保健食品安全性毒理学评价091101

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1、保健食品保健食品安全性毒理学安全性毒理学检验及评价检验及评价仲 伟 鉴上海市疾病预防控制中心2009.11第一部分第一部分中国保健食品简介中国保健食品简介保健食品定义保健食品定义 保健食品（保健食品（Functional FoodFunctional Food）系指具系指具有调节人体生理功能、适宜特定人群食用、有调节人体生理功能、适宜特定人群食用、不以治疗为目的的一类食品。不以治疗为目的的一类食品。 特特 点点q 具有特定的保健功能；具有特定的保健功能；q 无毒副作用，食用安全；无毒副作用，食用安全；q 有别于食品和药品；有别于食品和药品；q 增强体质、预防疾病为主；增强体质、预防疾病为主；q

2、 适用于特定人群。适用于特定人群。特特 定定 功功 能能q 由国家管理部门指定由国家管理部门指定q 允许申报的功能目前有允许申报的功能目前有27种种q 27种以外的功能，生产企业在获得足够种以外的功能，生产企业在获得足够的技术资料后（包括评价方案，试验数据的技术资料后（包括评价方案，试验数据及结果）向有关管理部门提出受理申请，及结果）向有关管理部门提出受理申请，接受评审。接受评审。特特 定定 人人 群群q正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳母、青少年、中老年、特殊工种的工作母、青少年、中老年、特殊工种的工作者以及常见病病人者以及常见病病人q对于营养保健有特殊的需

3、要对于营养保健有特殊的需要 膳食结构的不同膳食结构的不同 营养素需求的不同营养素需求的不同保健食品的发展历程保健食品的发展历程第一代保健食品第一代保健食品：在：在保健食品的管理方法保健食品的管理方法颁布颁布以前市场上已有的保健食品。以前市场上已有的保健食品。第二代保健食品第二代保健食品：经动物和人体实验证实具有某种：经动物和人体实验证实具有某种生理调节功能的食品。生理调节功能的食品。第第三三代代保保健健食食品品：不不仅仅需需要要经经人人体体及及动动物物实实验验证证实实具具有有某某种种功功能能，而而且且需需要要研研究究提提供供该该功功能能因因子子、含含量量及及其其作作用用机机理。理。发发 展展

4、趋趋 势势q根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功能根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功能q根据新的养生保健概念，开发新的保健功能根据新的养生保健概念，开发新的保健功能q根据现代营养科学理论，开发新的膳食有效成分根据现代营养科学理论，开发新的膳食有效成分q根据中医药理论，开发中药类有效成分根据中医药理论，开发中药类有效成分q根据生命科学理论，开发新的人体所需营养素根据生命科学理论，开发新的人体所需营养素保健食品开发中的注意点保健食品开发中的注意点q中草药中草药q新新资源资源q野生野生动植物及其产品动植物及其产品q核酸核酸类类q真菌真菌类类q益益生菌类生菌类q酶酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫

5、蛋白以及直制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接以微生物发酵的接以微生物发酵的中草药类中草药类q 中草药作为原料应注意中草药作为原料应注意：1.1.不不 能能 采采 用用 有有 明明 显显 毒毒 副副 作作 用用 的的 中中 药药 材材 、 获获国国家家药药政政管管理理部部门门批批准准的的中中成成药药、 受国家中药保护的中药成方受国家中药保护的中药成方2.2.用量应控制在临床用量的用量应控制在临床用量的50%50%以下以下新资源类新资源类q 新资源作为原料时必须具备的有关资料新资源作为原料时必须具备的有关资料：1.1.名称及国内外研究利用情况；名称及国内外研究利用情况；2.2.名称、配方及生产

