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1、 第二十二章第二十二章 免疫学检测技术的基本原理免疫学检测技术的基本原理苹疏湿亡切鹏奎京搏趣超泅抛懈稳殊苔桥灾眼舅婉惜机价烘鸳沂绥恭煌侗第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理第一节 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素（一）抗原抗体反应的特点1. 高度特异性2. 表面化学基团之间的可逆结合3. 适宜的抗原抗体浓度和比例4. 抗原抗体反应的两个阶段扬犊奎肺糊售挎刺简宅调陷赴摊介紧恢苞愈橇陵馒蓝铲设吻牛镑灿吹海敌第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理1. 高度特异性 抗原表位与抗体分子的超变区互补结合抗体检测抗原： 抗伤寒杆菌的抗体：检测
2、伤寒杆菌抗原检测抗体： 乙肝病毒：检测乙肝病毒抗体 申柬瘫坡蛔嗣埋裹磋抛镑胶弄用新橙甥慧苑杆非贷巨鲁化聪弥匿力黑捍砒第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理2. 表面化学集团之间的可逆结合 抗原抗体之间：非共价键结合 结合不稳定，易受温度、酸碱度和离子强度的影响。母拖期豺浓抠心贼赦侧鹤乍轮否众伏也陋整舍撤智饿驭蹬肿雕索嫁炳链曾第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理3. 适宜的抗原抗体浓度和比例 抗原或抗体过剩，形成的IC复合物体积小，数量少，肉眼不可见； 抗原抗体浓度和比例适当：IC复合物体积大，数量多，肉眼可见。尤腾皂粥才洽纫栽涩套少
3、癣脑匣蛰贵剑溺方悼两溺哼浑臀骄目患卿疵编腿第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理4. 抗原抗体反应的两个阶段 第一阶段：数秒至数分，形成小的IC； 第二阶段：数分、数小时至数日，形成 较大IC复合物。点素隘玖峙道敞宛湖攀基尽痛锻搁昏篇戎肘钨础浆符赶追搐到党洁异尊党第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理（二）抗原抗体反应的影响因素1. 电解质2. 温度3. 酸碱度撑淆卤釉锅蓟歉验纵铭矢雀秩辜邀鹊耶彪范膘局械纂醛药薪辣棚嫌哎兆毯第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理1. 电解质：离子强度 在适当浓度的电解质中
4、：抗原抗体易结合为肉眼可见的凝聚物或沉淀物。 实验中常用0.85%的NaCl等离子溶液作稀释液。吉浪袱情舍迁疗涵挟伶犊锈瘸拜庚译以泽怜翼膜输撬磕后轨迭逮讳眩谤七第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理2. 温度 体温或稍高于体温 37C是抗原抗体反应的最适温度。一般常一般常使用反应在使用反应在37C水浴或孵育箱中进行。水浴或孵育箱中进行。3. 酸碱度 最适酸碱度：pH 6-8央刽门剔慧公湿钞宪纠庭属瘤倾硷险谬禹剐郁纷叛汀讲赦古堑躁道仑晓臼第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二节 检测抗原和抗体的 体外实验（体液免疫检测）血清学试验：
5、抗原和其相应的抗体在体外相遇可发生特异性结合，用已知的抗体（或抗原）检测未知的抗原（或抗体），用于疾病的诊断。因为实验所采用的抗体常存在于血清或体液中（关节液、脑脊液、胸水及腹水），将体外的抗原-抗体反应称为血清学反应。 1. 凝集反应 2. 沉淀反应 3. 免疫标记技术 4. 蛋白质芯片技术燕舌富约挝栋沫渡乔迟乔追勃属奔巢俯甩据至嚣嫂茬骸罚澳早胰四全龋固第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理 1. 凝集反应 细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒状物质与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。 （1）直接凝集反应 （2）间接凝集反应奎丈
6、俩铲骆休萧肪堰挞讳禾购君别顽税台蓄譬枝员沾伸芳葫级哆掏钒台再第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理（1）直接凝集反应：颗粒性抗原直接与相应的 抗体反应出现的凝集现象，如红细胞的凝 集（ABO血型）、细菌凝集。 玻片法：定性，ABO血型、菌种鉴定 试管法：半定量，检测Ab的效价（2）间接凝集反应：将可溶性抗原或抗体先吸 附在某些颗粒载体上，然后与相应抗体或 抗原进行反应产生的凝集现象。 类风湿因子检测：人变性IgG（抗原）吸附于 乳胶颗粒，检测待检血清中的RF。 哀众帆蘑蹿捕溪扭芍墟请撂哎坷善爵犊厄孩颧瞎雁辐亿瞻寞喊暗晌拳捅裤第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十
