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1、中华稻蝗染色体C带核型特征分析一一 、目的与要求、目的与要求1、了解染色体常规核型和染色体C-带核型的概念。2 、掌握染色体C-带显色技术。二二 、原理、原理 染色体是遗传物质的载体，如果染色体发生变化了，生物的外在性状必然发生变化。染色体数目的变化比较容易察觉，但是染色体结构和组成成分的变化就比较难以发现。染色体显带技术使不可察觉的染色体结构和成分变化转变为可以定量表述的带型变化，染色体带型结构的研究大大推动了昆虫细胞分类学的研究和发展。 染色体分带技术：染色体经物理、化学因素处理后，再进行染色，使其呈现特定的深浅不同带纹（band）的方法。 染色体分带技术可分为两大类，一类是产生的染色带分
2、布在整个染色体和长度上，如Q、G和R带；另一类是局部性的显带，它只能使少数特定的带或结构染色，如C、T和N带等。其中C-带主要显示着丝粒附近的异染色质，故称为C-带。其他异染色质均可显示。染色体标本经一定浓度的酸（HCl）和碱Ba(OH)2处理后，在缓冲盐溶液（2SSC）中温育1小时，再以Giemsa染液染色即可显带1。 染色体C-带核型包括染色体C-带结构特征、C-带位置、染色强度，异染色质含量等。 而染色体常规核型是指有丝分裂中期染色体特征的总和，包括染色体的数目、大小和形态特征等方面。 作为细胞分类学指标，染色体C-带核型可以从不同层次上反映其生物类群间的分类关系。染色体C-带在同一属内
3、有一明显而恒定的C-带结构模式，往往构成“标志性C-带带纹”，由此可以进行属级分类单元的比较。例如，所研究过稻蝗属物种的L2染色体除都具有着丝粒C-带而外，每个具体物种还具有各自标志性的染色体C-带带纹，但不同物种间该染色体的标志性带纹位置多变，其中，中华稻蝗该染色体具有端带，小稻蝗该染色体具有近着丝粒居间带，山稻蝗该染色体具有亚中部居间带，而日本稻蝗该染色体兼具有亚端部居间带和端带。因此C-带核型分析可为蝗虫分类提供细胞学依据。三、实验用品三、实验用品 1、仪器 解剖镜、OLYMPUS 光学显微镜、冰箱、液氮罐、恒温水浴锅、离心机等。 2 、用具 载玻片、盖玻片、培养皿、解剖针、眼科镊子、剪
4、刀、微量进样器、以及药品配制和存放所需要的一系列玻璃器皿。 3 、供试药品 0.05%秋水仙素、低渗液（0.075M氯化钾）甲醇、冰醋酸、酒精（70%）卡宝品红染液、盐酸（0.2N）、氢氧化钡（5%）、柠檬酸钠、氯化钠（2SSC）、吉姆萨染液。四、实验方法四、实验方法1、预处理 将野外采集到的蝗虫雄性个体注射0.05%的秋水仙素溶液（3-8ul，视个体的大小而定），此步骤可提供较多的中期细胞分裂相。7小时后，将活的虫体腹部侧处（2-4节体腔内背板侧下方）剪一小口，用尖头镊子夹出精巢（保留虫体，以备鉴定），然后放入低渗液10分钟后，转入卡诺固定液（甲醇：冰醋酸=3：1），24小时之后再换固定液，
5、换至精巢发白为止。最后移至70%酒精中保存备用。若标本需长期保存，应放入4冰箱中。2、染色体制片（1）压片法 用镊子夹取精巢的精小管，置于载玻片上，在解剖镜下剔去表面的结缔组织，并切去末端膨大部分（约是精小管1/4-1/3处），此过程进行时应随时滴加固定液以防止蒸发干燥，将取好的3-5个精小管末端放到预先滴上1-2滴40%-60%的冰醋酸溶液的载玻片上，加盖片软化15分钟，然后施加压力，使细胞分散（在压片过程中应注意大拇指翘起垂直加压）。将压片置液氮罐中快速冷冻后，用刀片揭去盖玻片，在室温无尘处自然干燥（或放入恒温干燥箱），经老化3-8天后进行后续分带处理。对于常规核型观察，制片可直接用品红染
6、色后观察2, 3。（2）滴片法 从经预处理的雄性蝗虫体内取出精巢，经低渗处理，并置生理盐水中剔出脂肪等附着物，切取精小管端部，置于研钵中进行研磨。待研成匀浆后，倒入离心管中用500转/分的转速离心后去沉淀，或可用尼龙砂箔进行过滤，然后，以1000转/分离心10分钟，去上清，滴加固定液吹打均匀，再行离心1-2次使充分固定，最后加入适当固定液吹打均匀，取出冰箱内预冷的洁净载玻片，滴加细胞悬液1-2滴，过火焰干燥，或室温下自然干燥，老化2-3天后，进行后续分带处理。新鲜材料可采用此法。（3）涂片法 将精小管末端部置于预冷洁净的载玻片上，滴加一滴固定液后，迅速用尖头镊子将材料夹碎弃除大块状物，再加一滴
