实验动物的微生物学分类

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1、第三章第三章 实验动物的微生物学实验动物的微生物学和寄生虫学控制和寄生虫学控制第一节第一节 实验动物的微生物学分类法实验动物的微生物学分类法第二节第二节 实验动物常见的传染性疾病实验动物常见的传染性疾病第三节第三节 实验动物微生物学质量检测实验动物微生物学质量检测第一节第一节 实验动物按微生物学控制的分类实验动物按微生物学控制的分类 按对微生物学质量的控制，可将实验动按对微生物学质量的控制，可将实验动物分为四类：物分为四类：无菌动物无菌动物(Germfree animal, GF)(Germfree animal, GF)和悉生动和悉生动物物(Gnotobiotic animal, GN)(G

2、notobiotic animal, GN)无特定病原体动物无特定病原体动物(Specific pathogen (Specific pathogen free animal, SPF)free animal, SPF)清洁动物清洁动物(Clean animal, CL)(Clean animal, CL)普通动物普通动物(Conventional animal, CV)(Conventional animal, CV)1.1.无菌动物（无菌动物（Germfree animalGermfree animal，简称简称GFGF）2.2.定义：定义：指用现有的实验手段检测，动物的体指用现有的实验手

3、段检测，动物的体表体内不携带其它生命体（包括一切微生物表体内不携带其它生命体（包括一切微生物和寄生虫）的实验动物。和寄生虫）的实验动物。3.3.饲养条件：饲养条件：无菌隔离器内无菌隔离器内4.4.来源：来源：第一代通过无菌剖第一代通过无菌剖5.5.腹产术，人工哺乳获得；腹产术，人工哺乳获得；6.6.以后通过无菌动物雌雄交以后通过无菌动物雌雄交7.7.配繁殖或无菌剖腹产术，配繁殖或无菌剖腹产术，8.8.奶妈代奶扩群。奶妈代奶扩群。2. 2. 悉生动物（悉生动物（Gnotobiotic animalGnotobiotic animal，简称，简称GNGN）定义：定义：又称已知菌动物，指动物体内带有

4、明确的又称已知菌动物，指动物体内带有明确的微生物种类的动物。微生物种类的动物。饲养条件：饲养条件：无菌隔离器内无菌隔离器内来源：来源：人为将已知的微生物投给无菌动物，使其人为将已知的微生物投给无菌动物，使其体内带有已知菌体内带有已知菌 单菌动物单菌动物 双菌动物双菌动物 多菌动物多菌动物3. 3. 无特定病原体动物（无特定病原体动物（Specific pathogen free Specific pathogen free animalanimal，简称，简称SPFSPF动物动物) )定义：定义：指不携带特定病原体（细菌、病毒、寄生虫），指不携带特定病原体（细菌、病毒、寄生虫），但带有未知的微

5、生物群的动物。但带有未知的微生物群的动物。饲养条件：饲养条件：屏障系统内屏障系统内大规模生产大规模生产/ /隔离器内隔离器内保种保种最初来源：最初来源：将无菌动物将无菌动物/ /悉生动物转移到屏障系统悉生动物转移到屏障系统中饲养繁殖中饲养繁殖应用：应用：SPFSPF大小鼠为国际大小鼠为国际通行的科研用动物通行的科研用动物4. 4. 清洁动物（清洁动物（Clean animalClean animal，简称，简称CLCL动物）动物）定义：定义：微生物控制级别介于微生物控制级别介于SPFSPF动物和普通动物和普通动物之间的动物动物之间的动物饲养条件：饲养条件：屏障系统大规模生产屏障系统大规模生产来

6、源：来源：SPFSPF动物扩群动物扩群应用：应用：各种科研、教学用大小鼠各种科研、教学用大小鼠5. 5. 普通动物（普通动物（Conventional animalConventional animal，简称，简称CVCV动动物）物）定义：定义：不带有严重危害动物自身健康和人兽共患不带有严重危害动物自身健康和人兽共患病病原体的动物。病病原体的动物。饲养条件：饲养条件：普通开放环境普通开放环境来源：来源：经微生物学检查不带有上述病原体的动物，经微生物学检查不带有上述病原体的动物，或或SPFSPF动物降级。动物降级。应用：应用：豚鼠、兔、犬、猴等大动物的实验研究。豚鼠、兔、犬、猴等大动物的实验研究

