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1、LOGO指指导教教师：XXX食品中微生物的食品中微生物的检测n班班级：XXXn学学生：生：XXXn学号学号：XXXLOGOLOGO微生物检验的意义u微生物检验是衡量食品和药品卫生质量的重要指标之一，是判定被检食品或药品能否食用或药用的科学依据之一。u是判断食品和药品加工原料、生产环境卫生情况及对成品被污染的程度作出正确的评价，为卫生管理工作提供科学依据。u微生物检验贯彻“预防为主”的卫生方针，有效的防止或减少食物中、药品毒害、人兽共患病的发生。保障人民身体健康。u提高产品质量，避免经济损失。主要内容主要内容u第一部分第一部分菌落总数的测定菌落总数的测定u第二部分第二部分霉菌，酵母菌计数霉菌，酵
2、母菌计数u第三部分第三部分出口食品中大肠菌群，粪大肠菌群和大出口食品中大肠菌群，粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法肠杆菌检验方法u第四部分第四部分金黄色葡萄球菌的检验金黄色葡萄球菌的检验一一.菌落总数测定菌落总数测定n菌落总数是指在被检样品的单位重量（菌落总数是指在被检样品的单位重量（g g）、）、容积（容积（mlml）或表面积（）或表面积（cmcm2 2）内，所含能于某种）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数，菌落的总数，以以CFU/g（mL）来表示。一定）来表示。一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、条件包括培养基成分、培养
3、温度和时间、pH、是否需要氧气等、是否需要氧气等u菌落总数主要作为判别菌落总数主要作为判别食品被污染程度食品被污染程度的标志，也可以应用这一的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。评价时提供依据。u食品中细菌食品中细菌菌落总数越多菌落总数越多，则食品，则食品含有致病菌含有致病菌的可能性越大，食的可能性越大，食品品质量越差质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合须配合大肠菌群和致病菌大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较
4、全面的评价。的检验，才能对食品做出较全面的评价。u一、一、实验实验目的目的u1、学习并掌握食品中菌落总数测定方法和原理学习并掌握食品中菌落总数测定方法和原理。u 2 2、掌握平板菌落计数法及熟悉无菌操作技术。、掌握平板菌落计数法及熟悉无菌操作技术。u 3 3、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义 。菌落总数测定菌落总数测定u器材与试剂：器材与试剂：检样，无菌蒸馏水，检样，无菌蒸馏水，平板计数培养基平板计数培养基，1ml吸管，吸管，10ml吸管，吸管，无菌培养无菌培养皿（皿（17），镊子，试管（），镊子，试管（4），均质杯，剪刀，移液枪
5、，报纸，量筒，烧杯，），均质杯，剪刀，移液枪，报纸，量筒，烧杯，酒精灯，天平电炉、酒精灯，天平电炉、恒温培养箱、恒温水浴箱恒温培养箱、恒温水浴箱等。等。三、流程三、流程u1 1、检样、检样 u2 2、1010倍系列稀释倍系列稀释u3、5个适宜个适宜稀释度各稀释度各1 1 m mL,L,分别加入无菌平皿内分别加入无菌平皿内 u4 4、平皿内倾注、平皿内倾注15152020 m mL L琼脂培养基，混匀琼脂培养基，混匀u5 5、36 136 1培养培养482482小时或（小时或（242242）小时）小时u6、记录稀释倍数和相应的各平板、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量菌落数量u7 7、 计算菌落
6、总数计算菌落总数 报告报告 四、四、步骤步骤u(一一)取样、稀释和培养取样、稀释和培养1、以无菌操作取检样以无菌操作取检样25g于于225ml无菌水一起进入无菌均质杯内无菌水一起进入无菌均质杯内800010000r/min均质均质12min，制成制成1：10的均匀稀释液。的均匀稀释液。u2、用用1mL灭菌吸管吸取灭菌吸管吸取1:10稀释液稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管或反复吹打混灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管或反复吹打混合均匀，制成合均匀，制成1：100的稀释液的稀释液u3、另取另取1mL灭菌吸管，按上项操作
7、顺序，制灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即此每递增稀释一次即换用换用1支支1mL吸管。吸管。u4、根据标准要求或对污染情况的估计，选择根据标准要求或对污染情况的估计，选择23个个适宜稀释度，适宜稀释度，分别在制作分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿两个平皿。同时分别取同时分别取1ml稀稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照空白对照。u5、稀释液移入平皿后，将冷却至稀
8、释液移入平皿后，将冷却至46琼脂培养基注入琼脂培养基注入平皿约平皿约1520ml，并转动平皿，并转动平皿，混合均匀混合均匀。u6、待琼脂凝固后，翻转平板，置待琼脂凝固后，翻转平板，置361温箱内培养温箱内培养482hu（二）（二）菌落计数菌落计数做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度同稀释度的各的各平板平均菌落数平板平均菌落数。u 到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应
