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1、 组织学与胚胎学组织学与胚胎学Histology and Embryology第一章第一章 组组 织织 学学 绪绪 论论 Introduction of Histology 组织学研究内容组织学研究内容组织学在医学中的地位组织学在医学中的地位 人体各部结构人体各部结构（解剖和组织）疾病时各结构疾病时各结构的变化的变化（病理学）疾病时各结构疾病时各结构功能的变化功能的变化（病理生理学） 诊断学诊断学 内科学内科学外科学外科学儿科学儿科学眼科学眼科学 妇产科学妇产科学人体各结构功能人体各结构功能（生理与生化）解剖学：解剖学：肉眼肉眼-分辨率：分辨率：0.1mm 意大利文艺复兴意大利文艺复兴达达芬奇
2、，维萨利芬奇，维萨利o1665 年年, Robert Hook (英国人英国人)-Cello100年之久，石蜡切片术年之久，石蜡切片术 微米（微米（mm）0.2m0.2m组织学发展简史组织学发展简史o1838年德国学者年德国学者T.Schwan、M. Schleiden “细胞学说细胞学说”o人体细胞约人体细胞约1 1101015 15 细胞，细胞，200200余种余种o1801年年, Bichat (法国人法国人)-组织（组织（Tissue） Histology ：希腊文：希腊文组织：功能相关的细胞群和细胞外基质。组织：功能相关的细胞群和细胞外基质。 细胞细胞 组织组织 器官器官o人体基本组
3、织人体基本组织上皮组织、结缔组织、肌组织及上皮组织、结缔组织、肌组织及神经组织神经组织二、组织学主要研究方法二、组织学主要研究方法（一）常用光镜标本制作技术（一）常用光镜标本制作技术 1.1.切片切片标本的制备标本的制备 涂片、铺片与磨片标本的制备涂片、铺片与磨片标本的制备o涂片涂片o铺片铺片o磨片磨片o取材与固定：取材与固定：o固定使组织中蛋白质迅速凝固，防止组固定使组织中蛋白质迅速凝固，防止组织自溶或腐败，以保持生活状态下的结织自溶或腐败，以保持生活状态下的结构。常用的固定剂有甲醛、酒精等构。常用的固定剂有甲醛、酒精等o脱水脱水:上行梯度乙醇上行梯度乙醇o透明透明: :二甲苯二甲苯石蜡切片
4、标本的制备石蜡切片标本的制备o包埋包埋：包埋前先浸入已融化的石蜡中使蜡进入：包埋前先浸入已融化的石蜡中使蜡进入组织中组织中, 然后石蜡包埋。然后石蜡包埋。o切片和染色：切片和染色： 切片厚度切片厚度 5-10m, 苏木精（苏木精（hematoxylin） 伊红（伊红（eosin）oHEHE染色染色HE染色原理染色原理:苏木精为碱性染料，细胞核和细胞质中的核酸染成蓝紫苏木精为碱性染料，细胞核和细胞质中的核酸染成蓝紫色；色；伊红为酸性染料，细胞质中的碱性蛋白和细胞外基质染伊红为酸性染料，细胞质中的碱性蛋白和细胞外基质染成粉红色。成粉红色。嗜碱性（嗜碱性（basophilia）嗜酸性（嗜酸性（aci
5、dophilia）o封固：封固：o火棉胶切片火棉胶切片（celloidin section）o冰冻切片冰冻切片 (frozen section）o恒冷箱切片机恒冷箱切片机（cryostat ）（二）电子显微镜技术（二）电子显微镜技术1932年，德国人年，德国人Ruska和和Knoll发明了电子显微镜发明了电子显微镜 测量单位：纳米测量单位：纳米（nm) 1nm=1/1000m （获（获1986年诺贝尔奖）年诺贝尔奖） 分辨率：分辨率：0.1-0.2nm 1. 透射电镜术（透射电镜术（transmission electron microscope, TEM） 取材：极为新鲜；戊二醛、锇酸固定，