7、固定液，吹散细胞，过火焰干燥，老化后，进行分带处理。注意用新鲜材料效果较好。 以上制片方法除用于精巢材料外，对于胃盲囊、卵巢等组织也同样适用。3、 C带显带步骤：（1）饱和Ba(OH)2处理 将老化的玻片置于装有饱和Ba(OH)2溶液的染色缸中，然后在60左右恒温水浴锅内处理10-30分钟。在C 带显带技术中，此步最为关键。Ba(OH)2处理时间与老化时间长短、标本种类、及细胞分裂所处的时期等因素有关，另外与药品的生产厂家，存放的时间长短也有关。对于不同物种染色体标本进行大批量分带处理之前，应进行梯度试验，以找出药液与处理时间的最佳组合，以便节省时间，提高效率。（2）2SSC液温育 经Ba(O
8、H)2处理后的玻片，应立即置于同温度的蒸馏水下冲洗，以便去除钡垢，否则Ba(OH)2极易与空气中的CO2形成钡垢（BaCO3 ），而影响后续的染色和观察。去垢后再以蒸馏水冲洗置2SSC液中于60水浴锅中温育1个小时以上（可过夜），然后再以蒸馏水冲洗。此步处理时间长短并不是至关重要。（3）吉姆萨溶液染色 将上述染色体玻片标本放入10%的吉姆萨染液中染色20分钟以上，再用蒸馏水冲净玻片表面的染液，然后在磷酸缓冲液中浸泡10分钟，最后用蒸馏水冲洗即可（扣染也可以）。（4）封片 室温无尘干燥后，以中性树胶封片，制成永久玻片标本。（5）镜检、标记 在光学显微镜下观察，选取所需的分裂相。（6）摄影及染色体
9、C-带核型 选取分散良好的精原细胞有丝分裂中期、初级精母细胞减数分裂中期和后期的分裂相进行拍照，保存为JPEG格式。将拍照好的显微图像经Photoshop软件对其亮度、对比度等信息校正后，打印出照片。然后将染色体逐一剪下，依长度递减顺序依次粘贴于质地较厚的白纸上，最后进行编号。一般是将X染色体排于最后位置。4、染色体C带带型分析 C-带显示结构异染色质 ，为便于测量、分析和比较。选用精原细胞有丝分裂中期染色体以及精母细胞减数分裂中期和后期染色体进行观察和测量统计。1）、染色体C-带位置（1）着丝粒C-带（也称着丝粒区C-带）：指着丝粒本身及其相邻部分的C-带纹。（2）端部C-带：指染色体末端区
10、域的C-带纹。（3）居间C-带：在着丝粒C-带和端部C-带之间范围内的C-带纹。根据其所在位置又细分为近着丝粒带、中间带、亚中间带和亚端带等。2）、染色体上C-带的相对含量 指某条染色体上C-带实际长度与该染色体组总实际长度比值，用百分率来表示。3）、C-带结构异染色质含量 即染色体上C-带相对长度之和。也可通过每一染色体组中所有染色体上C-带纹总长度与染色体组总长度的比值计算，数值结果是一致的，一般用百分率来表示。 此值在不同物种中存在着恒定的差异，因此也可作为一项重要分类指标。4）、每对同源染色体上相对应的C-带是否纯合 即在某一特定位置相配对的两条染色体是否都具有带纹，带纹大小、染色程度
11、是否一致，如非上述，则按杂和计。5）、特定染色体C-带带纹的着色程度在同样的处理程序下，染色体组中各染色体C-带带纹上存在恒定的深浅不同的着色反应，这也是C-带分析中不可忽视的一项内容，它表示C-带结构异染色质在质上的差异。本文中以四级表示法：特强：染色极深；强：染色较深；中：染色程度中等；弱：染色极淡。6）、染色体组中，各类C-带纹的总个数（包括着丝粒带、端带、各类居间带） 根据以上C-带各项统计结果，列表表示，并据此绘制出中华稻蝗染色体C-带带型示意图。 选取20个左右染色体形态清晰、分裂相良好的细胞，置于Olympus 显微摄影仪上进行拍照，测算照片上的染色体和C-带带纹相对长度等有关数