6、工艺；名称、配方及生产工艺；3.3.产产品品成成分分（包包括括营营养养物物质质、有有生生物物效效应应物物质质及及有有毒毒有害物质等）的分析报告；有害物质等）的分析报告；4.4.安全性毒理学评价报告或有关文献资料；安全性毒理学评价报告或有关文献资料；5.5.个个别别地地区区有有食食用用习习惯惯的的应应提提供供有有关关食食用用历历史史的的证证明明资料；资料；6.6.质量标准。质量标准。野生动植物及其产品野生动植物及其产品类类q 以野生动植物及其产品为原料的有关限制以野生动植物及其产品为原料的有关限制：1.1.受保护的野生动物。受保护的野生动物。2.2.禁禁止止使使用用自自然然的的、人人工工驯驯养养

7、繁繁殖殖或或人人工工栽栽培培的的国国家家一级和自然的二级保护野生动植物及其产品。一级和自然的二级保护野生动植物及其产品。3.3.人人工工驯驯养养繁繁殖殖或或人人工工栽栽培培的的国国家家二二级级保保护护野野生生动动植植物物及及其其产产品品，国国家家保保护护的的有有益益的的或或者者有有重重要要经经济济、科科学学研研究究价价值值的的陆陆生生野野生生动动物物及及其其产产品品应应提提供供省省级级以上农业（渔业）、林业行政主管部门的批准文件。以上农业（渔业）、林业行政主管部门的批准文件。q以野生动植物及其产品为原料的有关限制以野生动植物及其产品为原料的有关限制：4.4.中中华华人人民民共共和和国国林林业业

8、植植物物新新品品种种保保护护名名录录中中植植物物及及其其产产品品，如如果果该该种种植植物物已已获获“品品种种权权”，应应提提供供该该种种植植物物品品种种权权所所有有人人许许可可使使用用的的证证明明；如如该该种种植植物物尚尚未未取取得得品品种种权权，应应提提供供国国务务院院林林业业主主管管部部门门出出具具的该种品种尚未取得品种权的证明。的该种品种尚未取得品种权的证明。5.5.进进口口保保健健食食品品中中使使用用濒濒危危野野生生动动植植物物种种国国际际贸贸易易公公约约名名录录中中动动植植物物及及其其产产品品的的，应应提提供供国国务务院院农农业业（渔渔业业）、林林业业行行政政主主管管部部门门批批准准

9、文文件件、进进出出口口许可证及海关的证明文件。许可证及海关的证明文件。野生动植物及其产品野生动植物及其产品类类核酸类核酸类q核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料：1.1.具体成份名称、来源、含量；具体成份名称、来源、含量；2.2.与所申报功能直接相关的科学文献依据；与所申报功能直接相关的科学文献依据；3.3.企企业业标标准准中中标标出出核核酸酸各各成成份份的的含含量量、纯纯度度和和相相应应的的定性、定量检测方法以及质量标准；定性、定量检测方法以及质量标准；4.4.详细生产工艺（包括加工助剂名称、用量）；详细生产工艺（包括加工助剂名称、用量）；5.5.核酸原料

10、纯度的检测报告。核酸原料纯度的检测报告。核酸类核酸类q核酸类保健食品申报时的注意事项核酸类保健食品申报时的注意事项：1.1.不得以单一的不得以单一的DNADNA或或RNARNA作为原料申报。作为原料申报。2.2.单一原料纯度应大于单一原料纯度应大于8080。3.3.功功能能申申报报范范围围暂暂限限定定为为免免疫疫调调节节功功能能。如如申申报报其其他他功功能能，需向卫生部提交申请并纳入审批范围后，方可申报。需向卫生部提交申请并纳入审批范围后，方可申报。4.4.核酸成份的每日推荐食用量为核酸成份的每日推荐食用量为0.6g-1.2g0.6g-1.2g。5.5.不得以不得以“核酸核酸”命名。命名。6.