9、将平板放置于置于0 044，但，但不要超过不要超过24h24h。u 1 1、平皿菌落数的选择平皿菌落数的选择 （1 1） 选取菌落数在选取菌落数在3030300300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用稀释度应采用两个平皿两个平皿，大于大于300300的可记为多不可计。的可记为多不可计。u（2）其中一个平板有较大）其中一个平板有较大片状菌落片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半不到平板的一半，而，而其余一
10、半其余一半中菌落分布又很中菌落分布又很均匀均匀，则可以计算，则可以计算半个平板后乘以半个平板后乘以2，以代表一，以代表一个平板的菌落数。个平板的菌落数。u（3）当平板上有链状菌落生长时，如呈）当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长链状生长的菌落之间无任何明显的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。（三）结果与报告（三）结果与报告 1 1、菌落总数的计算方法、菌落总数的计算方法 （1 1
11、）若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每每g g（mLmL）中菌落总数结果。）中菌落总数结果。 （2 2）若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，）若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算：按如下公式计算：N=C/N=C/（n n1 1+0.1n+0.1n2 2）dd（1 ) 1 ) 式中：式中：N N 样品中菌落数；样品中菌落数；C C 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；平
12、板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n nl l 第一个适宜稀释度平板数；第一个适宜稀释度平板数；n n2 2 第二个适宜稀释度平板数；第二个适宜稀释度平板数；d d 稀释因子（第一稀释度）。稀释因子（第一稀释度）。（3）、）、若所有稀释度的平板菌落数若所有稀释度的平板菌落数均均300，则取，则取最高稀释度最高稀释度的平的平均菌落数乘以稀释倍数计算。均菌落数乘以稀释倍数计算。（4）若所有稀释度平板菌落数）若所有稀释度平板菌落数均均30，则以，则以最低稀释度最低稀释度的平均菌落的平均菌落数乘稀释倍数计算。数乘稀释倍数计算。（5）、若所有稀释度平板均、若所有稀释度平板均无菌落生长无菌落生长，则
13、应按，则应按300，有的又，有的又30，则应以，则应以最接近最接近300或或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。的平均菌落数乘以稀释倍数计算。2、菌落总数的报告、菌落总数的报告（1）、菌落数在）、菌落数在1100时，按四舍五入报告时，按四舍五入报告两位有效数字。两位有效数字。（2）、）、菌落数菌落数100时，第三位数字按四舍五入计算，取时，第三位数字按四舍五入计算，取前面两位有效数前面两位有效数字字，为了缩短数字后面的零数，也可以，为了缩短数字后面的零数，也可以10的指数表示。的指数表示。（3）、若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
14、 （4 4）若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 （5 5）称重取样以称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。为单位报告。六、注意事项六、注意事项u1、无菌操作、无菌操作u操作中必须有操作中必须有“无菌操作无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，菌的。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用应用75%75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消乙醇在包装开口处擦拭
15、后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。毒处理的无菌室进行。u2 2、采样的代表性、采样的代表性u 如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样固体样品品必须经过均质或研磨，必须经过均质或研磨，液体样品液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。须经过振摇，以获得均匀稀释液。u3 3、稀释液、稀释液u 样品稀释液主要是样品稀释液主要是灭菌生理盐水灭菌生理盐水，或，或磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液（或（或0.1蛋白蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用
16、。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水灭菌蒸馏水。uu 4 4、每递增稀释一次即换用、每递增稀释一次即换用1 1支支1ml1ml灭菌吸管。灭菌吸管。u 5 5、倾注用培养基应在、倾注用培养基应在4646水浴内保温，温度过高会影响细菌水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝固而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应生长，过低琼脂易于凝固而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。以皮肤感受较热而不烫为宜。u6 6、倾注培养基的量规定不一，从、倾注培养基的量规定不一，从121220ml20ml不等，一般以不等，一般以
