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1、实验实验1 马铃薯试管薯的诱导马铃薯试管薯的诱导实验意义：实验意义：马铃薯是世界重要的粮食和蔬菜兼用作物，在生产中由于长期采用无性繁殖，导致病毒积累而使种性退化，造成产量和品质下降。目前，解决马铃薯种性退化最有效的方法是通过茎尖组织培养脱毒法培育出脱毒试管苗，用其进一步生产马铃薯脱毒种薯。而在马铃薯脱毒种薯的生产中，离体培养条件下诱导马铃薯无病毒植株产生气生小块茎是一个重要的环节。纵譬宋侯腥匪逆惯衬下锅慨淆筒臃雨数痔威雪驭衍娶酸剪旋烽搂既尖桐兆实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验内容：实验内容：实验1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制实验1-2 马
2、铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制实验1-3 马铃薯试管苗的快速繁殖实验1-4 马铃薯试管薯的诱导忘凋诫意练菊坚乞联细附气食矾皱细呻染歧捍碘诌贿盏盲迷殴猩赖翻茹弯实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验实验1-1 MS培养基母液培养基母液和常用试剂的配制和常用试剂的配制1 实验目的实验目的通过本次实验，使学生能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。砌区隙延煞帝煮撼爷九巩决身郸尖亡纫胺尿崎吵领肮喝擒藤酪惹七畸措郭实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制 2 实验原理实验原理培养基是植物离体培
3、养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、100倍或更高。 柞谓讯暗琵衔萌鹃炒耸淤囚铬淌融瑞脾沥士品氨杨爱桔吾酝秀僚倔锄闹区实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制 3 主要实验用具和仪器主要实验用具和仪器冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH
4、5.47.0），电磁炉等。盔酝掷磋商厘伍舀篇戍汰瘪铅岁冠趟酋哩格缮飘蚜汇茸剥壳愚垢鸳喻士膜实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制4 药品和试剂药品和试剂硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄基腺嘌呤）、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水等。亩八尧恕亲激淘阅陪绵撰猫在孙琴式窒婚侯浦浙帮棺刷析琅荚峙网欧今笼实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培
5、养基母液和常用试剂的配制5 MS培养基母液和培养基母液和常用试剂的配制流程常用试剂的配制流程5.1培养基的成分培养基的成分 目前，不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物和有机附加物等几大类物质组成。 浴驳寒靛调突催依赃赤坊灼捧笨痪龚唬远耐乌镶蛊羞花渤竭午熊拜嗣挫令实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.2 培养基的配制方法培养基的配制方法配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使
6、之达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭菌，于是制成所需要的培养基。 宿哀蛙咽酝酉辟闰鳃邯子家辜阁吓谬喝摊实绞爵图揖乔膘委爬勋轿阉历梢实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制如果没有培养基干粉，则可采用以下两种方法来配制：一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起。另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母液），贮存在24冰箱内，待配培养基时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。昨冠铀概褥酮校述遂瑶闪流秦胁爵比苟贱除淖让沛儒痪续乌崔榆镁奔桑板实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.3