11、6.说说明明书书及及标标签签中中的的“不不适适宜宜人人群群”除除按按保保健健食食品品相相关关规规定标注外，应明确标注出定标注外，应明确标注出“痛风患者痛风患者”。真菌类真菌类q真菌类保健食品的部分规定真菌类保健食品的部分规定 ：1.1.生产企业应建立有关的档案资料。生产企业应建立有关的档案资料。2.2.生产企业应具备相应的生产条件。生产企业应具备相应的生产条件。3.3.对生产菌种及工艺变更的相应规定。对生产菌种及工艺变更的相应规定。4.4.冠名规定。冠名规定。5.5.发发酵酵过过程程中中，除除培培养养基基外外，不不得得加加入入具具有有功功效效成成分分的动植物及其它物质。的动植物及其它物质。6.

12、6.不能使用经过基因修饰的菌种。不能使用经过基因修饰的菌种。益生菌类益生菌类q益生菌类保健食品的部分规定益生菌类保健食品的部分规定：1.1.生产用菌种应满足一定的条件。生产用菌种应满足一定的条件。2.2.生产企业应具备的一定条件。生产企业应具备的一定条件。3.3.菌种及生产工艺不得变更，否则产品必须重新申报。菌种及生产工艺不得变更，否则产品必须重新申报。4.4.不提倡以液态形式生产活菌产品。不提倡以液态形式生产活菌产品。5.5.在保存期内活菌数目不得少于在保存期内活菌数目不得少于 106cfu/mL(g) 106cfu/mL(g) 。益生菌类益生菌类q益生菌类保健食品的部分规定益生菌类保健食品

13、的部分规定：6.6.如需在特殊条件下保存，应在标签和说明书中标示如需在特殊条件下保存，应在标签和说明书中标示7.7.所所用用菌菌种种在在其其发发酵酵过过程程中中，除除培培养养基基外外，不不得得加加入入具有功效成分的动植物及其物质具有功效成分的动植物及其物质8.8.不能使用经过基因修饰的菌种不能使用经过基因修饰的菌种其他类别其他类别q对对酶酶制制剂剂、氨氨基基酸酸螯螯合合物物、金金属属硫硫蛋蛋白白以以及及直接以微生物发酵为原料限制的部分规定直接以微生物发酵为原料限制的部分规定：1.1.未未列列入入食食品品添添加加剂剂使使用用卫卫生生标标准准或或卫卫生生部部公公告告名名单单中中的的食食品品添添加加

14、剂剂新新品品种种的的酶酶制制剂剂不不得得用用于于保保健健食品的生产。食品的生产。2.2.不再审批以金属硫蛋白为原料生产的保健食品。不再审批以金属硫蛋白为原料生产的保健食品。其他类别其他类别q使使用用微微生生物物发发酵酵直直接接生生产产保保健健食食品品的的，需需提提供的特殊资料供的特殊资料：1.1.菌种来源及菌种检定报告菌种来源及菌种检定报告2.2.菌种的毒力试验报告及安全性评价报告菌种的毒力试验报告及安全性评价报告 3.3.国内外该菌种使用于食品生产的文献资料国内外该菌种使用于食品生产的文献资料 4.4.发发酵酵终终产产物物的的质质量量标标准准（包包括括纯纯度度、杂杂质质成成分分及及含含量）量

15、） 其他类别其他类别q使使用用氨氨基基酸酸螯螯合合物物生生产产保保健健食食品品的的，需需提提供供的特殊资料的特殊资料：1.1.提提供供明明确确的的化化学学结结构构式式、理理化化性性质质，配配体体与与金金属属离离子之比、游离元素和总元素之比。子之比、游离元素和总元素之比。 2.2.提供定性、定量的检测方法及验证报告。提供定性、定量的检测方法及验证报告。3.3.急急性性毒毒性性试试验验加加做做停停食食1616小小时时后后空空腹腹一一次次灌灌胃胃试试验验和和3030天喂养试验的组织病理报告。天喂养试验的组织病理报告。4.4.国内外使用于食品生产的文献资料。国内外使用于食品生产的文献资料。安全，无毒、