17、15ml15ml较为较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察u7、为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾、为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死，以防止细菌有所死亡或繁殖。亡或繁殖
18、。菌落总数测定几点说明菌落总数测定几点说明u由于检样中采用由于检样中采用30/3530/35有氧条件下培养，因而并不是有氧条件下培养，因而并不是样品中实际的总活菌数，一些特殊营养要求的细菌、样品中实际的总活菌数，一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映出来。出来。u鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平可以来源于细胞块，也可以来源
19、于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colonyformingunits，CFU）报告。）报告。菌落总数测定几点要求菌落总数测定几点要求u每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过15min，主要为防止细菌增殖和产生片状菌落。样液与琼脂应充，主要为防止细菌增殖和产生片状菌落。样液与琼脂应充分混合，避免将混合物溅到平皿壁和皿盖上。皿内琼脂凝固后，分混合，避免将混合物溅到平皿壁和
20、皿盖上。皿内琼脂凝固后，不要长时间放置，然后倒置培养，可避免菌落蔓延生长。不要长时间放置，然后倒置培养，可避免菌落蔓延生长。u检样过程中应用稀释剂做空白对照，用以判定稀释液、培养基、检样过程中应用稀释剂做空白对照，用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。同时，检样过程中应在工作台上打平皿或吸管可能存在的污染。同时，检样过程中应在工作台上打开一块空白平板计数琼脂，其暴露时间应与检样时间相当，以了开一块空白平板计数琼脂，其暴露时间应与检样时间相当，以了解检样在检验操作过程中有无受到来自空气的污染。解检样在检验操作过程中有无受到来自空气的污染。u检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落
21、发生混淆，可检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4放置，以便在计数检样时用作对照。放置，以便在计数检样时用作对照。 原原 液液 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 1 多 不 可 计 连 片 生 长 185030 278000 366001实验结果实验结果图片展示10-110-210-310-42.数据处理 样品原液以及五个稀释度中原液、10-1菌落数目过多，10-3 、10-4、10-5菌落数目过少，只有10-2为最适的稀释度。10-2稀释液的菌落数=所以
22、每克柿饼样品中含菌数约为440CFU/g霉菌酵母菌计数霉菌酵母菌计数u霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。长期以来，人们利用某些霉菌常菌相的一部分。长期以来，人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，但在某些情况下，霉菌和和酵母加工一些食品，但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成中腐败变质。有些霉菌能够合成有酵母也可造成中腐败变质。有些霉菌能够合成有毒代谢产物霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品毒代谢产物霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如，酵母在新鲜的和加表面失去色、香、味。例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难
23、闻的异味，它工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等改变颜色及散发不正常的气味等。因此霉菌和酵。因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。和酵母计数来制定食品被污染的程度。霉菌酵母菌菌落形态霉菌酵母菌菌落形态霉菌霉菌菌落形态：菌落呈绒毛状，絮状，蜘蛛网状。菌落形态：菌落呈绒毛状，絮状，蜘蛛网状。成熟的霉菌菌落多数有各种颜色的孢子形成，随成熟的霉菌菌落多数有各种颜色的孢子形成，随种而异。种而异。酵
24、母菌酵母菌菌落形态：在孟加拉红琼脂平板上，菌落形态：在孟加拉红琼脂平板上，多数为圆形凸起，边缘整齐，表面光滑湿润，呈多数为圆形凸起，边缘整齐，表面光滑湿润，呈不透明乳脂状，乳白色或粉红色。少数表面粗糙不透明乳脂状，乳白色或粉红色。少数表面粗糙或皱褶，有的菌落周边呈细分枝状。位于琼脂内或皱褶，有的菌落周边呈细分枝状。位于琼脂内的菌落，可呈铁饼形、三角形及多角形。菌落外的菌落，可呈铁饼形、三角形及多角形。菌落外观与细菌菌落不易区别时，应挑取菌落，用水制观与细菌菌落不易区别时，应挑取菌落，用水制片，置高倍显微镜下观察，其细胞个体比细菌大片，置高倍显微镜下观察，其细胞个体比细菌大数倍，多为圆形或卵圆形
25、，绝大多数为出芽繁殖。数倍，多为圆形或卵圆形，绝大多数为出芽繁殖。当平板内酵母菌菌落甚多时，常有酒香气当平板内酵母菌菌落甚多时，常有酒香气孟加拉红（虎红）培养基孟加拉红（虎红）培养基 培养出的霉菌培养出的霉菌培养出的霉菌培养出的霉菌实验流程实验流程稀释稀释稀释稀释：1 1 1 1、以无菌操作称取检样、以无菌操作称取检样、以无菌操作称取检样、以无菌操作称取检样25g(25g(25g(25g(或或或或25mL)25mL)25mL)25mL)，放人含有，放人含有，放人含有，放人含有225mL225mL225mL225mL灭灭灭灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇菌水的玻塞三角瓶中，振摇菌水的玻塞三角瓶中，振摇
