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1、实验四微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定主要实验内容：主要实验内容：一一 显微镜下细菌细胞大小的测定显微镜下细菌细胞大小的测定二二 血球计数板测定微生物细胞的数量血球计数板测定微生物细胞的数量三三 （显微镜下直接计数）（显微镜下直接计数） 一一 显微镜下细菌细胞大小的测定显微镜下细菌细胞大小的测定1 实验目的实验目的2 实验原理实验原理3 实验材料实验材料4 实验方法步骤实验方法步骤55 实验报告实验报告1 实验目的实验目的 学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小 的方法的方法
2、 巩固显微镜油镜的使用方法巩固显微镜油镜的使用方法2 实验原理实验原理 测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测微尺进行。测微尺可分为目镜测微尺和镜测微尺进行。测微尺可分为目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺是特制的圆形玻片，台测微尺。目镜测微尺是特制的圆形玻片，中央有一刻度尺（中央有一刻度尺（100100等分），可放入目镜等分），可放入目镜镜筒内，用于测定细胞大小。镜台测微尺为镜筒内，用于测定细胞大小。镜台测微尺为一载玻片，上贴有圆形盖片，中央有总长度一载玻片，上贴有圆形盖片，中央有总长度为为1 1mm(100mm (10um) mm(100mm (10um) 。
3、目镜测微尺每小格目镜测微尺每小格大小随显微镜放大倍数不同而改变，使用目大小随显微镜放大倍数不同而改变，使用目镜测微尺进行测量之前必须用镜台测微尺标镜测微尺进行测量之前必须用镜台测微尺标定，以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每定，以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每小格所代表的长度，然后用标定好的目镜测小格所代表的长度，然后用标定好的目镜测微尺进行测量。微尺进行测量。 3 实验材料实验材料 枯草杆菌标本片枯草杆菌标本片4 实验方法步骤实验方法步骤（1）用镜台测微尺标定目镜测微尺。）用镜台测微尺标定目镜测微尺。（2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小。）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小。（1）用镜台测微尺标定目
4、镜测微尺。）用镜台测微尺标定目镜测微尺。 放放置置目目尺尺：取取出出目目镜镜，旋旋开开接接目目镜镜，将将目目尺尺放放在在目目镜镜镜镜筒筒的的中中间间隔隔板板上上（有有刻刻度度的的一一面面朝朝下下），旋旋上上接接目目镜镜，并并插插入入镜筒。镜筒。 放放置置台台尺尺：将将台台尺尺放放置置于于显显微微镜镜的的载载物物台台上上，使使刻刻度度面面朝朝上。上。 标标定定目目尺尺：先先用用低低倍倍镜镜观观察察，找找到到台台尺尺刻刻度度，转转动动目目镜镜使使目目尺尺与与台台尺尺的的刻刻度度轴轴线线相相平平行行，移移动动台台尺尺使使目目尺尺与与台台尺尺某某一一区区间间的的两两对对刻刻度度线线完完全全重重合合，然
5、然后后计计数数出出两两重重合合线线间间各各自自所所占格数，通过如下公式计算：占格数，通过如下公式计算：目尺每小格长度目尺每小格长度（um）=两对重合刻度线之间台尺所两对重合刻度线之间台尺所占格数占格数1010 两对重合刻度线之间目尺两对重合刻度线之间目尺所占格数所占格数 标定低倍镜目尺每小格所代表的实际长度标定低倍镜目尺每小格所代表的实际长度 （2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小取下台尺，将染色片放在载物台上，先用低倍镜取下台尺，将染色片放在载物台上，先用低倍镜观察，后换油镜观测，计量细菌观察，后换油镜观测，计量细菌长和宽长和宽所占小所占小格数，将测得格数乘以已标定
6、的目尺每小格长，格数，将测得格数乘以已标定的目尺每小格长，即得菌体实际大小。测定即得菌体实际大小。测定2020个菌体求出平均值。个菌体求出平均值。 5 实验报告实验报告 （1 1） 目镜测微尺标定结果记录目镜测微尺标定结果记录物物镜物物镜放大倍数放大倍数目目镜测微尺格数微尺格数镜台台测微尺格数微尺格数目目镜测微尺每格微尺每格代表代表长度（度（umum）低倍低倍镜油油镜1000.5um（2 2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录 菌体菌体编号号宽长菌体大小菌体大小（平均（平均值）宽 长（umum） 目尺目尺格数格数菌体菌体宽（um）平均平均值目尺格目尺格数数菌体菌