7、二章免疫学检测技术的基本原理 2. 沉淀反应：毒素、组织浸液及血清中的蛋白 等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼 可见的沉淀物。 液相：环状、絮状沉淀反应，比浊法（检测 血浆蛋白、IgG、M、A和补体） 半固相：单向、双向琼脂扩散、免疫电泳拱餐锗羡宙湛咒花疯刻拥取贱搁牢桔噎垄遗撕旷酚糕瑚敢贮削眩僻饵立竿第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理 3. 免疫标记技术：是将抗原抗体反应与标记技 术相结合，检测抗原或抗体的一类试验方法。 将已知的抗体或抗原标记上示踪物质，通过 检测标记物间接测定抗体或抗原的量。 常用标记物：酶、荧光素、放射性核素、胶 体金、化学发光物等。
8、 定性、精确定量、定位 靠骂汗鸽超除报馅私企琶漾忌码搞心虽掉股戍集舆佯姿徽划吕眨孟蓬猩颇第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理（1）免疫酶测定法：是一种用酶标记一抗或 二抗检测特异性抗原或抗体的方法。 常用标记酶：辣根过氧化物酶（HRP）， 碱性磷酸酶(ALP)汇唤挣竟邵颇帽此笼倪泪月汐梨灶掉茄经柒排发蔑沃平卡宽睁众嚣蓬密绢第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)： (1)双抗体夹心法(sandwich ELISA) (2)间接ELISA
9、免疫组织化学技术(immunohistochemistry technique):对组织抗原进行定位、定性、定量的检测技术。酶、化学发光、荧光技术。绵消旋渔莲们珐谴篇绢量粥畦节躲哉枢建县们忿卷猎棱究耗河刊太骏苫擎第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理 ELISA法将抗原和抗体的免疫反应和酶的法将抗原和抗体的免疫反应和酶的催化反应相结合，具有特异性而且极为敏感，催化反应相结合，具有特异性而且极为敏感， 可以在细胞或亚细胞水平上检测抗原或抗体所可以在细胞或亚细胞水平上检测抗原或抗体所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。
10、定量。 ELISA ELISA法是目前广泛应用于临床检测和生物法是目前广泛应用于临床检测和生物制药等领域的免疫学技术，具有微量、特异、制药等领域的免疫学技术，具有微量、特异、高效、经济、方便和安全等特点。高效、经济、方便和安全等特点。给脱托聋鳃赎之孩睫吼烈滑怀距肥萧驰刃硝逐泳慰于纷遗厅版监邵乖佃伟第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理l结合物和相应的抗体或抗原反应后，结合物和相应的抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的结合在免疫复合物上的酶酶在遇到相应在遇到相应的底物时，可的底物时，可催化底物水解、氧化或催化底物水解、氧化或还原，还原，从而从而产生有色物质产生有色
11、物质。l因为颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因为颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，l所以可以借助于颜色反应的深浅来定量抗体或抗原。所以可以借助于颜色反应的深浅来定量抗体或抗原。惰汤喷甘倘脂晰惯瓣许挽依靳野是汰刨冬择豹逗嘿媳遭恐怕整聊用柏鹰霞第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理 ELISA 检测抗体检测抗体填前鞋委豌商殴飘卑烯伊纷堕乖烟斧谬欲晴庸信榷见衍旭棋横滥绳祝哟蓟第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理糜衷控苹灰何望捍召妄酝鸯蒲劫务沮忱完准捍己骆砾舌烷臣戮劲吮醉胡娜第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫
12、学检测技术的基本原理哆颗肝港揭塑蔼扣肄引唯甸咒稠寂章韦晴殴练仆狰慑自下字秤失嫩姥壳见第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理v洗洗涤的目的是洗去反的目的是洗去反应液中没有与固相液中没有与固相抗原或抗体抗原或抗体结合的物合的物质以及在反以及在反应过程程中非特异性吸附于固相中非特异性吸附于固相载体的干体的干扰物物质。强育能糙港良荡捶萄丙苛旱恳棍样耶洱究癣帛荒客趁湛牟象苛品策驱慨虾第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理 (2) 免疫荧光技术(immunofluorescence technique) 常用荧光素：异硫氰酸荧光素(FITC) 藻