26、菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min30min30min30min，即为，即为，即为，即为1 1 1 1：10101010稀释液。稀释液。稀释液。稀释液。2 2 2 2、用灭菌吸管吸取、用灭菌吸管吸取、用灭菌吸管吸取、用灭菌吸管吸取110110110110稀释液稀释液稀释液稀释液10mL10mL10mL10mL，注入试管中，另用带橡，注入试管中，另用带橡，注入试管中，另用带橡，注入试管中，另用带橡皮乳头的皮乳头的皮乳头的皮乳头的1mL1mL1mL1mL灭菌吸管反复吹吸灭菌吸管反复吹吸灭菌吸管反复吹吸灭菌吸管反复吹吸50505050次，使霉菌孢子充分散开。次，使霉菌孢子充分散开。次，使霉菌孢子充分
27、散开。次，使霉菌孢子充分散开。3 3 3 3、取、取、取、取1mL1101mL1101mL1101mL110稀释液注入含有稀释液注入含有稀释液注入含有稀释液注入含有9mL9mL9mL9mL灭菌水的试管中，另换一支灭菌水的试管中，另换一支灭菌水的试管中，另换一支灭菌水的试管中，另换一支1mL1mL1mL1mL灭菌吸管吹吸灭菌吸管吹吸灭菌吸管吹吸灭菌吸管吹吸5 5 5 5次，此液为次，此液为次，此液为次，此液为1100110011001100稀释液。稀释液。稀释液。稀释液。培养：培养：培养：培养：倒置于倒置于倒置于倒置于2525252528282828温箱中，温箱中，温箱中，温箱中，3d3d3d3
28、d后开始观察，共培养观察后开始观察，共培养观察后开始观察，共培养观察后开始观察，共培养观察5d5d5d5d。计计计计数数数数：选选选选取取取取菌菌菌菌落落落落数数数数10101010150150150150之之之之间间间间的的的的平平平平板板板板进进进进行行行行计计计计数数数数。（稀稀稀稀释释释释度度度度选选选选择择择择和菌落报告方式参考菌落总数的测定和菌落报告方式参考菌落总数的测定和菌落报告方式参考菌落总数的测定和菌落报告方式参考菌落总数的测定1.实验数据记录如下项目项目 序号序号 稀稀 释释 度度 及及 菌菌 落落 数数 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 霉 菌 计 数 1
29、18 2200 254120 3230000 平均数152110 酵 母 菌 计 数 1 145320 2112011 371100平均数113110实验结果图片展示10-110-2。10-310-410-52.结果处理 在10-110-5这五个稀释度中，10-1的生长状况较其它稀释度好，所以选取10-1进行计数.每克含霉菌菌落数=（25*10）/25=6(CFU/g)每克含酵母菌菌落数=（11*10)/25=5(CFU/g)（三）、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验（三）、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验u大肠菌群大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏系指一群能发
30、酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。阴性无芽孢杆菌。大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌（俗称大肠杆菌）、
31、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。菌等。 u大肠杆菌大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、属。大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为、柠檬酸盐试验）为+-或或-+-的细菌。的细菌。与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（）、致病性大肠杆菌（EPEC）、
32、出血性大肠杆菌）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。）。大肠杆菌的生物学特性大肠杆菌的生物学特性基本形态：基本形态：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8m*1.0-3.0m，多单独存在或成，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周的菌株有周生鞭毛，但多数只有生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性有荚膜
33、或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。染料着色良好，革兰氏染色阴性。大肠杆菌的生物学特性大肠杆菌的生物学特性培养特性：培养特性：u大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为温度为37，在，在42-44条件下仍能生长，生长温度范围条件下仍能生长，生长温度范围15-46。l 在普通营养琼脂上有3中菌落形态： 1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、 光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散； 2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易 在生理盐水中自凝；