16、副作用安全，无毒、副作用功能，保健功效功能，保健功效理化、微生物特性：理化、微生物特性： 有害成分物质和污染物有害成分物质和污染物毒理学特性：毒理学特性： 剂量反应（效应）关系剂量反应（效应）关系保健食品质量控制保健食品质量控制生物活性物质生物活性物质功效成分功效成分通过检验和评通过检验和评价，加以控制价，加以控制第二部分第二部分保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学检验及评价检验及评价主主 要要 内内 容容q 检验评价依据检验评价依据q 审评基本要求审评基本要求q 选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则q 实验动物的选择实验动物的选择q 样品的预处理原则样品的预处理原则q 毒理学

17、试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q毒理学安全性评价时应考虑的问题毒理学安全性评价时应考虑的问题q审评结论的判定审评结论的判定毒性及功能检验评价依据毒性及功能检验评价依据19961996年年3 3月卫生部月卫生部保健食品的管理方法保健食品的管理方法 保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法19961996年年7 7月月GB15193GB15193食品安全性毒理学评价程序和方法食品安全性毒理学评价程序和方法 卫生部卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法保健食品功能学评价程序和检验方法 仅包含了仅包含了1212项功能检验及评价方法项功能检

18、验及评价方法20012001年年7 7月月 卫生部卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法保健食品功能学评价程序和检验方法 可受理和评价的功能调整到可受理和评价的功能调整到3131项项20032003年年2 2月卫生部月卫生部保健食品检验与评价技术规范保健食品检验与评价技术规范 将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一审评的基本要求审评的基本要求1. 1. 配方配方 原（辅）料、用量、理化性质原（辅）料、用量、理化性质2. 2. 剂量剂量 食用方法及用量食用方法及用量3. 3. 工艺工艺 规格化产品规格化产品 符合配方、工艺

19、、质量标准符合配方、工艺、质量标准4. 4. 批号批号 注意批号是否一致注意批号是否一致, ,益生菌、奶制品等保质期短的除外益生菌、奶制品等保质期短的除外1. 1. 毒理学评价的四个阶段毒理学评价的四个阶段第一阶段：急性毒性试验第一阶段：急性毒性试验 经口急性毒性试验：经口急性毒性试验：LD50LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，第二阶段：遗传毒性试验，3030天喂养试验，传统致畸试验天喂养试验，传统致畸试验 遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合Ames

20、Ames或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验第三阶段：亚慢性毒性试验 9090天喂养试验、繁殖试验、代谢试验天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则2.2.一般无需进行毒性试验的原料或成分一般无需进行毒性试验的原料或成分属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质：属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质：q采用传统的工艺及食用方式采用传统的工艺及食用方式q水提取物，常规服用量，无不安全

21、性报道水提取物，常规服用量，无不安全性报道q来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂 或营养素补充剂或营养素补充剂选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则3. 3. 需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分 属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺生产的：提以外的其它常用工艺生产的：（1 1）服用量与常规用量相同）服用量与常规用量相同 急性毒性、三项致突变试验急性毒性、三项致突变试验（2 2）服用量大于常规用量）服用量大于常规用

22、量 还需加做还需加做3030天喂养试验，必要时进行传统致畸试天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验验和第三阶段毒性试验选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则4.4.需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分q文献显示无危害，人群长期食用；文献显示无危害，人群长期食用；q具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产 品质量规格与国外产品一致；品质量规格与国外产品一致；q国外广泛食用且能提供安全性评价资料；国外广泛食用且能提供安全性评价资料；q卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物。卫生部规定允

23、许使用的动植物及其提取物或微生物。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则5.5.需进行一至三阶段毒性试验的情况：需进行一至三阶段毒性试验的情况：q一、二阶段试验结果与国外产品不一致的一、二阶段试验结果与国外产品不一致的q国外少数国家或地区食用的原料或成分国外少数国家或地区食用的原料或成分q水提取物，大于常规服用量水提取物，大于常规服用量q用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则6.6.需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分国内外均无食用先例国内外均无食用先