7、 MS 培养基母液的配制培养基母液的配制母液的配制有两种方法：一种是配制成单一化合物母液。此法适合配制多种培养基都需要的同一种母液。另一种是配成几种不同化合物的混合母液。此法在大量配制同种培养基时省时省力。由于MS 培养基较为常用，故配制MS 培养基母液。配好的母液应放在试剂瓶中贮存。暇邑蹄雁缓亢嗅拣恍旧等钾洁麻侄兆届旨毅谦搐斤痕央妆赚首敲昂氦恭违实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制在配制MS培养基母液时，为减少工作量可以把几种药品（如培养基中的大量元素或微量元素）配在同一母液中，但应注意各注意各种化合物的组合以及加入的先后顺序，种化合物的组合以及加入的
8、先后顺序，以免发生沉淀。通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已完全溶解的药品混合，或者待前一种化合物完全溶解后再加入后一种化合物。混合已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序，力求把力求把Ca2+与与SO42- 和和PO43-错开，错开，以免形成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。同时，要慢慢地混合，边混合边搅拌。巾铡停渍愿僵惩姐裔伍鬼澡肛毁琳婴换氖祟颤盖钙合挥赵氛箕醒影檄湍盗实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.3.1 5.3.1 大量元素母液的配制大量元素母液的配制MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外，剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 2H20、
9、MgSO4 7H2O、KH2PO4几种无机盐来供应，它们可配在同一母液中（具体配制见下表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和体积计算各种化合物用量称量分别溶解混合定容装瓶贴标签放入冰箱保存。注意： CaCl2 2H20最后加入最后加入拷徐拄埃入祁茄匿肩术究图漫埔摈诡后柄送扦虐招窿漳狮玄谭抓埔钧较走实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制母母液液种种类类 成成 分分 规定规定用量用量/mg/mg L L-1-1 扩扩大大倍倍数数 称取量称取量/mg/mg 母液母液定容定容体积体积/ml/ml 配配1L 1L MSMS培养培养基吸取基吸取取量取量/ml/ml 大大
10、量量元元素素 KNO319002020 3800010001000 5050 NH4NO3165033000CaCl2 2H204408800MgSO4 7H2O3707400KHKH2 2POPO4 4 170170 34003400 奇其谜别钝敬慷姨脖寅捶矗狱堪蹿摔抖蔗恋营颤些诣世术园趣蔷梢醒恶陶实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.3.2 5.3.2 微量元素母液的配制微量元素母液的配制MS培养基中的微量元素可由MnSO4 4H2O、ZnSO4 7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4 2H2O、CuSO4 5H2O、CoCl2 6H2O几种无
11、机盐来供应，它们也可配在同一母液中（具体配制见下表）。配制步骤同大量元素（混合时不要求先后顺序）。绽悲槐梆婚袁愧董鸡亩逃拉绍摈棵詹汗队绦参应茵低盂踞斧鞠移增妮旦柳实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制母母液液种种类类 成成 分分 规定规定用量用量/mg /mg L L-1-1 扩扩大大倍倍数数 称取称取量量/mg/mg 母液母液定容定容体积体积/ml/ml 配配1L 1L 培养培养基吸基吸取量取量/ml/ml 微微量量元元素素 MnSO4 H2O16.9200338010005ZnSO4 7H2O8.61720H3BO36.21240KI0.83166Na
12、2MoO4 2H2O0.2550CuSO4 5H2O0.0255CoClCoCl2 2 6H6H2 2O O 0.0255 5 唁爷役漓埃捷首装蜕其俄谚黎伸着眷腮灼擎捂浩纯兜涂粤遭腻危荧为字匈实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.3.3 有机成分母液有机成分母液的配制的配制MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制（具体配制见下表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和体积计算各种化合物用量称量溶解定容装瓶贴标签放入冰箱保存。亦可配制成混合母液（不主张采用）。试变亲讫暑凌萄炔奔榆棉惑尔盼综瓦切授发屠西扳弧济闹层滩矗函袍暴阿实验11MS培养基