34、3）黏液型：常为含有荚膜的菌株。卫生学意义卫生学意义u大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。便污染指标。u食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。危害性的大小。u大肠杆菌在外界存活时间与一
35、些主要肠道致病菌接近，它的出现预大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。近年来，有些国家在执行示菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。实施效果的评估指标。（1）大肠菌群的测定）大肠菌群的测定u1、样品制备、样品制备2稀释培养计数稀释培养计数u2.1对每个样品对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。选择适宜的三个连续稀
36、释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示月示)(LST)肉汤肉汤,每管接种每管接种1mL。2.2将接种管置于将接种管置于361培养培养482h。2.3观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,记录记录在在24h和和48h内产气的内产气的LST肉汤管数。如所有肉汤管数。如所有LST肉汤管均未肉汤管均未产气产气,则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者,则进一则进一步作证实试验。步作证实试验。3大肠菌群的证实试验大肠菌群的证实试验3.1将所有产气管用直径为将所有产气管
37、用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖的接种环移种到煌绿乳糖胆盐胆盐(BGLB)肉汤管中。肉汤管中。3.2置置BGLB肉汤管于肉汤管于361培养培养482h。3.3记录所有记录所有BGLB肉汤管的产气管数。肉汤管的产气管数。4结果报告：按结果报告：按BGLB肉汤产气管数肉汤产气管数,查查MPN表报告每克表报告每克(毫毫升升)样品中大肠菌群的样品中大肠菌群的MPN值。值。大肠菌群测定大肠菌群测定MPN法检验几点说明法检验几点说明uMPN检索表： MPN MPN 为最大可能数为最大可能数(Most Probable Number)(Most Probable Number)的简称。的简称。MPNMP
38、N检索表只给了三个稀释度，检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加1010倍。倍。u初发酵和证实试验： 1 1）两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养基不同，但都是）两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养基不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在在3737分解乳糖产酸产气分解乳糖产酸产气”。 LST中提供了磷酸盐缓冲体系，氯化钠可维持渗透压，月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群中提供了磷酸盐缓冲体系，氯化钠可维持渗透压，月桂基硫酸钠可抑制非
39、大肠菌群的生长，这个缓冲蛋白胨乳糖肉汤允许的生长，这个缓冲蛋白胨乳糖肉汤允许“缓慢乳糖发酵（缓慢乳糖发酵（Slowlactosefermentations）”来促进菌体产气。来促进菌体产气。BGLB中胆盐和煌绿可以抑制革兰氏阳性中胆盐和煌绿可以抑制革兰氏阳性细菌和除了大肠菌群的很多革兰氏阴性细菌。细菌和除了大肠菌群的很多革兰氏阴性细菌。 2 2）初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。阴性。大肠杆菌在月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤大肠杆菌在月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)上典型特征上典型特征 大肠
40、杆菌分解乳糖产生气体 ,有小倒管内收集有气泡。.（2）粪大肠菌群测定粪大肠菌群测定u2.1用直径为用直径为3mm的接种环将所有的接种环将所有482h内产内产气的气的LST肉汤管培养物移种于肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。肉汤管中。2.2将所有接种的将所有接种的EC肉汤管在肉汤管在30min内放入内放入带盖带盖44.50.5水浴箱内水浴箱内,培养培养242h。水浴。水浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面。应以已知为箱的水平面应高于肉汤培养基液面。应以已知为44.5产气阳性的大肠杆菌和产气阳性的大肠杆菌和44.5不产气的不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳
41、性和阴性对照。照。2.3记录记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群试验阳性；不产气管为粪大肠菌群试验阴肠菌群试验阳性；不产气管为粪大肠菌群试验阴性。性。2.4结果报告：按产气管数结果报告：按产气管数,查查MPN表报告每表报告每克克(毫升毫升)样品中粪大肠菌群的样品中粪大肠菌群的MPN值值（3）大肠杆菌测定）大肠杆菌测定u3.1将将2.3条中的条中的EC肉汤管继续培养肉汤管继续培养24h,取其产气管的培养取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板平板,361培养培养242h。3.2检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。检