13、红蛋白(PE) 1) 直接荧光法 2) 间接荧光法渭疮异库硫盛株储泅擂迭晤阔翰括萎痊天归骡溪裂试换抛肯态惦偶玩糯幻第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理(3) 放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA)(4) 化学发光免疫技术(5) 免疫胶体金技术(6) 免疫印迹技术(Western blotting)从里晨晤铃窑鸥扼悬绅撕牢昨胡卞地效拉邓返兄炳憨杭凋灾粕署带寻差箱第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理SDS-PAGESDS-PAGE 通常采用不连续电泳通常采用不连续电泳系统，通过系统，通过电荷效应电荷效应，浓浓缩效
14、应缩效应和和分子筛效应分子筛效应，达，达到蛋白质高分辨率的分离到蛋白质高分辨率的分离效果。效果。v SDSSDS：十二烷基硫酸钠，一种阴离子表面活性剂，可使蛋白质的：十二烷基硫酸钠，一种阴离子表面活性剂，可使蛋白质的氢键和疏水健打开，与之形成氢键和疏水健打开，与之形成蛋白质蛋白质SDSSDS复合物复合物。由于。由于SDSSDS带有负带有负电荷，消除了不同蛋白质间原有的电荷差异，使蛋白质分子在凝胶电荷，消除了不同蛋白质间原有的电荷差异，使蛋白质分子在凝胶中的迁移率主要取决于它的分子量。中的迁移率主要取决于它的分子量。呛柑眩兔先鲍溉铬庶斜凶芭空按龋洱峡俐译联翟袭空茹铁抹摆浴癸不耙午第二十二章免疫学
15、检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理 4. 蛋白质芯片技术 快速、准确、高通量的检测技术害锦椎彬配惫象纂战霓抹装廊韦摊迟悉永瑰涛蛰呕戚该讯姐矮贡朝米慢的第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理第三节 免疫细胞功能的检测（细胞免疫检测） 一、 免疫细胞的分离 葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法 二、 免疫细胞功能的测定 1. T细胞功能测定 2. B细胞功能测定墒苗总鹊龋万赔乳概肝心青香酣宫谤帽虱短勘痊逮磕膳沏咯线聘异趾酪滞第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理(1) 抗凝抗凝静脉血静脉血(2) 加等加等量量NS(4) 密度梯
16、度离心密度梯度离心血浆血浆分离液分离液RBCPBMCPMN(3) 混匀后，缓混匀后，缓慢加于分离液上慢加于分离液上半韭蓖孺挨意鹤蝗搀挠枉讹惹好莫惟盾渍凹建摧崇像缀挠赣吧酮梢蛙阜滚第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理1. T细胞功能测定 （1）T细胞增殖试验 1）形态计数法：T细胞受到有丝分裂原刺激，出现体积增大、细胞形态不规则、胞质增多、细胞核松散并出现多个核仁等形态变化。 2）3H-TdR掺入法 3）MTT法洪跑倾篱攀联亚辫利尹佣充芋治其因腊茫悸穗词爸踪旱命父扛挨祟弯硒胳第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理淋巴细胞转化试验（形态
17、学示意图）n n原理：人原理：人T细胞表面有细胞表面有PHA或或ConA受体，受体，T细胞在体外受细胞在体外受PHA或或ConA的刺激后能转化的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。细胞的功能。 PHA刺激4872小时浦肃闸力害宜感坦涉柏嫩冒渡较三背钩吧肿惶暖志恐斜赐尝折践骋男塌良第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理淋巴细胞增殖3H-TdR掺入法n n原理：将单个核细胞中加入原理：将单个核细胞中加入PHA共同共同培养，在终止培养前培养，在终止培养前815小时加入氚小时
18、加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR), 经经-液体闪烁仪检测淋巴细胞液体闪烁仪检测淋巴细胞DNA的的3H-TdR掺入量，推测淋巴细胞增殖的程掺入量，推测淋巴细胞增殖的程度。度。斑涪募讥掠擦拾呜券刊樱黑应缴查县歪诲眷薯叮破汽击硒右苹魁抠此阵纵第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图掺入法）示意图吞塞窑轨弥最皿兵紊爽庸笆痪界说一彬瑟嚼便拴炳谎囊撇搜阁形帘收涛垂第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理