7、。不同微生物级别动物用于实验的比较不同微生物级别动物用于实验的比较项目项目GF/GNGF/GN动物动物SPFSPF动物动物CVCV动物动物传染病传染病无无无无有或可能有有或可能有寄生虫寄生虫无无无无有或可能有有或可能有实验结果实验结果准确准确准确准确有疑问有疑问应用动物数应用动物数少少少少多多统计学价值统计学价值好好可能好可能好不准确不准确长期实验长期实验可能好可能好可能好可能好困难困难实验中死亡率实验中死亡率很低很低低低高高长期实验存活率长期实验存活率约约100%100%约约90%90%约约40%40%实验的正确设计实验的正确设计可能可能可能可能不可能不可能实验结果的统计价值实验结果的统计价

8、值很高很高高高有疑问有疑问不同微生物等级动物饲养特点的比较不同微生物等级动物饲养特点的比较微生物级微生物级别别饲养环境饲养环境空气处理空气处理人与动物人与动物关系关系饲养人员饲养人员素质素质饲养费用饲养费用GFGF无菌隔离无菌隔离器器超高效过超高效过滤滤间接接触间接接触专门训练专门训练高高GNGN无菌隔离无菌隔离器器超高效过超高效过滤滤间接接触间接接触专门训练专门训练高高SPFSPF屏障系统屏障系统高效过滤高效过滤直接接触直接接触专门训练专门训练较高较高CLCL半屏障系半屏障系统统亚高效过亚高效过滤滤直接接触直接接触一般一般较低较低CVCV开放系统开放系统不处理不处理直接接触直接接触一般一般低

9、低目前我国实验动物国家标准中已经取消目前我国实验动物国家标准中已经取消普通级大小鼠，这意味着科研教学用的普通级大小鼠，这意味着科研教学用的大小鼠必须使用清洁级或大小鼠必须使用清洁级或SPFSPF级。级。豚鼠豚鼠/ /兔只有普通级，清洁级豚鼠兔只有普通级，清洁级豚鼠/ /兔大兔大规模生产正在研究中。规模生产正在研究中。犬只有普通级。犬只有普通级。第二节第二节 实验动物常见的传染性疾病实验动物常见的传染性疾病一、传染性疾病对实验动物生产和动物实验一、传染性疾病对实验动物生产和动物实验研究的影响研究的影响1.引起动物死亡和质量下降（鼠痘、仙台病引起动物死亡和质量下降（鼠痘、仙台病毒感染、兔瘟、犬出血

10、性肠炎等）。毒感染、兔瘟、犬出血性肠炎等）。2.人兽共患病（淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒人兽共患病（淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒感染、流行性出血热、感染、流行性出血热、B病毒感染。病毒感染。3.3. 干扰实验结果，影响科研的准确性和干扰实验结果，影响科研的准确性和可靠性。可靠性。二、传染病的概念二、传染病的概念病原微生物循着一定的途径侵入动物体病原微生物循着一定的途径侵入动物体内，在机体内生长繁殖，破坏了动物的内，在机体内生长繁殖，破坏了动物的正常生理功能而引起发病，并能把病原正常生理功能而引起发病，并能把病原体传染给其他同类健康动物，引起疾病体传染给其他同类健康动物，引起疾病流行。流行。三、传染病的

11、防疫原则及措施三、传染病的防疫原则及措施传染病发生的条件：传染病发生的条件： 传染源、传播途径和易感动物。传染源、传播途径和易感动物。预防和控制措施预防和控制措施1.1.预防措施预防措施2.2.1 1）从有资质的实验动物供应商处采购动物）从有资质的实验动物供应商处采购动物3.3.2 2）制定科学的饲养管理和操作规程）制定科学的饲养管理和操作规程, ,严格按严格按操作规程进行饲养管理和动物实验操作规程进行饲养管理和动物实验4.4.3 3）定期进行微生物学监测）定期进行微生物学监测5.5.4 4）彻底消灭饲养室内外的野鼠）彻底消灭饲养室内外的野鼠6.6.5 5）大动物接种疫苗）大动物接种疫苗7.7