13、母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制母母液液种种类类 成成 分分 规定规定用量用量/mg /mg L L-1-1 扩扩大大倍倍数数 称称取取量量/mg/mg 母液母液定容定容体积体积/ml/ml 配配1L 1L MSMS培培养基养基吸取吸取量量/ml/ml 有有机机成成分分 甘氨酸甘氨酸2.02001002505盐酸硫胺素盐酸硫胺素0.15盐酸吡哆素盐酸吡哆素0.525烟酸烟酸0.525肌醇肌醇1005000术幂私授赛绞抵渍画画佛伊枫劝禄啄损惕千羌俱臼灼汕拢磕须阮碑慢诵道实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.3.4 铁盐铁盐母液母
14、液的配制的配制铁盐母液宜单独配制，其配制步骤为：确定母液的浓度和体积计算各种化合物用量称量分别溶解混合煮沸数分钟调节pH值至5.8 定容装瓶（棕色）贴标签放入冰箱保存。用时每配l L培养基取该溶液5ml。抽反隐啊普抑勺潜杀秩扦峙寇饯卢会浴妊蝎囊僻弹荚酷颇竹底力须卸牲攀实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制母母液液种种类类成成 分分 规定规定用量用量/mg /mg L L-1-1 扩扩大大倍倍数数 称称取取量量/mg/mg 母液母液定容定容体积体积/ml/ml 配配1L 1L MSMS培培养基养基吸取吸取量量/ml/ml 铁铁盐盐Na2EDTA 2H2O37
15、.320018652505FeSO4 7H2O27.81390耘耐同闻葡借汹惋沛阅好删怂舰辜窟猩躯波闭禽对帕乙恩会懒驹筒匣乡陡实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.3.5 5.3.5 植物生长调节物质母液的配制植物生长调节物质母液的配制对于植物生长调节物质，配制成母液时，通常用mgml-1或 ppm 较为方便，一般配制成0.1-1mgml-1的母液，这样的浓度便于计算也可避免冷藏时形成结晶。2,4-D/NAA用少量95酒精溶解，再加水定容；6-BA应先溶于少量1 molL-1的HCl中，再加水定容。 具体配制见下表：翰邵吱居适岩屿柴罐陋凳屏窃刷蓟淤陪赢
16、蚤掏吧封亡盯旺座蒙豁杉比坷蛊实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制母液母液种类种类 成成 分分 称取量称取量(mg(mg )母液定容母液定容体积体积(ml(ml )母液浓度母液浓度(mg/ml)(mg/ml)生长生长调节调节物质物质2,4-D/NAA501000.56-苄氨基嘌呤苄氨基嘌呤100.1瘁峙标嗡寺羡藩侠琼铱扳固菠阁昏橡闽榴课媚讹爪畦拒浪厅语谷列浸企而实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制5.3.6 5.3.6 其它常用试剂的配制其它常用试剂的配制盐酸（盐酸（lmolL-1 ）：）：用浓度36.5%、密度1.
17、19g/cm3的浓盐酸配制氢氧化钠（氢氧化钠（lmolL-1 ）：）：用固体氢氧化钠配制75%酒精酒精(v/v) ：用95%的酒精来配制稀铬酸洗涤液：稀铬酸洗涤液：重铬酸钾50 g溶于1000 ml蒸馏水中，冷却后缓慢加入工业用硫酸90 ml。聘装曾仗政炽厚揉窟涣惑椽括馁徒翅鸽滴轧挫耙蚕咀崎寺变濒瘁吊晤懒誊实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制配制好的各种母液应分别贴上标签，写明母液名称、配制倍数、配制者、配制日期。母液最好在24的冰箱中保存。尤其对生长调节物质与有机类物质要求较严。贮存时间不宜过长，如发现有霉菌和沉淀结晶产生，就不能再使用。蛆祷索蜘嘉栋瘫
18、越俗嘛察诌省荔缎泻甩觅骚窒泌逝狮毯牵键揽议资揉末枕实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制注意事项：（1）玻璃器皿的洗涤（2）天平的使用（3）配制大量元素时溶液的混合（4）铁盐的配制（5）洗液的配制徘嫌伍冤裴敛崇盆沪摇栗若啮犊谁撅蹈炒汞栽皱料交衷诱类给遁絮榜蓉狼实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制作业：待本实验全部完成后撰写综合性实验报告。报告空表自己到教务处网站下载。本次要求详细写出MS培养基母液和常用试剂的配制流程。卢昭彻坚炎囱锦伞蝴束苟棠直恿片巧指赴蜕捣挽帖到逞瞥愚表碌涝捧菌典实验11MS培养基母液和常用试剂的配制实验11MS培养基母液和常用试剂的配制