24、例7.7.敏感指标及敏感试验的保健食品敏感指标及敏感试验的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则8.8.保健食品新原料保健食品新原料 保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保健食品的原料。围内，拟用于保健食品的原料。 国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定国家食品药品监督管

25、理局和国家有关部门规定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料。为新原料。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则 在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：理：q未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品名单；品的物品名单；q尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；品

26、名单内；q卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不一致。明的申报单位不一致。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 无食用史无食用史 需做四阶段试验需做四阶段试验 局部地区有食用史局部地区有食用史 需做三阶段试验需做三阶段试验 其中其中 ，100100倍倍 摄入量摄入量300300倍倍 需做第四阶段试验需做第四阶段试验 有食用史有食用史 需做二阶段试验需做二阶段

27、试验 经评价后经评价后 下一阶段试验下一阶段试验 广泛食用的原料广泛食用的原料 二阶段试验二阶段试验 （食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）（食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 已知化学物已知化学物: : -1 -1 可只做二阶段实验的包括可只做二阶段实验的包括 已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价 有资料证明所用原料与其一致有资料证明所用原料与其一致 -2 -2 如试验结果与权威机构进行的评价不一致，如试验结果与权威

28、机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验需进入下阶段的试验 有新原料的保健食品有新原料的保健食品: : 根据试验结果综合分析。根据试验结果综合分析。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则对受试保健食品的要求对受试保健食品的要求q 单一已知化学成分，应提供物理和化学性质单一已知化学成分，应提供物理和化学性质q 多种原料的配方产品，应提供配方多种原料的配方产品，应提供配方q 配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的 q 物理和化学性质及其检测报告物理和化学性质及其检测报告q 提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使提供原料来源、生产工艺、人的

29、可能摄入量。使q 用说明书等有关资料用说明书等有关资料q 受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品实验动物的选择及给样量实验动物的选择及给样量1.1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.2.动物应符合动物应符合实验动物管理条例实验动物管理条例 清洁级或清洁级以上清洁级或清洁级以上 动物合格证号及动物实验室合格证号动物合格证号及动物实验室合格证号3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kg10 ml/kgBWBW（

30、若以水为溶剂，推荐若以水为溶剂，推荐 20 ml/20 ml/kgkgBWBW） 小鼠：小鼠：20ml/kg20ml/kgBWBW样品的预处理原则样品的预处理原则1.1.介质的选择介质的选择 应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。与受试物不发生反应、稳定性好。 常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。纤维素等。2.2.液体类液体类 受试物浓缩倍数应符合试验要求。受试物浓缩倍数应符合试验要求。 浓缩方法不应破坏其有效成份，常

31、用的有浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有60607070减压或减压或常压蒸发、冷冻干燥。常压蒸发、冷冻干燥。 按工艺要求。按工艺要求。样品的预处理原则样品的预处理原则3.3.袋泡茶类袋泡茶类 处理方法与产品推荐饮用方法相同处理方法与产品推荐饮用方法相同 推荐用：推荐用：80-90 80-90 常压用水浸泡常压用水浸泡30min30min 水量为受试物的水量为受试物的1010倍，提取倍，提取2 2次，次，2 2次提取液合并浓缩至次提取液合并浓缩至所需浓度所需浓度 标明该浓缩液与受试物的比例标明该浓缩液与受试物的比例样品的预处理原则样品的预处理原则4.4.含乙醇类含乙醇类（1 1）不需浓缩的受试

32、物）不需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度151515 乙醇浓度应调至乙醇浓度应调至1515（2 2）需浓缩的受试物）需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度151515 浓缩后调至浓缩后调至1515乙醇浓度乙醇浓度 在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基样品的预处理原则样品的预处理原则5.5.膨胀系数较高的受试物膨胀系数较高的受试物 选择可溶性介质选择可溶性介质 给受试物的方法：灌胃给受试物的方法：灌胃 其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100100倍，按倍，按实际达到的倍数实际达到的倍数 标明受试物的膨胀系数标明受试物的膨胀系数样

