱导方法诱导方法物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法
2、：灭活的病毒（特有的方法）灭活的病毒（特有的方法）原理：原理：（与植物细胞融合的基本原理相同）（与植物细胞融合的基本原理相同）离心、电激、振动离心、电激、振动聚乙二醇聚乙二醇(PEG)细胞膜的流动性细胞膜的流动性6灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）71.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程保留融合活性保留融合活性 为什么灭活的为什么灭活的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性81.31.3动物动
3、物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能成为可能成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段意义意义：应用：应用：制备单克隆抗体（最主要的应用）制备单克隆抗体（最主要的应用）9从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物产量产量低低纯度纯度低低特异性特异性差差灵敏度灵敏度低低1019751975年的实验室年的实验室一个美丽的发现 每个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体怎样大量获得单一
4、抗体进行无性繁殖（克隆）进行无性繁殖（克隆）进行无性繁殖（克隆）进行无性繁殖（克隆） 体外体外体外体外培养的细胞培养的细胞培养的细胞培养的细胞不能无限增不能无限增不能无限增不能无限增殖殖殖殖？癌细胞癌细胞但是但是 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞11一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体你的设想既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞1
5、2BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基择性培养基：只有只有杂交杂交瘤细胞瘤细胞才才能存活能存活（二选）：选（二选）：选能产生所需能产生所需专专一抗体的一抗体的杂杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养目的：目的： 获得产获得产生相应抗体的生相应抗体的B B细胞细胞132.2单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异性强特异性强灵敏度高灵敏度高并能大量制备并能大
6、量制备14“生物导弹生物导弹” 单克隆抗体药物单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成癌药物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。准确杀伤癌变细胞。1516两个过程两个过程动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强
7、、灵敏度高的优势17【例例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ） A.离心离心 B.灭活的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ) A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁 BA18【例例3 3】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体
8、，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞A19【例例4】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（ ）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
9、C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B2015、右图为某同学根据杂交瘤技术、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗）该方案能达到预期效果吗？。原因是。原因是_。（2）图中）图中为为 过程，过程，常用常用 作为诱导剂。该细作为诱导剂
10、。该细胞继承了胞继承了_ ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌_，还有，还有 本领。本领。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的产生专一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞 细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 大量增殖大量增殖制备单克隆抗体制备单克隆抗体（3）该方案的目的是）该方案的目的是_。21比较项目比较项目细胞融合细胞融合的原理的原理细胞融合细胞融合的方法的方法诱导手段诱导手段用途用途植物体植物体细胞杂交细胞杂交动物细动物细胞融合胞融合课后作业：课后作业：比较动、植物细胞杂交技术比较动、植物细胞杂交技术2223单克隆抗体单克隆抗体: 单个单个B细胞克隆产生的细胞克隆产生的化学性质化学性质单一单一、特异性强特异性强的抗体的抗体24 刚才的发言，如刚才的发言，如有不当之处请多指有不当之处请多指正。谢谢大家！正。谢谢大家！25