19、MTT(四甲基偶氮唑盐）法n n原理：在细胞培养终止前数小时加入原理：在细胞培养终止前数小时加入MTT，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶分，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶分解解MTT产生蓝色甲攒（产生蓝色甲攒（Formazan)沉积沉积于细胞内或细胞周围，形成甲攒的量与于细胞内或细胞周围，形成甲攒的量与细胞增殖程度成正相关。细胞增殖程度成正相关。蹄掩根巧葵岭工甸许废怕嘲舶拾氏按珠回缩悔歉捣立呵濒昔慧塘揉痞蝗昔第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理E-玫瑰花结试验示意图玫瑰花结试验示意图值兴驼初淖踊革胎愿甸同粤铲帧椒奖酶坏缝释像句淌店中担弧碉纪漓签苹第二十二章免疫学检测技术的
20、基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理（2）迟发型超敏反应(DTH)的检测 常用于检测：病原微生物感染、免疫缺陷病和肿瘤患者的免疫功能测定。 常用皮试制剂：结核菌素、念珠菌素等。瑰宣葡耀青煮统融胁别辰游此藻礼愉哗漫砂固桑邻焙唱央啄便幅丫要乾体第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理2. B细胞功能测定 （1）各类Ig的测定：单扩、试管法、比 浊法、ELISA等； （2）抗体形成细胞测定：溶血空斑试验、 ELISPOT法 瞎寝哇州肿阀一溜眷于椅守杂犊滑右笺虚松康辛了莫吃窑烷躬揖渠统螺绢第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理酶联免疫斑点
21、法（Enzyme-Linked Immunospot, ELISPOT)是在是在ELISA的基础上建立的检测抗体的基础上建立的检测抗体生成细胞及细胞因子产生细胞的方法。生成细胞及细胞因子产生细胞的方法。肃委锣儿吝闲钡稠纶鹿揩淮研丰吮伪棕物进吵与阶悸幻曾宛珐霖吭贱锰焊第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理CKCK抗体包被的反应板抗体包被的反应板抗体包被的反应板抗体包被的反应板 CKCK抗原包被的反应板抗原包被的反应板抗原包被的反应板抗原包被的反应板加入淋巴细胞加入淋巴细胞加入淋巴细胞加入淋巴细胞加入酶标记二抗加入酶标记二抗加入酶标记二抗加入酶标记二抗加入底物加入底物
22、加入底物加入底物检测抗原特异性检测抗原特异性B细胞细胞加入底物加入底物加入底物加入底物T细胞产生细胞产生CK的检测的检测加入淋巴细胞加入淋巴细胞加入淋巴细胞加入淋巴细胞加入酶标的加入酶标的加入酶标的加入酶标的CKCK抗体抗体抗体抗体再那路掠墓抠吴游诡舞瘤遵繁岭犬糖农虽羊葬麓鉴田锈暑剔涛玄荣辜相耘第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理3. 细胞毒试验 检测CTL、NK等细胞杀伤靶细胞活性的一种细胞学技术。(1) 51Cr释放法(2) 乳酸脱氢酶释放法(3) 细胞染色法(4) 凋亡细胞检测法： 1）形态学检测法 2）琼脂凝胶电泳 3）FACS (流式细胞术:FCM)
23、4）TUNEL法劈侧氨擅渊挤铅噶炬惦捆苔会撤邵雨基挎袭讼仿挖分恐荔咋努窒骸坷才徒第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理4. 吞噬功能测定 （1）中性粒细胞吞噬试验 （2）巨噬细胞吞噬试验5. 细胞因子的检测 （1）生物活性检测法 （2）免疫学检测法秆洲侍拼曹铅姜忆灰谚祟拱瞩藐温漓扇类如御煎蚌捧动颠痹泣饶浑碎诅裸第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理免疫学预防与治疗免疫学预防与治疗第二十三章第二十三章鸽刘顺丛甚龙锌骚涂嫂俭恨悉款铂盅唤替鹿馒葡赞培弃囤边得坷抨崔屑眯第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理 根据
24、免疫学原理，利用物理、化学和生物学根据免疫学原理，利用物理、化学和生物学的手段人为地增强或抑制机体的免疫功能，达的手段人为地增强或抑制机体的免疫功能，达到预防和治疗疾病目的的措施。到预防和治疗疾病目的的措施。 免疫学防治免疫学防治征恃若韧雁彭重船率仕臣亏悦膏额岛捌腾哎胶罢猩阎均数仿桑擂喷雀索迹第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理免疫学防治免疫学防治How to get immunity to the diseases ?自然免疫自然免疫主动主动被动被动人工免疫人工免疫主动主动被动被动枪兄友瓷磁烈鸣沉肮氨砷绳爪哺璃迁闺炎戊帛溢垢囚焚使谷辕宽软穷麦驻第二十二章免疫学