12、.2. 2. 控制措施控制措施8.8.1 1）重要传染病感染要及时捕杀、消毒、隔离）重要传染病感染要及时捕杀、消毒、隔离9.9.2 2）大动物隔离治疗）大动物隔离治疗10.10.3 3）不明死亡原因要剖检明确诊断）不明死亡原因要剖检明确诊断物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法1.1.煮沸或流通蒸汽消毒灭菌煮沸或流通蒸汽消毒灭菌 用于饮水瓶、衣帽、口罩、金属器械、用于饮水瓶、衣帽、口罩、金属器械、饮水等。一般不用于饲料消毒。饮水等。一般不用于饲料消毒。2.2.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 用于大多数耐热物品：垫料、笼具、饮用于大多数耐热物品：垫料、笼具、饮水等。水等。3.3.钴钴6060辐照辐照 用于饲料等

13、。用于饲料等。四、常用的消毒灭菌方法四、常用的消毒灭菌方法1. 1. 鼠痘（鼠痘（Mouse pox, Infectious ectromeliaMouse pox, Infectious ectromelia）病原学：病原学：鼠痘病毒（鼠痘病毒（Poxviridae, mouse poxvirusPoxviridae, mouse poxvirus）流行病学：流行病学： 传染源：病鼠，野生小鼠很少发生传染源：病鼠，野生小鼠很少发生 传播途径：接触传播、消化道传播传播途径：接触传播、消化道传播 易感动物：小鼠（某些品系易感，某些品系抵抗）易感动物：小鼠（某些品系易感，某些品系抵抗）临床症状：临

14、床症状：痘斑、脱脚、断尾痘斑、脱脚、断尾诊断：诊断：流行病学，临床症状，病毒分离，实验室检查流行病学，临床症状，病毒分离，实验室检查预防和控制：预防和控制： 预防：严格执行规章制度，不从无生产许可证单位购预防：严格执行规章制度，不从无生产许可证单位购买动物。买动物。 控制：捕杀病鼠，消毒饲养室控制：捕杀病鼠，消毒饲养室实验动物常见传染病疾病实验动物常见传染病疾病1. 1. 病毒性疾病病毒性疾病2. 2. 狂犬病（狂犬病（RabiesRabies）病原学：病原学：狂犬病毒（狂犬病毒（RhabodovirusRhabodovirus）流行病学：流行病学： 传染源：病犬、猫、猪等家畜，野生动物传染源

15、：病犬、猫、猪等家畜，野生动物 传播途径：咬伤，少数接触传播传播途径：咬伤，少数接触传播 易感动物：犬科、猫科动物，人易感动物：犬科、猫科动物，人临床症状：临床症状：高度兴奋，攻击人兽，转而麻痹。高度兴奋，攻击人兽，转而麻痹。诊断：诊断：临床症状观察：临床症状观察：10-1410-14天后病犬死亡天后病犬死亡 病毒分离：脑组织和唾液腺病毒分离：脑组织和唾液腺 实验室检查：脑组织海马回和小脑有病毒包涵体（内基氏实验室检查：脑组织海马回和小脑有病毒包涵体（内基氏小体）小体）预防和控制：预防和控制： 预防：不收购来源不清的野犬。人被咬伤后必须注射狂犬疫苗。预防：不收购来源不清的野犬。人被咬伤后必须注

16、射狂犬疫苗。 控制：捕杀病犬、野犬，焚烧或深埋。控制：捕杀病犬、野犬，焚烧或深埋。1. 1. 病毒性疾病病毒性疾病3. 3. 流行性出血热病毒感染（流行性出血热病毒感染（Epidemic hemorrhagic fever virus Epidemic hemorrhagic fever virus infectioninfection）病原学：病原学：流行性出血热病毒（流行性出血热病毒（Bunyaviridae, Hantavirus)Bunyaviridae, Hantavirus)流行病学：流行病学： 传染源：带毒野鼠和实验大鼠传染源：带毒野鼠和实验大鼠 传播途径：咬伤接触传播，气溶胶吸

17、入传播途径：咬伤接触传播，气溶胶吸入 易感动物：大鼠易感动物：大鼠临床症状：临床症状：无症状，人感染后得流行性出血热无症状，人感染后得流行性出血热诊断：诊断：血清学检查，病毒分离血清学检查，病毒分离预防和控制：预防和控制： 预防：饲养区内外捕杀野鼠，不从无生产许可证单位购买动物。预防：饲养区内外捕杀野鼠，不从无生产许可证单位购买动物。 控制：捕杀血清学检查阳性大鼠，消毒、隔离控制：捕杀血清学检查阳性大鼠，消毒、隔离1. 1. 病毒性疾病病毒性疾病4. 4. 仙台病毒感染（仙台病毒感染（Sendai virus infectionSendai virus infection）病原学：病原学：仙台