42、查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。3.3如有典型菌落如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；个典型菌落；如无典型菌落如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上移种到营养琼脂斜面上,361培养培养1824h。3.4将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。3.4.1色氨酸肉汤：在色氨酸肉汤：在361培养培养242h后后,加加Kovacs氏试剂氏试剂0.20.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。
43、上层出现红色为靛基质阳性反应。3.4.2MR-VP培养基：在培养基：在361培养培养482h。以无菌操作。以无菌操作移取培养物移取培养物1mL至至13mm100mm试管中试管中,加加5-萘酚萘酚乙醇溶液乙醇溶液0.6mL,40氢氧化钾溶液氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶和少许肌酸结晶,振摇试管后静置振摇试管后静置2h,如出现伊红色如出现伊红色,为为VP试验阳性。将试验阳性。将MR-VP培养物的剩余部分再培养培养物的剩余部分再培养48h滴加滴加5滴甲基红溶液。如培养物滴甲基红溶液。如培养物变红色变红色,为甲基红试验阳性为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。若变黄色则为阴性反应。3.4.3K
44、oser氏枸椽酸盐肉汤：于氏枸椽酸盐肉汤：于361培养培养96h记录有无记录有无生长。生长。3.4.4LST肉汤：于肉汤：于361培养培养482h,观察试管中是否产观察试管中是否产气。气。3.4.5革兰氏染色：革兰氏染色：革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性革兰染色法革兰染色法革兰氏染色革兰氏染色 革兰氏染色法是一种用于细菌的染革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即色法。此法将细菌分为两类，即革兰革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液再用脱色液处理，细菌仍保
45、留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的种菌的差别在于细胞壁的成分不同差别在于细胞壁的成分不同。大肠杆菌属于革兰氏阴性菌大肠杆菌属于革兰氏阴性菌革兰染色法革兰染色法1、器材与试剂、器材与试剂结晶紫、卢戈碘液、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、酸性复红、生理盐水、酒乙醇、酸性复红、生理盐水、酒精灯、载玻片、滤纸精灯、载玻片、滤纸2、步骤：、步骤：u涂片：接种环，挑取菌落，涂片：接种环，挑取菌落，生理盐水一滴，涂匀生理盐水一滴，涂匀u热固定：通过火焰若干次热固定：通过火焰若干次u初染：结晶紫一滴，初染：结晶紫一滴，1min，水洗，水洗u媒染：卢戈碘液一滴，媒染：卢
46、戈碘液一滴，1min，水洗，水洗u脱色：脱色：95%乙醇，乙醇，30s或至无色为止或至无色为止u复染：复红一滴，复染：复红一滴，30s革兰氏染色革兰氏染色基本步骤：基本步骤：u将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染液，染1min，水洗；，水洗；u滴加革兰氏碘液，作用滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；，水洗；u滴加滴加95%乙醇脱色约乙醇脱色约1530s,直至直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗；染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗；u滴加番红复染液，复染滴加番红复染液，复染1min，水洗、，水洗、待干、镜检。待干、镜检。u结果：革兰氏阳性菌呈结果：革兰氏阳性菌呈紫
47、色紫色，革兰氏，革兰氏阴性菌呈阴性菌呈红色红色。初发酵初发酵u左左2为阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产生。为阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产生。复发酵复发酵u复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产生复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产生1.实验数据记录如下（1）LST培养记录 稀稀 释度释度管号管号 10-1 10-2 10-3 空白空白 1 产气不产气不产气不产气 2产气不产气不产气- 3产气不产气不产气-10-1 10-22 BGLB培养物产气情况 稀释度稀释度管号管号 10-1 空白空白 1 产气 不产气 2 不产气 -BGLB 结果图片展示查M
48、PN表可得每克样品中大肠杆菌群的MPN值3.63.EC肉汤培养物产气情况 稀释度稀释度管号管号 10-1 空白空白 1 不产气 不产气 2 不产气 -由表中结果可得知粪大肠菌群为阴性对照MPN表得每克样品中粪大肠菌群数34.将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化实验如下色氨酸色氨酸肉汤肉汤 mR VP Loser鉴定结果鉴定结果10-1显色情况上层出现红色红色无红色无生长典型大肠杆菌对应符号 + + 空白 无色 黄色 无红色 无生长 色氨酸肉汤所以：样品中大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气，Imuic试验为+-，根据LST肉汤阴性管数查MPN表，得出每克样品中大肠杆菌MPN值9.