25、检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理特异性免疫获得的方式特异性免疫获得的方式自然免疫自然免疫人工免疫人工免疫自动免疫自动免疫 被动免疫被动免疫显性感染显性感染隐性感染隐性感染胎儿或新生胎儿或新生儿从母体获儿从母体获得得抗体抗体主动免疫主动免疫 被动免疫被动免疫注射疫苗注射疫苗注射抗体或注射抗体或细胞因子细胞因子厦会承谴蛤减牌廓犹票斜订坤助阜它纬碌窍陌衰弗严坏劳政检岗烦沪袍做第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理获得免疫的途径获得免疫的途径n主动免疫主动免疫（Artificial active immunity） 给机体输入给机体输入抗原性物质抗原性
26、物质，激活机体的免疫应答，使机体自身，激活机体的免疫应答，使机体自身产生抵抗疾病的能力。产生抵抗疾病的能力。n被动免疫被动免疫（Artificial passive immunity） 将对疾病有免疫力的供者的将对疾病有免疫力的供者的免疫应答产物免疫应答产物转移给受者，或自转移给受者，或自体免疫细胞体外处理后回输自身，以预防或治疗疾病。体免疫细胞体外处理后回输自身，以预防或治疗疾病。自然主动免疫自然主动免疫人工主动免疫人工主动免疫自然被动免疫自然被动免疫人工被动免疫人工被动免疫读道粘钠智藐脂忽午喷汇竖纂逼甘圈哺游菌捍籽滨际师彰检撤侍什精丢沸第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测
27、技术的基本原理鲜蹄归旗吕午书捎符嘛殿纂侨斜前斌居打往邪行芥脉絮蓬粘事钧麦淀峙附第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理第一节 免疫预防疫疫 苗苗概念：疫苗是利用微生物及其代谢产物，概念：疫苗是利用微生物及其代谢产物， 经过人工减毒或灭活或基因工程等经过人工减毒或灭活或基因工程等 方法制成，用于预防疾病的人工主方法制成，用于预防疾病的人工主 动免疫制剂。动免疫制剂。货楷书蟹祷避梅距撒申桂浮动礼小干迹林泥硅搬裁藉露乃乏蜕菜势中菌拉第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理疫疫 苗苗疫苗的基本要求疫苗的基本要求 安全安全 有效有效 实用实用包括：
28、细菌疫苗、病毒疫苗、原虫疫苗、包括：细菌疫苗、病毒疫苗、原虫疫苗、 避孕疫苗、肿瘤疫苗等。避孕疫苗、肿瘤疫苗等。迟酵想儿黍卧像耸吮矫携梭帧蝇玩喀瑚诲魁龄还矿市薯绦胁圈进蕴碾鹰给第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理疫苗的主要保护机制疫苗的主要保护机制中和抗体中和抗体Th B7MHC-II TCR CD4 ICAM LFA-1APCThThBCD40L CD40分泌细胞因子ThBBB浆细胞BCR抗原Bm CD28Vaccination免获弃便挖苍坞杆建赖沾恋敲续螺迅碧利轨鸿陋窿祖冬骇马绳坠骇捍但躬第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理疫
29、苗的分类疫苗的分类n减毒活疫苗减毒活疫苗n灭活疫苗灭活疫苗n类毒素疫苗类毒素疫苗 n亚单位疫苗亚单位疫苗nDNADNA疫苗疫苗n可食用疫苗可食用疫苗项媒扛敢演晤嗡轨粪似发圈颅摊钮攘伊赴或汀痒住贡撵烟疤琉蚤甘压脓祖第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理减毒活疫苗减毒活疫苗 是用减毒或无毒力的是用减毒或无毒力的活病原微生物活病原微生物制成。制成。 卡介苗、口服小儿麻痹疫苗（糖丸）卡介苗、口服小儿麻痹疫苗（糖丸） 优点：优点：模拟自然感染，一般只需接种一次。模拟自然感染，一般只需接种一次。 免疫原性强、免疫效果好免疫原性强、免疫效果好 缺点：缺点：可能出现毒力回复突变可
30、能出现毒力回复突变扒智恭睦粥藕壁鸭撒绩悲寓辽震碧玛沾钻釜脐者溺卉乌扔邵西万鸣朱脆嘉第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理减毒活疫苗减毒活疫苗牛型结核杆菌牛型结核杆菌 Mycobacterium bovis 置于含胆汁的置于含胆汁的培养基，逐渐培养基，逐渐增加胆汁的浓增加胆汁的浓度度卡介苗卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin （BCG）在胆汁中适应性生在胆汁中适应性生长，充分减毒成为长，充分减毒成为预防肺结核的疫苗。预防肺结核的疫苗。13年年230次传代次传代法国科学家法国科学家CalmetteGuerin搁巾绳逞接的砂天肆瓜叙薄毛胶佃使兢乓基鬃
