动物组织石蜡切片制作

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1、动物组织石蜡切片制作动物组织石蜡切片制作 实验目的实验目的制作实验动物的组织切片并染色，掌握动制作实验动物的组织切片并染色，掌握动物组织制片技术物组织制片技术 实验用品实验用品1 1动物的组织。动物的组织。2 2器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。3 3试剂：试剂：60%60%乙醇、乙醇、70%70%乙醇、乙醇、80%80%乙醇、乙醇、90%90%乙醇、乙醇、95%95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、中性树胶。中性树胶。方案一方案一:病理石蜡切片的制作病理石蜡切片的制作（一

2、）石蜡组织块制作（一）石蜡组织块制作1 1取材。取材。2 2固定。固定。3 3脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。4 4包埋包埋步步 骤骤操作项目操作项目小小 鼠鼠大大鼠鼠家家 兔兔（1 1）60%60%乙醇乙醇15min15min20min20min30min30min（2 2）70%70%乙醇乙醇15min15min20min20min30min30min（3 3）80%80%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（4 4）90%90%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（5 5）95%95%乙醇

3、乙醇20min20min30min30min40min40min（6 6）95%95%乙醇乙醇20min20min20min20min30min30min（7 7）无水乙醇无水乙醇20min20min30min30min40min40min（8 8）无水乙醇无水乙醇20min20min30min30min40min40min（9 9）二甲苯二甲苯5min5min8min8min10min10min（1010）二甲苯二甲苯3min3min5min5min5min5min（1111） 石蜡石蜡10min10min15min15min20min20min（1212） 石蜡石蜡20min20min25

4、min25min30min30min（1313） 石蜡石蜡30min30min30min30min40min40min注意事项注意事项一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相同，方向要一致，不同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相

5、同，方向要一致，不能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太大。大。皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组织与蜡

6、分离。织与蜡分离。遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入其他标本的管腔或空洞内。其他标本的管腔或空洞内。（二）石蜡切片制作（二）石蜡切片制作用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚度为一般度为一般46m46m。【切片前的准备切片前的准备】1 1、修切蜡块、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石切片前应先修块，即切去组织周围过多的石蜡，一般留下约蜡，一

7、般留下约2mm2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留得宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则影太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。定时间。2 2、切片用品准备、切片用品准备（1 1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一次性切片。次性切片。（2 2）载物片：载物片经清洁液、）载物片：载物片经清洁液、95%95%乙醇处理后备用。乙醇处理后备用。（3 3）展片仪：加入温水，接通电源，调整

8、温度。）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。（4 4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。【切片制作过程切片制作过程】以使用旋转式切片机石蜡切片为例：以使用旋转式切片机石蜡切片为例：1 1将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀至将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀至合适位置（刀刃与蜡块切面呈合适位置（刀刃与蜡块切面呈55夹角）旋转式切片机切取组织，是由下向上夹角）旋转式切片机切取组织，是由下向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分切，为得到完整的切片，防止组织

9、出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝上）。上）。2 2左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最大左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最大切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续旋切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续旋转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上端，转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上端，正面向上放入展片仪

10、水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整，一般正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整，一般水温为水温为4545左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对于展左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对于展片困难的切片经片困难的切片经30%30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内可的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内可使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少切片刀使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少切片刀与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。与组织块在切片过程

11、中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。3 3捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于载捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于载物片右侧物片右侧1/31/3与与2/32/3交界处为佳，并注意整齐美观。交界处为佳，并注意整齐美观。4 4烤箱烤箱6060左右烘烤切片左右烘烤切片30min30min，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片温，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片温度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。 方案二方案二石蜡切片的制作石蜡切片的制作1 16 6微米。制

12、作大批的或是连续的切片。长期保存。微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。一、切片前的准备：一、切片前的准备：1 1、恒温水浴锅首先预热至、恒温水浴锅首先预热至35354040。2 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。3 3载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片剂。剂。4 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20-3020-30为佳。为佳。5 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。方案二方案二石蜡切片的制作石蜡切片的制作

13、二、切片的步骤：1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，2、调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架3、根据需要调整切片厚度。4、修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再行切制。5、切下的切片带，用毛笔从刀口向上挑起，拉下切片带方案二方案二石蜡切片的制作石蜡切片的制作三、切片的注意事项三、切片的注意事项1 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、切片刀的好坏有关外。切片刀的好坏有关外。2 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动。生震动。3 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过、在摇动切片机时