12、据，分析蝗虫的染色体核型、C-带带型。五、实验结果五、实验结果 中华稻蝗 属斑腿蝗科稻蝗属，染色体数目均为2n=23，2n=24，性别决定机制XO型，常染色体和性染色体均为端部着丝粒染色体。染色体组式：2L+6M+3S+X，其中包括大型染色体2对，中型染色体6对，小型染色体3对，X染色体中型，在染色体组中长度列第3位。都具有着丝粒C-带带纹。从染色体C-带带型分析可以看出中华稻蝗L1染色体具有弱染端带，L2染色体具有强染端带，M8染色体具有弱染近着丝粒居间带，S10染色体具有强染端带（图1-1）。图图1-1 中华稻蝗部分种群染色体中华稻蝗部分种群染色体C带核型图版带核型图版A 福州种群；B长沙
13、种群；C长春种群1-11为常染色体编号，X为X染色体六、作业：六、作业：1、对中华稻蝗染色体C带带纹进行核型分析。2、说明染色体C带核型分析的意义。参考文献参考文献1. 汪堃仁, 薛绍白, 柳惠图. 细胞生物学（第二版）.北京,北京师范大学出版, 1997, 322-3272. 马恩波，郑哲民斑腿蝗科10个种NOR定位和分类学意义动物学研究，1993， 14(3)：271-2763. 马恩波稻蝗属一新种及其染色体C带核型分析（直翅目：蝗总科）动物分类学报，1995b，20（2）：200-203PPT（全名：PowerPoint ）是美国微软公司出品的办公软件系列重要组件之一（另外还有Excel
14、、Word等）；MicrosoftOfficePowerPoint 是一种演示文稿图形程序，该软件是功能强大的演示文稿制作软件；可协助用户独自或联机创建永恒的视觉效果；它增强了多媒体支持功能，利用该软件制作的文稿，可以通过不同的方式播放，也可将演示文稿打印成一页一页的幻灯片，使用幻灯片机或投影仪播放，可以将演示文稿保存到光盘中以进行分发，并可在幻灯片放映过程中播放音频流或视频流。对用户界面进行了改进并增强了对智能标记的支持，可以更加便捷地查看和创建高品质的演示文稿。1编辑本段内容应用一套完整的PPT文件一般包含：片头动画、PPT封面、前言、目录、过渡页、图表页、图片页、文字页、封底、片尾动画等
15、；所采用的素材有：文字、图片、图表、动画、声音、影片等；国际领先的PPT设计公司有：themegallery 、poweredtemplates 、presentationload 、锐得PPT等；近年来，中国的PPT应用水平逐步提高，应用领域越来越广；PPT正成为人们工作生活的重要组成部分，在工作汇报、企业宣传、产品推介、婚礼庆典、项目竞标、管理咨询等领域。编辑本段相册制作1启动ppt，新建一个空白演示文稿。依次单击“插入”菜单中的“图片”，选择“新建相册”命令，弹出“相册”对话框。 2相册的图片可以选择磁盘中的图片文件（单击“文件/磁盘”按钮），也可以选择来自扫描仪和数码相机等外设中的图片
16、（单击“扫描仪/照相机”按钮）。通常情况下，我们单击“文件/磁盘”按钮选择磁盘中已有的图片文件。 ppt在弹出的选择插入图片文件的对话框中可按住shift键（连续的）或Ctrl键（不连续的）选择图片文件，选好后单击“插入”按钮返回相册对话框。如果需要选择其他文件夹中的图片文件可再次单击该按钮加入。 3所有被选择插入的图片文件都出现在相册对话框的“相册中的图片”文件列表中，单击图片名称可在预览框中看到相应的效果。单击图片文件列表下方的“”、“”按钮可改变图片出现的先后顺序，单击删除按钮可删除被加入的图片文件。 通过图片“预览”框下方的提供的六个按钮，我们还可以旋转选中的图片，改变图片的亮度和对比
17、度等。 4接下面来我们来看看相册的版式设计。单击“图片版式”右侧的下拉列表，我们可以指定每张幻灯片中图片的数量和是否显示图片标题。单击“相框形状”右侧的下拉列表可以为相册中的每一个图片指定相框的形状，但功能必须在“图片版式”不使用“适应幻灯片尺寸”选项时才有效，假设我们可以选择“圆角矩形”，这可是需要用专业图像工具才能达到的效果。最后还可以为幻灯片指定一个合适的模板，单击“设计模式”框右侧的浏览按钮即可进行相应的设置。 在制作过程中还有一个技巧，如果你的图片文件的文件名能适当地反映图片的内容，可勾选对话框中的“标题在所有图片下面”复选项，相册生成后会看到图片下面会自动加上文字说明（即为该图片的