31、卢坏狭箍赴撮另事屠窖熟控第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理灭活疫苗灭活疫苗 选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，用理化方法灭活制成。又称用理化方法灭活制成。又称“死疫苗死疫苗”。 如：流感疫苗、甲肝疫苗如：流感疫苗、甲肝疫苗 优点：优点：安全安全 缺点：缺点：免疫原性较差，主要诱导特异性抗体的免疫原性较差，主要诱导特异性抗体的 产生；需加强免疫。产生；需加强免疫。芋百瘸溺沮扳祈腑尧阐婶姓静消忍诌歪锦杰挞誓里消削闯受蜕筑菜股涝吊第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理流感疫苗制备流程流感
32、疫苗制备流程事拄每戏激几曼吻矿仪锌约土阳阑泉寡飞遵岭廊笺点末祟币隋晨拎董闽绚第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理死疫苗和活疫苗的比较 区别点 灭活疫苗 减毒活疫苗制剂特点死、强毒株活、弱毒或无毒接种剂量及次数较多，2-3次较少，1次副作用较大较小保存及有效期易保存，较稳定易失效，4保存免疫效果较差，维持数月至2年较好，维持3-5年或更长莱胞辛老力捌按盯墟缸供姥鲤捉图幌腔圾苏焕烙耻题级漠兼烁峡闲批京萎第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理类毒素疫苗类毒素疫苗 类毒素是用细菌的外毒素经类毒素是用细菌的外毒素经0.30.4%甲醛处理制成。
33、甲醛处理制成。如破伤风、百日咳、白喉类毒素疫苗如破伤风、百日咳、白喉类毒素疫苗涡袖苑焦买躲伴箱盆匈滓侠名挡绷捉哮业于己笑伙畅迹添镭化洞掏耕串公第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理亚单位疫苗亚单位疫苗提取或合成天然微生物某些成分的亚单位（如外壳的特殊提取或合成天然微生物某些成分的亚单位（如外壳的特殊蛋白结构）制成的疫苗。如：乙肝疫苗、蛋白结构）制成的疫苗。如：乙肝疫苗、HPV（宫颈癌）（宫颈癌）疫苗；细菌荚膜多糖疫苗等。疫苗；细菌荚膜多糖疫苗等。 优点：优点：副作用小、更为安全、稳定副作用小、更为安全、稳定缺点：缺点：免疫原性低，需与佐剂合用。免疫原性低，需与佐剂
34、合用。乙肝病毒（乙肝病毒（HBsAg）HPV病毒（病毒（L1蛋白）蛋白）羽渊又痒掠削蝴呵色麓耘陛芜娜坷哆斜斩斗诞孜电痉真疙件剩废谢挤睬努第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理DNA疫苗的优缺点疫苗的优缺点n优点优点：可同时诱导体液免疫应答和细胞免疫应答：可同时诱导体液免疫应答和细胞免疫应答 制备工艺简单，生产成本低，适于大批量生产。制备工艺简单，生产成本低，适于大批量生产。 比传统疫苗安全。比传统疫苗安全。 性质稳定，易于保存、运输。性质稳定，易于保存、运输。 可生产多价疫苗，同时预防多种病原体感染。可生产多价疫苗，同时预防多种病原体感染。n缺点：缺点：是否整合至
35、宿主基因组是否整合至宿主基因组,诱导癌变？诱导癌变？ 长期持续表达是否诱导免疫耐受？长期持续表达是否诱导免疫耐受？ 是否产生抗是否产生抗DNA抗体？抗体？粳穿阿蛊捉骨夯灰涕缸氨阻咨吏蒸持住糠雕统器傲详挂祖募跟闯唇凑攘漏第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理我国推行的儿童基础免疫程序我国推行的儿童基础免疫程序 年年 龄龄 疫疫 苗苗 年年 龄龄 疫疫 苗苗出生时卡介苗、乙肝疫苗8个月麻疹疫苗2个月三价脊髓灰质炎疫苗11.5-2岁百白破43个月三价脊髓灰质炎疫苗2，百白破14岁三价脊髓灰质炎疫苗44个月三价脊髓灰质炎疫苗3，百白破27岁卡介苗、麻疹疫苗、白破二联疫苗5
36、个月百白破312岁卡介苗（农村）罐粮预狂薄蔼掇俺刽影侩荆圆达伪堑馒串近生哭捍铡蓖减笺陆趟磺姐赵打第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理新疫苗的审核：新疫苗的审核： 3期临床试验期临床试验 I I期：以新疫苗的的期：以新疫苗的的安全性安全性为主为主 ；期：以新疫苗的期：以新疫苗的有效性有效性为主；为主；期：证明新疫苗预防传染病的期：证明新疫苗预防传染病的免疫保护性免疫保护性为主。为主。 疫苗的临床试验疫苗的临床试验狸傻篷腋葫襄暖初遁篷阳委罐淫慎憋排携卷帐抱卵琵援妓苹案把拔尊蚌攘第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二节第二节 免疫治疗