18、病毒（仙台病毒（Paramyxoviridae, Paramyxoviridae, Sendai virusSendai virus）流行病学：流行病学： 传染源：病鼠传染源：病鼠 传播途径：呼吸道传播途径：呼吸道 易感动物：所有实验动物易感动物：所有实验动物临床症状：临床症状：肺炎肺炎诊断诊断: :流行病学，临床症状、实验室检查流行病学，临床症状、实验室检查预防和控制：预防和控制：1. 1. 病毒性疾病病毒性疾病仙台病毒感染肺病变仙台病毒感染肺病变5.5.犬细小病毒感染犬细小病毒感染病原学：病原学：犬细小病毒，细小病毒科犬细小病毒，细小病毒科流行病学：流行病学： 传染源：病犬传染源：病犬 传

19、播途径：消化道，接触传播传播途径：消化道，接触传播 易感动物：易感动物：2-82-8周龄幼犬周龄幼犬 类型：肠炎型和心肌炎型类型：肠炎型和心肌炎型临床症状：临床症状：肠炎型：出血性坏死，抑郁，厌食，呕吐，肠炎型：出血性坏死，抑郁，厌食，呕吐，腹泻腹泻 心肌炎型：急性非化脓性心肌炎心肌炎型：急性非化脓性心肌炎诊断诊断: :流行病学，剖解、血清学检查流行病学，剖解、血清学检查预防和控制：预防和控制：1. 1. 病毒性疾病病毒性疾病6. 6. 鼠肝炎（鼠肝炎（Mouse hepatitisMouse hepatitis）病原学：病原学：鼠肝炎病毒（鼠肝炎病毒（Coronaviridae, Mouse

20、 Coronaviridae, Mouse hepatitis virushepatitis virus）流行病学：流行病学： 传染源：隐性感染鼠、病鼠传染源：隐性感染鼠、病鼠 传播途径：消化道，接触传播传播途径：消化道，接触传播 易感动物：小鼠易感动物：小鼠临床症状：临床症状：乳鼠死亡，裸鼠乳鼠死亡，裸鼠“waste “waste syndrome”syndrome”诊断诊断: :流行病学、剖解肝脏坏死，血清学检查流行病学、剖解肝脏坏死，血清学检查预防和控制：预防和控制：1. 1. 病毒性疾病病毒性疾病感染鼠肝炎的裸鼠感染鼠肝炎的裸鼠waste syndromewaste syndrome裸

21、鼠的肝脏病变裸鼠的肝脏病变2. 2. 细菌性疾病细菌性疾病1. 1. 沙门氏菌病（沙门氏菌病（SalmonellaSalmonella）病原学：病原学：沙门氏菌沙门氏菌流行病学：流行病学： 传染源：患病动物和无症状带菌动物传染源：患病动物和无症状带菌动物 传播途径：消化道传播途径：消化道 易感动物：啮齿类、兔易感动物：啮齿类、兔临床症状：临床症状：突然死亡，腹泻突然死亡，腹泻诊断：诊断：临床症状，病原菌分离临床症状，病原菌分离预防和控制：预防和控制：豚鼠的脾脏病变豚鼠的脾脏病变小鼠肝脏病变小鼠肝脏病变2. 2. 细菌性疾病细菌性疾病2. 2. 细菌性肺炎细菌性肺炎病原学：病原学：肺炎双球菌肺炎

22、双球菌 、克雷伯肺炎杆菌、鼠丹、克雷伯肺炎杆菌、鼠丹毒杆菌等毒杆菌等流行病学：流行病学： 传染源：患病和隐性感染动物传染源：患病和隐性感染动物 传播途径：呼吸道传播途径：呼吸道 易感动物：所有实验动物易感动物：所有实验动物临床症状：临床症状：呼吸困难呼吸困难诊断：诊断：分离培养，血清学检查分离培养，血清学检查预防和控制：预防和控制： 加强管理，保持室温，防止昼夜温差过大。加强管理，保持室温，防止昼夜温差过大。3. 3. 寄生虫病寄生虫病弓形体病（弓形体病（Toxoplasma infectionToxoplasma infection）病原学：病原学：弓形体弓形体生活史：生活史： 有性繁殖：有

