《细胞与遗传实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞与遗传实验（42页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细胞与遗传实验细胞与遗传实验夏蓓莉夏蓓莉/ /杨玲杨玲 实验室要求实验室要求点名签到穿白大衣损坏公物要赔偿保持实验室整洁干净、每次实验毕安排值日生细胞与遗传实验课程要求细胞与遗传实验课程要求每班根据实验需要分组，以组的形式完成细胞与遗传系统性实验每次实验后，每人写实验报告1份（提交）系统性实验结束后，每人写实验小结细胞、遗传各1份（提交）当逢课外加时，望能安排时间并请谅解认真参与实验（思考、总结、提问和建议） 实验（一）细胞损伤与保护实验（一）细胞损伤与保护1活细胞观察细胞传代培养细胞计数细胞培养细胞培养 取活体动物组织，在体外，无菌条件下，模拟体内环境（营养、温度、pH值、气体等），对其进行
2、培养，使细胞能够生存、生长、保持原来生物学特性的一种实验方法。 实验目的实验目的 通过对活细胞的培养 1、掌握细胞培养的基本操作及技术要领。为进一步试验，打好基础。 2、为后续实验，提供必需的试验材料。细胞培养内容细胞培养内容细胞原代培养细胞换液、细胞传代培养细胞形态观察、活率测定细胞计数细胞生长曲线、分裂指数细胞冻存与复苏等等实验室基本条件 无菌环境 仪器设备 普通器材 一般试剂 无菌环境 无菌室 无菌操作 无 菌 室 结 构 图backback 无菌操作 洗手 着装 近火焰操作 试剂瓶等斜放 back超 静 工 作 台二 氧 化 碳 培 养 箱液 氮 罐back 器 材back 试 剂ba
3、ck活细胞观察活细胞观察 体外培养的、生长中的细胞，借助显微镜来进行察看、比较、判断，以求对细胞做出进一步处理。器材器材倒置显微镜培养细胞株方方 法法肉眼观察显微镜下观察肉眼观察肉眼观察培养液清浊度培养液清浊度培养液颜色培养液颜色显微镜下观察显微镜下观察细胞的密度细胞的密度细胞的透明度细胞的透明度细胞的形状细胞的形状光学显微镜（10倍）下活细胞形态光学显微镜（10倍）下活细胞形态光学显微镜（40倍）下活细胞形态光学显微镜（10倍）下活细胞形态back细胞传代培养细胞传代培养 细胞在支持物表面长满后，进细胞在支持物表面长满后，进行重新分配，再培养的过程。行重新分配，再培养的过程。 器材与试剂：器
4、材与试剂： 超净工作台超净工作台 二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱 倒置显微镜倒置显微镜 细胞株（细胞株（CHL） 滴管、培养瓶、瓶塞等滴管、培养瓶、瓶塞等 培养液：培养液：DMEM （ 含10%小牛血清）小牛血清） 消化液消化液：0.25%胰蛋白酶液胰蛋白酶液操操 作作（无菌）（无菌） 细胞株细胞株弃原培养液弃原培养液加加 胰旦胰旦白酶液（消化细胞）白酶液（消化细胞）弃胰旦白酶液弃胰旦白酶液 定量定量加入培养液加入培养液1ml，冲打细胞成悬冲打细胞成悬液液取取1滴细胞悬液滴细胞悬液细胞计数细胞计数按需按需接种至新培养瓶（皿）接种至新培养瓶（皿） 补足新鲜培补足新鲜培养液养液37培养培养1-2mi
5、n细胞传代消化法示意图 显微镜下细胞消化前后示意图注注 意意 胰蛋白酶消化时间要严格掌握胰蛋白酶消化时间要严格掌握 ( 温度、温度、pH)back 细胞计数细胞计数 细胞的传代、冻存、生化研究及生长曲线制作等，都需对细胞进行计数。细胞的多少对实验结果会有影响。器器 材材细胞株血球计数板普通光学显微镜试试 剂剂0.25%胰蛋白酶液培养液操操 作作单层细胞单层细胞胰蛋白酶液消化细胞胰蛋白酶液消化细胞 定量（定量（1ml1ml）加入培养液加入培养液 轻轻吹打细胞（单细胞悬液）轻轻吹打细胞（单细胞悬液） 计数细胞计数细胞 计算公式计算公式 细胞数细胞数/毫升毫升 （大格细胞数（大格细胞数4 ） 100
6、00稀释倍数稀释倍数 1ml1000mm3细胞计数示意图注注 意意细胞悬液要充分打匀正确使用计数板悬液渗入计数室时，不易过多（溢出）、过少（气泡）数细胞有压线时，数左不数右、数上不数下正确使用显微镜（电源、亮度、倍数、聚光器等） 小小 结结 活细胞观察（培养细胞瓶、皿或板 放在倒置显微镜载物台上） 进入无菌室进入无菌室细胞传代培养（1传2）取取1滴（或数滴）细胞悬液滴（或数滴）细胞悬液 显微镜下显微镜下细胞计数 告告 知知实验实验（二）细胞活率测定（MTT）亚细胞结构分离及鉴定（离心）细胞超微结构检测（电镜）告知告知一、一、9 9月月1616日日- -实验前实验前2 2天天中午饭后中午饭后，细
7、胞传代接种：，细胞传代接种： 小盖片培养瓶小盖片培养瓶3 3瓶（瓶（1 1组）组） ， 9696孔板孔板9 9孔（孔（8 8组）组） ， 25ml25ml培养瓶培养瓶8 8瓶（瓶（ 4 4组）组） 二、二、9 9月月1717日日- -次日次日中午饭前中午饭前，细胞换液（，细胞换液（ 损伤）损伤） 1 1、3 3瓶含小盖片培养瓶（电镜）瓶含小盖片培养瓶（电镜） 2 2瓶正常、瓶正常、4 4瓶损伤瓶损伤 2 2、每组、每组9696孔板孔板9 9孔（活率）孔（活率） 3 3孔正常、孔正常、6 6孔损伤孔损伤三、三、9 9月月1717日日- -下午课后下午课后5 5点点，细胞换液，细胞换液（损伤恢复损伤恢复） 4 4瓶损伤小盖片中瓶损伤小盖片中2 2瓶、瓶、 6 6孔损伤中孔损伤中3 3孔孔四、下午四、下午1:301:30继续实验继续实验