49、1（四）（四）金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验一、培养基和试剂一、培养基和试剂胰酪胨大豆肉汤，胰酪胨大豆肉汤，7.5%氯化钠肉汤，血琼脂平板，氯化钠肉汤，血琼脂平板，Baird-Parder琼脂平板，肉浸液肉汤，灭菌盐水，兔血琼脂平板，肉浸液肉汤，灭菌盐水，兔血浆浆二、增菌培养法二、增菌培养法1、检样处理、检样处理称取称取25g固体样品，吸取固体样品，吸取25ml液体样品，加入液体样品，加入225ml灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。混悬液。2、增菌及分离培养、增菌及分离培养吸取吸取5ml上述混悬液，接种于上述混悬液，接种于7.5%
50、氯化钠肉汤或氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤胰酪胨大豆肉汤50ml培养基内，置于培养基内，置于361温箱培养温箱培养24h，转种血平板和，转种血平板和Baird-Parker平板，平板，361培养培养24h，挑取金黄色葡萄球菌菌落进行革兰氏染色镜检及血，挑取金黄色葡萄球菌菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。浆凝固酶试验。3、形态、形态本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5m。、在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄、在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆
51、肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，也有清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，也有时为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有时为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在溶血圈。在Baird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为润、直径为mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落
52、；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。所分离的菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。、血浆凝固酶试验、血浆凝固酶试验吸取吸取1：4新鲜兔血浆新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培，放入小试管中，再加入培养养h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振，振荡摇匀，放荡摇匀，放361温箱或水浴内，每半小时观察一次，温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝
53、块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。株及肉汤作为对照。血平板上金黄色葡萄球菌菌落形态 金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平板上呈金黄色，有时也为白色，大而平板上呈金黄色，有时也为白色，大而突出、圆形、不透明、表面光滑，周围突出、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。有溶血圈。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌在在BP平板上的菌落形态平板上的菌落形态u在在Baird-Parker琼脂平板上菌落琼脂平板上菌落呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，直呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，直径径23mm。灰黑色至黑色
54、，有光。灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清晰脂肪的菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同。带外，其他外观基本相同。平板划线培养葡萄球菌平板划线培养葡萄球菌标准金黄色葡萄球菌标准金黄色葡萄球菌浓度浓度0.10浓度浓度0.01血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验u血浆凝固管和血浆未凝固管血浆凝固管和血浆未凝固管u观察第观察第1h:
55、八支管均未凝血八支管均未凝血u观察第观察第2h: 八支管均未凝血八支管均未凝血u观察第观察第3h： 八八支管均未凝血支管均未凝血观察第观察第4h：均未凝血均未凝血观察第观察第5h:金黄色葡萄球菌管凝血，其他未凝血金黄色葡萄球菌管凝血，其他未凝血观察第观察第6h:金黄色葡萄球菌管凝血，其他未凝血金黄色葡萄球菌管凝血，其他未凝血由血浆凝固酶的实验可以得出：查由血浆凝固酶的实验可以得出：查MPN表，阳性管数（浓度表，阳性管数（浓度0.10为为0，浓度，浓度0.01为为0，浓度，浓度0.001为为0），因此金黄色葡萄球菌最可能），因此金黄色葡萄球菌最可能数（数（MPN）3.0。 经过48h培养后，只有