7、体长（um）平均平均值1234520.二二 血球计数板测定微生物细胞的数量血球计数板测定微生物细胞的数量1 实验目的实验目的2 实验原理实验原理3 实验材料实验材料4 实验方法步骤实验方法步骤5 实验报告实验报告1 实验目的实验目的 掌握血球计数板测定微生物细胞数量的掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。的方法。2 实验原理实验原理 利用血球计数板在显微镜下直利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液放入血球计数接计数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微
8、镜下计数，因为计数室容积在显微镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推算出菌一定，所以可根据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。悬液单位体积所含微生物的总数量。 血球计数板的结构血球计数板的结构 它是特制的厚载玻片，中央区域有四它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三个平台，中间平台较宽，条凹槽而形成三个平台，中间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两部分，每一部分它又被一短横槽分隔为两部分，每一部分均有一个方格网，每一方格网可分为九个均有一个方格网，每一方格网可分为九个大方格，中央大方格就是计数室。大方格大方格，中央大方格就是计数室。大方格分为分为1616个中方格，每个中方
9、格又可分为个中方格，每个中方格又可分为2525个小方格。每个大方格共含有个小方格。每个大方格共含有400400个小方个小方格。计数室大方格边长为格。计数室大方格边长为1 1mm，底面积为底面积为1 1mm2，mm,mm3。 计数方法计数方法 在在计计数数时时，用用含含1616个个中中方方格格的的计计数数板板，要要按按对对角角线线方方位位计计数数左左上上、左左下下、右右上上、右右下下等等四四个个中中方方格格（100100个个小小方方格格）所所含含有有的的菌菌数数；由由此此可可计计算算得得出出每每个个小小方方格格所所含含有有的的菌数的平均值，菌数的平均值，计数室每个小方格容积为：计数室每个小方格容
10、积为： 0.110 0.110-3-34004001 1410410-6-6( (ml)ml)计算公式：计算公式：每每mlml菌液含菌数菌液含菌数 = = N K d N K d (N (N：每个小方格含菌数平均值；每个小方格含菌数平均值； d d：菌液稀释倍数；菌液稀释倍数； K K= =4104106 6) ) 3 实验材料实验材料稀释稀释100倍的酵母菌菌悬液倍的酵母菌菌悬液即即 d=1004实验方法步骤实验方法步骤1 1 镜镜检检计计数数室室：对对计计数数室室进进行行镜镜检检，若若内内有污物，清洗后才能计数。有污物，清洗后才能计数。2 2 加加样样液液：先先在在血血球球计计数数板板两两
11、个个计计数数室室部部位位加加盖盖玻玻片片，再再用用无无菌菌玻玻棒棒或或滴滴管管沾沾取取待待测测菌菌悬悬液液稀稀释释液液（已已摇摇匀匀），从从盖盖玻玻片片边边缘缘滴滴加加，使使菌菌液液沿沿缝缝隙隙靠靠毛毛细细作作用用自自行行进进入入计计数数室内。静置室内。静置5 5minmin。3 3 显显微微镜镜计计数数：将将血血球球计计数数板板置置于于载载物物台台上上，先先用用低低倍倍镜镜观观察察，后后换换高高倍倍镜镜观观察察计计数数。位位于于格格线线上上菌菌体体只只计计上上边边线线和和左左边边线线上上的的，如如果果出出芽芽酵酵母母芽芽体体大大小小达达到到母母细细胞胞一一半半时时，可可计计作作两两个个菌菌体
12、体。选选择择五五个个视视野野，在在每每个个视视野野内内任任意意选选择择五五个个小小方方格格计计数数，求求出出每每个个小小方格菌体数量平均值。方格菌体数量平均值。 4 4 根据公式计算每根据公式计算每mlml菌液含菌数。菌液含菌数。 5 5 测测量量完完毕毕后后，取取下下盖盖玻玻片片用用水水冲冲洗洗血血球球计计数数板板（严严禁禁用用硬硬物物刷刷洗洗），晾晾干干，放放入入盒盒内保存。内保存。注意事项注意事项（1 1）取取待待测测稀稀释释菌菌悬悬液液向向血血球球计计数数板板加加样样前前，须将菌悬液充分摇匀。须将菌悬液充分摇匀。（2 2）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片（3 3）由由于于菌菌体体在在计计数数室室中中处处于于不不同同空空间间位位置置，须须在在不不同同焦焦距距下下才才能能观观察察到到，故故观观察察时时须须不不断断调调节微调，计数菌液中全部菌体，尽量避免遗漏。节微调，计数菌液中全部菌体，尽量避免遗漏。