18、文件名），该功能也只有在“图片版式”不使用“适应幻灯片尺寸”选项时才有效。 以上操作完成之后，单击对话框中的创建按钮，ppt就自动生成了一个电子相册。 到此，一个简单的电子相册已经生成了。当然了，如果需要进一步地对相册效果进行美化，我们还可以对幻灯片辅以一些文字说明，设置背景音乐、过渡效果和切换效果。相信大家看完本文后，能自己亲自动手，制作一个更精美的个性化的电子相册。制作完成后，记得将你的相册打包或刻录成光盘，送你的亲朋好友一起欣赏哦。中医理、法、方（df高血压958心脏病983u6 糖尿病87fr）、药的研究，使二者有机结合（df4肺炎88gdg 青霉素d25f肝炎df6），互相借鉴、补充
19、，避免各自的片面性、局限性，这将有利于中西医学的优势互补，“和而不同”，多元发展。近年来，中医药在防治非典、禽流感和艾滋病方面发挥的独特作用也证实了二者的有机结合，具有肯定的临床疗效。编辑本段东西方医学交融（45传染病q566 丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）不管是中医学还是西医学，从二者现有的思维方式的发展趋势来看，均是走向现代系统论思维，中医药学理论与现代科学体系之间具有系统同型性，属于本质相同而描述表达方式不同的两种科学形式。可望在现代系统论思维上实现交融或统一，（df高血压958心脏病983u6 糖尿病87fr）成为中西医在新的发展水平上实现交融或统一的支撑点，希冀籍此能给中医
20、学以至生命科学带来良好的发展机遇，进而对医学理论带来新的革命。编辑本段现代中医史（4f肿瘤fbb癌症yuw3胃癌d65io肠癌.f2tr肺癌65ff）替了事实认识，决定最终结果劳而无功”，因此，中、西医学应并存共荣而不必强求统一。 （df4肺炎88gdg 青霉素d25f肝炎df6）尽管目前中、西医学还不可能融合成为一种统一的医学模式，但可以独立发展，并存共荣，整合互补。（45传染病q566 丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）缘于现代信息论、（df肺25s血液f369血小板t5172 红血球gdf55m 白血球fd2）系统论和控制论的影响，西医学的发展趋势若仅仅是单纯地重视分析而忽略了整体
21、结构和整体功能，无疑将渐行渐窄。而中医讲究“感悟”，（4f肿瘤fbb癌症yuw3胃癌d65io肠癌.f2tr肺癌65ff）未免夹带有很多主观因素，难以客观地定量，定性。若中医的诊察疾病能参考现代医学的微观分析，将辨证与辨病相结合，实现宏观与微观的统一，使中医诊断客观化，即把分析与综合相结合的方法引入中医理、法、方、药的研究，使二者有机结合，互相借鉴、补充，避免各自的片面性、局限性，这将有利于中西医学的优势互补，（df高血压958心脏病983u6 糖尿病87fr） “和而不同”，多元发展。近年来，中医药在防治非典、禽流感和艾滋病方面发挥的独特作用也证实了二者的有机结合，具有肯定的临床疗效。编辑本
22、段东西方医学交融（df高血压958心脏病983u6 糖尿病87fr）不管是中医学还是西医学，从二者现有的思维方式的发展趋势来看，均是走向现代系统论思维，中医药学理论与现代科学体系（45传染病q566 丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）之间具有系统同型性，属于本质相同而描述表达方式不同的两种科学形式。可望在现代系统论思维上实现交融或统一，成为中西医在新的发展水平上实现交融或统一的支撑点，希冀籍此能给（df高血压958心脏病983u6 糖尿病87fr）中医学以至生命科学带来良好的发展机遇，进而对医学理论带来新的革命。编辑本段现代中医史（df4肺炎88gdg 青霉素d25f肝炎df6）轴心时代中、西医学的峰巅之作。雅斯贝而斯曾说：“如果历史有一个轴心，那么我们就必须将这轴心作为一系列对全部人类都有意义的事件，发生于公元前800至200年间的这种精神历程似乎构成了这样一个轴心。 本文档下载后可以修改编辑，欢迎下载收藏。