56、10-1和10-2稀释度的管内有絮状沉淀，将以上稀释度标准金黄色葡萄球菌及空白对照组分别接种于Baird-parker平板，36 1,48h培养后，结果如下：Baird-parker平板培养情况表10-1110-1210-1310-2110-2210-31标准标准葡萄葡萄球菌球菌空空白白有黑色并有透明环的菌落生长有有有有有无有无 将以上长有典型金黄色葡萄球菌的平板中分别挑取一个典型菌落于BHI中，并做一个空白BHI肉汤，于36 1培养4548h后，以无菌操作移取0.20.3ml于小试管中并加入0.5ml兔血浆，振荡摇匀，盖上硅胶塞于36 1中培养6小时，并每隔半小时观察一次，记录如下 序号序号
57、 10-1 10-1 10-3 10-2 10-2 标准葡标准葡萄糖萄糖1 2半凝3全凝456789101112表示不凝 除了标准葡萄球菌有凝固外，其余都不凝的判为葡萄球菌阴性，选取10-1 10-2 10 -3 三个稀释度对照MPN表结果为金黄色葡萄球菌数3 CPU/g参考书目参考书目 1食品微生物检验手册，苏世彦主食品微生物检验手册，苏世彦主编，中国轻工业出版社编，中国轻工业出版社2药品微生物学检验手册，马绪荣、药品微生物学检验手册，马绪荣、苏德模主编，科学出版社，苏德模主编，科学出版社，20032、培养性状：、培养性状： 酵母菌的菌落形态与细菌很相似，菌落表面一般是光滑、湿润、粘稠，酵母
58、菌的菌落形态与细菌很相似，菌落表面一般是光滑、湿润、粘稠， 多数是乳白色奶油状菌落，有的有光泽，边缘整齐，菌落比细菌大。多数是乳白色奶油状菌落，有的有光泽，边缘整齐，菌落比细菌大。酵母菌的菌落酵母菌的菌落酵母菌菌落形态图肉眼和低倍镜下观察：肉眼和低倍镜下观察：菌落的颜色菌落的颜色菌落的表面菌落的表面菌落的形状菌落的形状菌落的边缘菌落的边缘菌落的隆起度菌落的隆起度2 2、培养性状：、培养性状：黑曲霉菌落照片黑曲霉菌落照片青霉菌菌落照片青霉菌菌落照片毛霉菌落照片毛霉菌落照片实验五：酵母菌和霉菌的形态学观察1、菌种：酵母菌、霉菌2、培养基：马铃薯培养基、普通琼脂培养基3、染色剂：乳酸酚棉蓝染色液一、
59、目的和要求：一、目的和要求：1 1、掌握酵母菌的形态、培养特性及培养方法、掌握酵母菌的形态、培养特性及培养方法2 2、掌握霉菌的形态、培养特性及培养方法、掌握霉菌的形态、培养特性及培养方法二、材料：二、材料：1、形态特征：酵母菌是单细胞的个体，长约7.2um，宽度 5.6um，呈圆形、椭圆形、卵圆形、腊肠形、圆柱形等， 一般比细菌大，不生菌丝。可见到明显的细胞核及核膜。压片标本检查法： 取洁净载玻片，滴加生理盐水1滴，以白金耳蘸取被检材料，混匀 后盖上盖玻片，即可直接镜检。染色检查法： 标本面上滴加乳酸酚棉蓝染色剂，盖上盖玻片，放置1015分钟 后镜检。（一）酵母菌形态及培养性状的观察：（一）
60、酵母菌形态及培养性状的观察：三、操作方法：三、操作方法：酵母菌电镜照片酵母菌电镜照片2、培养性状：、培养性状： 酵母菌的菌落形态与细菌很相似，菌落表面一般是光滑、湿润、粘稠，酵母菌的菌落形态与细菌很相似，菌落表面一般是光滑、湿润、粘稠， 多数是乳白色奶油状菌落，有的有光泽，边缘整齐，菌落比细菌大。多数是乳白色奶油状菌落，有的有光泽，边缘整齐，菌落比细菌大。酵母菌的菌落酵母菌的菌落酵母菌菌落形态图1 1、形态特征：、形态特征：霉菌的菌体是由菌丝组成，但各菌丝是由不分隔的或分隔的多霉菌的菌体是由菌丝组成，但各菌丝是由不分隔的或分隔的多 细胞组成圆柱状的结构，霉菌菌丝细胞的结构和酵母菌细胞相细胞组成
61、圆柱状的结构，霉菌菌丝细胞的结构和酵母菌细胞相 似，菌丝有营养菌丝、气生菌丝、产生孢子。似，菌丝有营养菌丝、气生菌丝、产生孢子。压片标本检查法：压片标本检查法：（同酵母菌）（同酵母菌）染色检查法：染色检查法： （同酵母菌）同酵母菌）（二）霉菌的形态及培养性状的观察：（二）霉菌的形态及培养性状的观察：霉菌菌丝及孢子的染色镜下照片霉菌菌丝及孢子的染色镜下照片孢子孢子菌丝菌丝无隔菌丝无隔菌丝有隔菌丝有隔菌丝孢子萌发和菌丝的生长过程孢子萌发和菌丝的生长过程 菌丝的结构菌丝的结构无性孢子无性孢子 无性繁殖是指不经过两性细胞的结合而形成个体的过程。以无性繁殖无性繁殖是指不经过两性细胞的结合而形成个体的过程
62、。以无性繁殖所产生的孢子称所产生的孢子称无性孢子无性孢子。大多数霉菌是通过无性孢子来进行繁殖的，如。大多数霉菌是通过无性孢子来进行繁殖的，如芽孢子芽孢子、关节孢子关节孢子（节孢子）、（节孢子）、厚膜孢子厚膜孢子（厚垣孢子）、（厚垣孢子）、孢子囊孢子孢子囊孢子、分分生孢子生孢子等。等。孢子囊孢子孢子囊孢子孢子囊孢子囊孢子囊梗孢子囊梗关节孢子关节孢子厚膜孢子厚膜孢子芽孢子芽孢子小分生孢子小分生孢子大分生孢子大分生孢子分生孢子梗分生孢子梗肉眼和低倍镜下观察：肉眼和低倍镜下观察：菌落的颜色菌落的颜色菌落的表面菌落的表面菌落的形状菌落的形状菌落的边缘菌落的边缘菌落的隆起度菌落的隆起度2 2、培养性状：、培养性状：黑曲霉菌落照片黑曲霉菌落照片青霉菌菌落照片青霉菌菌落照片毛霉菌落照片毛霉菌落照片1 1、描述酵母菌的形态特征及培养性状？、描述酵母菌的形态特征及培养性状？2 2、描述霉菌的形态特征及培养性状？、描述霉菌的形态特征及培养性状？3 3、实验中遇到的问题及体会？、实验中遇到的问题及体会？四、实验报告：四、实验报告：