23、性繁殖：终末宿主猫终末宿主猫 包囊内滋养体包囊内滋养体 裂殖体裂殖体 配子体配子体 配子配子 卵囊卵囊 成熟卵囊成熟卵囊 无性繁殖：无性繁殖：中间宿主、终末宿主中间宿主、终末宿主 滋养体滋养体 滋养体滋养体滋养体滋养体裂殖体裂殖体配子体配子体囊合子囊合子小肠绒毛上皮细胞小肠绒毛上皮细胞囊合子囊合子囊合子囊合子囊合子囊合子滋养体滋养体滋养体滋养体各种组织细胞各种组织细胞有性繁殖：有性繁殖：终末宿主猫终末宿主猫无性繁殖：无性繁殖：终末宿主、中间宿主终末宿主、中间宿主流行病学：流行病学： 传染源：患病动物传染源：患病动物 传播途径：消化道传播途径：消化道 易感动物：各种实验动物易感动物：各种实验动物

24、临床症状：临床症状：诊断：诊断：血清学检查血清学检查预防和控制：预防和控制：捕杀患病动物，消毒捕杀患病动物，消毒第三节第三节 实验动物的微生物学质量检测实验动物的微生物学质量检测一、微生物学监测的意义一、微生物学监测的意义 所谓微生物监测是指用微生物学的方所谓微生物监测是指用微生物学的方法对不同等级的实验动物进行定期的抽法对不同等级的实验动物进行定期的抽样检查，以确认该等级动物是否感染了样检查，以确认该等级动物是否感染了某些病原体。因此，微生物学监测是一某些病原体。因此，微生物学监测是一个群体的、流行病学上的概念，它是通个群体的、流行病学上的概念，它是通过从一个群体中定期抽取少量样本进行过从一

25、个群体中定期抽取少量样本进行检测，从而判断整个群体中某一疾病流检测，从而判断整个群体中某一疾病流行情况的一种方法。行情况的一种方法。二、取样原则、样本数量、检查频度和方法二、取样原则、样本数量、检查频度和方法1.1.取样原则取样原则 随机抽样随机抽样 哨兵动物：为确保长期试验室实验结果哨兵动物：为确保长期试验室实验结果的可靠性，定期处死采血检查以监视鼠的可靠性，定期处死采血检查以监视鼠群中某些疾病的流行，为微生物检测所群中某些疾病的流行，为微生物检测所设置的指示动物。设置的指示动物。2.2.样本数量样本数量 动物疾病病原体的传染和寄生虫的感染动物疾病病原体的传染和寄生虫的感染率与动物的敏感性有

26、关。率与动物的敏感性有关。 样本数越大，可靠性就越高。样本数越大，可靠性就越高。3.3.检查频度检查频度 病原感染：潜伏期、显性感染期、恢复病原感染：潜伏期、显性感染期、恢复期。期。 按照抗体的生成变化，按照抗体的生成变化，2-32-3个月一次定期个月一次定期监测较为合适。监测较为合适。三、微生物检测的方法三、微生物检测的方法细菌学检测细菌学检测 取样取样-细菌分离细菌分离-可疑菌落生化鉴定可疑菌落生化鉴定-血清学反应血清学反应病毒学检测病毒学检测1 1）血清学检测病毒抗体）血清学检测病毒抗体2 2）分离病毒）分离病毒寄生虫检测寄生虫检测 镜检寻找虫卵或成虫镜检寻找虫卵或成虫复习题复习题名词解释：名词解释： 无菌动物，悉生动物，无菌动物，悉生动物，SPFSPF动物，清洁动物，动物，清洁动物，普通动物，鼠痘，狂犬病，流行性出血热普通动物，鼠痘，狂犬病，流行性出血热思考题：思考题：1 1）一般动物实验是否用无菌动物）一般动物实验是否用无菌动物/ /悉生动物做实悉生动物做实验，其结果比用验，其结果比用SPFSPF动物要好？动物要好？2 2）试述传染性疾病对实验动物生产和使用的危）试述传染性疾病对实验动物生产和使用的危害。害。3 3）列举出实验动物中的人畜共患性疾病。）列举出实验动物中的人畜共患性疾病。