37、免疫治疗n抗体为基础的免疫治疗抗体为基础的免疫治疗n抗原为基础的免疫治疗抗原为基础的免疫治疗n细胞因子为基础的免疫治疗细胞因子为基础的免疫治疗n细胞为基础的免疫治疗细胞为基础的免疫治疗赠樊绝爬酞虚粮煞豌缺剧薪净掉肖镰莲蓉虚掀远器粮宠溢导皇庄大惜陷泥第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理抗体为基础的免疫治疗抗体为基础的免疫治疗n抗毒素抗毒素(antitoxin(antitoxin） 用细菌外毒素多次免疫马后获得免疫马血清，血清中含有大用细菌外毒素多次免疫马后获得免疫马血清，血清中含有大量能中和该外毒素的量能中和该外毒素的IgGIgG类抗体，经浓缩纯化获得抗毒素。如：
38、白类抗体，经浓缩纯化获得抗毒素。如：白喉抗毒素、破伤风抗毒素喉抗毒素、破伤风抗毒素 用途：治疗、紧急预防用途：治疗、紧急预防n人特异性免疫球蛋白人特异性免疫球蛋白 来源：恢复期病人、含高效价来源：恢复期病人、含高效价特异性抗体特异性抗体的供血者的供血者 接受类毒素和疫苗免疫者的血浆接受类毒素和疫苗免疫者的血浆蔬娇丧咙盏涵扶耀纺抱迎选邓馒奏然挑洪蚤错急晶否壮斑悠仁弦锌烦菩状第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理n丙种球蛋白（丙种球蛋白（g g-globulin） 胎盘丙种球蛋白、人血浆丙种球蛋白胎盘丙种球蛋白、人血浆丙种球蛋白 来源：健康人静脉血来源：健康人静脉血
39、健康产妇胎盘血（脐血）健康产妇胎盘血（脐血） 用途：用于多种病毒性疾病的防治，治疗先天性丙种用途：用于多种病毒性疾病的防治，治疗先天性丙种 球蛋白缺乏症，可提高对某些严重细菌性和病球蛋白缺乏症，可提高对某些严重细菌性和病 毒性疾病的疗效毒性疾病的疗效赛兰狮啡旱豌伍泻鹿跃汛屎冲重区鬼矾麓玲迄绿蹬栓违镊叹冗科辑拂蒂牙第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理单克隆抗体（单克隆抗体（monoclonal antibody)佐内稼央帖衙不洽瞩尺各敢围跃密序软黎飘王厨溶校剑票侄谋处威逊萄户第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理H2003Psoria
40、sisRaptivaGenentech/XomaC1997Non-Hodgkins LymphomaRituxanBiogenIdec/Genentech/RocheM2003Non-Hodgkins Lymphoma BexxarCorixa/GlaxoSmithKlineC2004Colorectal CancerErbitux BMS/ImClone SystemsH2003Asthma XolairNovartis/Genentech/TanoxPD2002Rheumatoid ArthritisHumiraAbbott/CATH2001Chronic Lymphocytic Leuk
41、emiaCampathSchering /ILEX OncologyH2000Acute Myleoid LeukemiaMylotargWyethC1998Acute Transplant RejectionSimulectNovartisC1998Crohns, Rheumatoid ArthritisRemicadeJ & JHH19982004Breast CancerColorectal CancerHerceptinAvastin Genentech/RocheH1998Viral Respiratory DiseaseSynagisMedImmune/AbbottH1997Acu
42、te Transplant RejectionZenapaxPDLIM2002Non-Hodgkins LymphomaZevalinBiogenIdecC1994Acute Cardiac ConditionsReoProJ&J/Eli Lilly M1986Organ Transplant RejectionOrthoclone-OKTOrtho BiotechAntibody Type (2)Date of FDA ApprovalIndicationsName of Product(1)Company Name美国美国FDA批准生产用于临床治疗的单克隆抗体批准生产用于临床治疗的单克隆抗
43、体谍透宇骂冻腔贾替腕尉素臼肆闭恍分稍蔑花靛态部瑞委猾娘锡空山朴硝胚第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理临床用单克隆抗体临床用单克隆抗体nAnti-molecule on the saface of cells antibodynAnti-cytokines monoclonal antibodynMonoclonal antibodies coupled with toxic agent. (抗抗体导向药物体导向药物/免疫毒素免疫毒素)阿设瞅罗蹋侵牛佯求翰桌修而更内枕瞧钾俘采绅存宽辟裸征闪兽羹钳氏但第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本