6、超薄切片（取材：极为新鲜；戊二醛、锇酸固定，超薄切片（50-100nm） 醋酸铀和柠檬酸铅电子染色醋酸铀和柠檬酸铅电子染色 电子密度高电子密度高 电子密度低电子密度低透射电子显微镜原理透射电子显微镜原理透射电镜图像透射电镜图像2. 扫描电子显微镜扫描电子显微镜 scanning electron microscope, SEMo极细的电子束在样品上扫描，产生的二次极细的电子束在样品上扫描，产生的二次电子用探测器收集，形成电信号运送到显电子用探测器收集，形成电信号运送到显像管，在荧光屏上显示物体表面的立体图像管，在荧光屏上显示物体表面的立体图像。像。o戊二醛和锇酸固定，脱水、干燥和喷镀金戊二醛和
7、锇酸固定，脱水、干燥和喷镀金 产生立体图像产生立体图像扫描电子显微镜原理扫描电子显微镜原理（三）组织化学和细胞化学（三）组织化学和细胞化学原理原理: 在组织切片上加一定试剂，与组织或细胞中在组织切片上加一定试剂，与组织或细胞中的待检物发生化学反应成为有色沉淀物，可用的待检物发生化学反应成为有色沉淀物，可用光镜检出。重金属沉淀可用电镜检出。此法可光镜检出。重金属沉淀可用电镜检出。此法可检测细胞内的酶类、糖类、脂类和核酸等检测细胞内的酶类、糖类、脂类和核酸等1. 糖类显示法糖类显示法: 最常用于显示细胞、组织内的多最常用于显示细胞、组织内的多糖和蛋白多糖方法是过碘酸糖和蛋白多糖方法是过碘酸-雪夫反
8、应雪夫反应（periodic acid Schiff reaction, PAS）基本原理基本原理o糖被强氧化剂过碘酸（糖被强氧化剂过碘酸（HIO4）氧化后，）氧化后，形成形成-醛基；后者与醛基；后者与Schiff试剂中的无试剂中的无色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色反色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色反应产物，应产物，PAS反应阳性部位即表示多糖的反应阳性部位即表示多糖的存在部位。存在部位。肠绒毛上皮中杯状细胞的肠绒毛上皮中杯状细胞的PAS反应反应 （四）（四） 免疫细胞化学免疫细胞化学基本原理基本原理:根据抗原与抗体特异性结合的特根据抗原与抗体特异性结合的特点，检测细胞内某种多肽、蛋白质及
9、膜点，检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子的存在和分布表面抗原和受体等大分子的存在和分布荧光素（常用异硫氰酸）标记抗体荧光素（常用异硫氰酸）标记抗体辣根过氧化物酶标记抗体辣根过氧化物酶标记抗体o直接法和间接法直接法和间接法免疫组织化学方法免疫组织化学方法免疫组织化学（免疫组织化学（Sp法）法） 荧光免疫细胞化学技术荧光免疫细胞化学技术（五）细胞培养术（五）细胞培养术（cell culture）o细胞培养又称体外实验（细胞培养又称体外实验（in vitro）。）。o无菌条件下将从机体取得的细胞模拟体内各种条无菌条件下将从机体取得的细胞模拟体内各种条件培养，可在倒置相差显微镜下观察和记录细胞件培养，可在倒置相差显微镜下观察和记录细胞的生活状态。的生活状态。特点：可排除体内复杂的影响因素，观察单一因素特点：可排除体内复杂的影响因素，观察单一因素对细胞形态和功能的影响，获得从体内实验难以对细胞形态和功能的影响，获得从体内实验难以达到的实验结果。达到的实验结果。体外细胞培养体外细胞培养本章重点1.组织学概念组织学概念2.石蜡切片制备基本过程石蜡切片制备基本过程3.HE染色原理，嗜酸性和嗜碱性染色原理，嗜酸性和嗜碱性4.高电子密度和低电子密度高电子密度和低电子密度5.PAS反应反应