14、，用力要求均匀一致，不宜过重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。4 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。 方案二方案二石蜡切片的制作石蜡切片的制作四、贴片：四、贴片：1 1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。轻拉展以切片无皱褶为最好。2 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，

15、将载玻片、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起，垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起，拨正切片位置。拨正切片位置。3 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要写得小而清楚、端正。写得小而清楚、端正。4 4、贴好的切片置于、贴好的切片置于6060恒温箱内干燥恒温箱内干燥2 2小时，蛋小时，蛋白质凝固后即可染色。白质凝固后即可染色。实验实验1 1 石蜡切片的制做技术石蜡切片的制做技术试剂与器材：甲醛，酒精，二甲苯，苏木精，伊试剂与器材：甲醛，酒精，二甲苯，苏木精，伊红，中性树胶，双面刀片，蜡板，镊子，滤纸

16、，红，中性树胶，双面刀片，蜡板，镊子，滤纸，200ml200ml容量瓶（广口）、玻璃标本缸，载玻片，盖容量瓶（广口）、玻璃标本缸，载玻片，盖玻片，染色缸，毛笔，新鲜鸡蛋，甘油玻片，染色缸，毛笔，新鲜鸡蛋，甘油空闲时间：参观冰冻切片的制做空闲时间：参观冰冻切片的制做石蜡切片的制做程序（详细过程请查看讲义）石蜡切片的制做程序（详细过程请查看讲义）组织取材组织取材2 2毫米厚度，固定于福尔马林毫米厚度，固定于福尔马林2 2小时。小时。组织流水冲洗组织流水冲洗1 12 2小时。小时。实验实验1 1 石蜡切片的制做技术石蜡切片的制做技术7070酒精酒精2 24 4小时。小时。8585酒精酒精2 24 4

17、小时。小时。9595酒精（酒精（）2 23 3小时。小时。9595酒精（酒精（）1 12 2小时。小时。100100酒精（酒精（）1 12 2小时。小时。100100酒精（酒精（）1 1小时。小时。100100酒精：二甲苯（酒精：二甲苯（1 1：1 1）1 1小时。小时。二甲苯（二甲苯（）20203030分钟。分钟。二甲苯（二甲苯（）10102020分钟。分钟。浸蜡（浸蜡（）4040分钟。分钟。浸蜡（浸蜡（）4040分钟。分钟。组织包埋。组织包埋。蜡块整修。切片。贴好的切片置于蜡块整修。切片。贴好的切片置于6060恒温箱内恒温箱内干燥干燥2 2小时。小时。实验实验2 HE2 HE染色技术染色技

18、术二甲苯二甲苯脱蜡脱蜡 1010分钟。分钟。二甲苯二甲苯脱蜡脱蜡 1010分钟。分钟。100100酒精酒精225 5分钟。分钟。100100酒精酒精225 5分钟。分钟。9595酒精酒精1 12 2分钟。分钟。9090酒精酒精1 12 2分钟。分钟。8585酒精酒精1 12 2分钟。分钟。自来水洗自来水洗 片刻片刻蒸馏水蒸馏水 片刻片刻苏木素苏木素 10101515分钟分钟自来水洗自来水洗 1 12 2分钟分钟1%1%盐酸酒精分化盐酸酒精分化 1 1分钟分钟流水冲洗流水冲洗 蓝化蓝化1010分钟分钟至数小时至数小时实验实验2 HE2 HE染色技术染色技术蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗 1 12 2分钟。分钟。7070酒精酒精1 12 2分钟。分钟。8585酒精酒精1 12 2分钟。分钟。9090酒精酒精1 12 2分钟。分钟。伊红（醇溶）伊红（醇溶）5-205-20秒秒9595酒精（酒精（）1 1秒秒9595酒精（酒精（）1 1秒秒100100酒精（酒精（）1 12 2分钟。分钟。100100酒精（酒精（）3 35 5分钟。分钟。二甲苯（二甲苯（）5-105-10分钟。分钟。二甲苯（二甲苯（）5-105-10分钟。分钟。中性树胶封片。中性树胶封片。