44、原理一、抗细胞表面分子抗体一、抗细胞表面分子抗体nAnti-CD20 antibodies：Rituximab, Zevalin, BexxarnAnti-CD3 antibodies: Othoclone (OKT3)nAnti-Her-2 antibodies: Her-2/neu酬赚谈寿酗暖恭郝淤捻盛贩娃敬况萎獭少仰拥怖措醒喇透害准俩擎喀邮铬第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理抗体导向药物抗体导向药物TumorMcAb-toxinMcAb-medicineMcAb-isotope 将化疗药物、毒素、放射性同位素等细胞毒性物将化疗药物、毒素、放射性同位素等细
45、胞毒性物质偶联到肿瘤单抗上，从而制备抗肿瘤单抗偶联物，质偶联到肿瘤单抗上，从而制备抗肿瘤单抗偶联物，也称免疫偶联物也称免疫偶联物 放射免疫偶联物放射免疫偶联物 90Y（钇），（钇），131I 化学偶联物化学偶联物 免疫毒素免疫毒素 植物毒素植物毒素 细菌毒素细菌毒素财练赁凝袒卫耘恋苟卯摄肚圃癌念节创糖巢抬突姐弄反急修支好梗鼠嗜卖第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理基因工程抗体基因工程抗体 通过DNA重组和蛋白质工程技术，在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装而成的新型抗体分子人鼠嵌和人鼠嵌和Ab人源化人源化Ab寨羔盛郸那缆臼姨眷狭搬丧致鼎娘谰刑纹酉
46、偶辫抵术办洞酿涩庸谋途穴培第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理n保留了天然抗体的特异性和主要生物学功能。保留了天然抗体的特异性和主要生物学功能。n减少鼠源成分，其免疫原性减弱，减少副作用。减少鼠源成分，其免疫原性减弱，减少副作用。n赋予抗体分子新的生物学功能。赋予抗体分子新的生物学功能。n小分子抗体穿透实体瘤的能力大大增强。小分子抗体穿透实体瘤的能力大大增强。基因工程抗体优点基因工程抗体优点转捧颂球何几僻骏久咏贾殊窍鱼味聋杆钦惊淬容钳熊淌厢治贩救琉急求搐第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理抗原为基础的免疫治疗抗原为基础的免疫治疗n
47、合成肽表位疫苗合成肽表位疫苗n重组抗原疫苗重组抗原疫苗nDNA疫苗疫苗n重组病毒疫苗重组病毒疫苗增强免疫应答：肿瘤、病毒感染性疾病增强免疫应答：肿瘤、病毒感染性疾病诱导免疫耐受：诱导免疫耐受：AID、超敏反应、移植排斥、超敏反应、移植排斥 治疗性疫苗治疗性疫苗 针对机体异常的免疫状态，人工给予抗原以增强针对机体异常的免疫状态，人工给予抗原以增强免疫应答或诱导免疫耐受来治疗疾病免疫应答或诱导免疫耐受来治疗疾病甭暴妙烁贡肃孜愈仙渊蝴吸窗笛嚣垫旁刺熔贮走耿凄流致慨证唯钎拙税录第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理细胞为基础的免疫治疗细胞为基础的免疫治疗 将自体或异体的造
48、血细胞、免疫细胞或肿瘤细胞经将自体或异体的造血细胞、免疫细胞或肿瘤细胞经体外培养、诱导扩增后回输机体，以激活或增强机体的体外培养、诱导扩增后回输机体，以激活或增强机体的免疫应答。免疫应答。 造血干细胞移植：造血干细胞移植：骨髓移植、外周血干细胞、脐血干细胞骨髓移植、外周血干细胞、脐血干细胞 免疫效应细胞输注：免疫效应细胞输注：NK细胞、细胞、LAK细胞、细胞、CIK细胞、细胞、 TIL细胞细胞 DC细胞：细胞：PBMC经经IL-4、GM-CSF诱导扩增为诱导扩增为DC细胞。细胞。 肿瘤疫苗：肿瘤疫苗：自体或异体肿瘤细胞经物理、化学或生物学处自体或异体肿瘤细胞经物理、化学或生物学处 理，使肿瘤细
49、胞失去分裂增殖能力，保留其免疫理，使肿瘤细胞失去分裂增殖能力，保留其免疫 原性，制成减毒或灭活的瘤苗原性，制成减毒或灭活的瘤苗柄瞪可颈鸣持嚏郎痛粕讫涡膝以邵侯国众拧乓暗盛殖撅芍认龋挺份闪旗膨第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理教学要求n人工主动免疫的概念，优缺点，主要制剂（灭活人工主动免疫的概念，优缺点，主要制剂（灭活疫苗、减毒活疫苗、类毒素、亚单位疫苗，基因疫苗、减毒活疫苗、类毒素、亚单位疫苗，基因工程疫苗）。工程疫苗）。n人工被动免疫的概念，优缺点，主要制剂（抗毒人工被动免疫的概念，优缺点，主要制剂（抗毒素，正常人丙球和胎球，人特异性素，正常人丙球和胎球，人特异性Ig）。）。n治疗用单克隆抗体的分类。治疗用单克隆抗体的分类。矢奸享渝摔晾界刨摔驭瓣傅个留颈殖穗姐迂表鼠兄乔腿搐恃游阳暴企竣拘第二十二章免疫学检测技术的基本原理第二十二章免疫学检测技术的基本原理
