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1、实验十 临床模拟标本的细菌学检测病原菌的检查程序病原菌的检查程序药物敏感试验直接涂片镜检分离培养生化试验血清学试验动物试验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断分子生物学技术其他检测技术常用染色方法 v革兰染色v抗酸染色 革兰染色 v试剂：结晶紫染液（初染晶紫染液（初染剂）；）；卢戈氏碘液（媒染戈氏碘液（媒染剂）；）；95%乙醇溶液（脱色液）；乙醇溶液（脱色液）；稀稀释石炭酸复石炭酸复红液（复染液）液（复染液）v染色步染色步骤：初染：初染媒染媒染脱色脱色复染复染v染色染色结果：革果：革兰阳性菌呈紫色或紫阳性菌呈紫色或紫红色；色；革革兰阴性菌呈阴性菌呈红色色 抗酸染色抗酸染色 v试剂： 石炭酸复石炭酸
2、复红；3%盐酸酒精；酸酒精；碱性美碱性美蓝v染色步染色步骤：初染：初染脱色脱色复染复染v染色染色结果：抗酸杆菌呈果：抗酸杆菌呈红色；色；非抗酸杆菌呈非抗酸杆菌呈蓝色色 常用培养基v增菌：血平板、巧克力平板、碱性胨水等v选择性：MAC、EMB、SS、HE等v鉴别：KIA、MIU等 菌落形态观察v形态特征： 大小、形状 表面、边缘 颜色、透明度 粘度v溶血现象：溶血、溶血、溶血v色素：脂溶性、水溶性v气味 纯菌落菌落 涂片染色，涂片染色，结合菌落形合菌落形态革革兰阴性杆菌阴性杆菌革革兰阳性球菌阳性球菌 氧化氧化酶 触触酶 - + + -肠杆菌科杆菌科非非发酵菌酵菌葡萄球菌属葡萄球菌属链球菌属球菌属
3、 常用生化试验v碳水化合物的代谢试验v蛋白质和氨基酸的代谢试验v碳源和氮源利用试验v各种酶类试验v抑菌试验 碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验v糖（醇、苷）类发酵试验：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应；若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象；肠杆菌科尤为重要v氧化-发酵试验（O/F）：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型vONPG（半乳糖苷酶试验）：主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定，迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的细菌为阴性。v七叶苷水解试验：D群链球菌为阳性v甲基红试验：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸杆菌等为
4、阳性；v V-P试验： 肠杆菌属阳性v葡萄糖酸盐试验：用于肠杆菌科分类 蛋白质和氨基酸的代谢试验1.明胶液化试验：多数假单胞菌能液化明胶，肠杆菌科细菌如沙雷菌、变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶2.吲哚（叮基质）试验:肠杆菌科细菌的鉴定；大肠杆菌阳性3.硫化氢试验:沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属阳性4.尿素分解试验：变形杆菌、摩根氏、雷氏普罗维登氏、克雷伯氏为阳性5.苯丙氨酸脱氨酶（TDA）试验：肠杆菌科变形杆菌、普罗维登氏菌、摩根氏菌阳性6.氨基酸脱羧酶试验：肠杆菌科细菌的鉴定 碳源和氮源利用试验1.枸橼酸盐利用试验： 克雷伯菌属、沙门菌属常为阳性2.丙二酸盐利用试验: 肠杆菌科属间鉴别各种
5、酶类试验1.氧化酶试验：肠杆菌科细菌与假单胞菌的区别，前者阴性，后者多阳性；奈瑟菌属、莫拉菌属也为阳性2.触酶试验：用于革兰氏阳性球菌的鉴别，葡萄球菌和微球菌为阳性，链球菌和肠球菌为阴性，肠球菌多假阳性3.硝酸盐还原试验：肠杆菌科为阳性；铜绿、嗜麦芽能产生氮气；链球菌肠球菌阴性，葡萄球菌阳性4. DNA酶试验：金黄色葡萄球菌、变形杆菌阳性5.凝固酶试验：致病性葡萄球菌；金黄色葡萄球菌多阳性6. CAMP试验：B群链球菌阳性7.胆汁溶菌酶试验：肺炎链球菌阳性8.脂酶、卵磷脂酶试验：主要用于厌氧菌的鉴定;产气夹膜梭菌卵磷脂酶阳性抑菌试验1.O/129试验：弧菌、邻单胞菌敏感；气单胞菌属耐药2.杆菌肽试验：A群链球菌敏感3.奥普托欣Optochin试验：肺炎链球菌对Optochin敏感4.新生霉素敏感试验：区别表皮葡萄球菌与腐生葡萄球菌氢氧化钾拉丝试验 主要用于革兰阴性菌与易脱色的革兰阳性菌的鉴别。 大多数革兰阴性菌于510s内出现阳性反应，有的则需3045s，假单胞菌、无色杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在10s内呈阳性，不动杆菌、莫拉菌反应较慢，大多数菌株在60s内出现阳性，而革兰阳性菌在60s以后仍为阴性。 今天的实验内容 1.临床模拟标本的鉴定（简单介绍，然后操作）