33、品的预处理原则样品的预处理原则6.6.益生菌等微生物类保健食品益生菌等微生物类保健食品 在进行在进行 AmesAmes试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。 需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。技术参数）。7.7.以食品为载体的受试物以食品为载体的受试物 （1 1）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。 （2 2）大豆蛋白、乳清蛋白）大豆蛋白、乳清蛋白 如质量、工艺等符合食品标准

34、和安全要求，允许去除。如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。 如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q 急性经口毒性试验急性经口毒性试验q 鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（AmesAmes）试验试验q 骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验q 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验q 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验q 小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验q 3030天喂养试验天喂养试验急性经口毒性试验急性经口毒性试验目的：目的：测定测定LDLD5050，毒性分级。了解毒

35、性强度、性质和可能的靶毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。原理：原理：急性毒性：经口一次性、急性毒性：经口一次性、24h24h内多次给予，短时间内的毒性反内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂量通常用半数致死剂量应。致死剂量通常用半数致死剂量LDLD5050表示。表示。急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定

36、这三种不同的作用。确定这三种不同的作用。急性经口毒性试验急性经口毒性试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-53-5天，大、小鼠适应期天，大、小鼠适应期 7-147-14天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 发生动物死亡时，应进行大体解剖发生动物死亡时，应进行大体解剖观察和评价指标观察和评价指标：毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化化死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。死亡情况：死亡的时间、数

37、量、性别、表现等。大体尸检结果：如果发生死亡动物大体尸检结果：如果发生死亡动物急性毒性（急性毒性（LDLD5050）剂量分级表剂量分级表级级 别别大鼠口服大鼠口服LD50， mg/kg相当于人的致死量相当于人的致死量mg/kgg/人人极毒极毒150005000002500急性经口毒性试验急性经口毒性试验试验结果的判定：试验结果的判定：1. LD501. LD50人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，放弃；反之继续下倍，放弃；反之继续下一步试验。一步试验。2. LD502. LD5010g/kgbw10g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出现动或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一

38、步试验。物死亡的，可继续下一步试验。鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验目的：目的：检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。能性。 时间周期：时间周期：一般为一般为2 2周周 第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养第二周，染毒，培养48h48h，读平板，菌落计数，读平板，菌落计数剂量设计：剂量设计：决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为最低剂量为0.2ug/0.2ug/皿；

39、最高剂量为皿；最高剂量为5mg/5mg/皿，或最大溶解剂量，最大皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过5 5倍。倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验观察及评价指标：观察及评价指标： 各受试物组及三个对照组的四种菌株（各受试物组及三个对照组的四种菌株（TA97aTA97a，TA98TA98，TA100TA100和和TA102TA102）分别在加和不加）分别在加和不加S9S9情况下的菌落计数。情

40、况下的菌落计数。结果评价（掺入法）：结果评价（掺入法）： 受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数22未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性。的阳性反应，即可判试验阳性。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验目的目的：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性。价受试物致突变的可能性。原理原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，

41、仍然留在细胞质中的色单体或染色体的形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片无着丝点断片 。末期之后，单独形成一个或几个规则的。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验时间周期时间周期：一般为：一般为2 2周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口染毒，小鼠经口染毒，30h30h给受试物法给受试物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计剂量设计：至少设置：至少设置3 3个剂量，最高剂量组为动物出现严

42、重中个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和毒表现和/ /或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取性反应。一般取LD50LD50的的1/21/2、1/41/4、1/81/8作为三个剂量。当受试作为三个剂量。当受试物的物的LD5010g/kg.bwLD5010g/kg.bw时，最高剂量通常采用时，最高剂量通常采用10g/kg.bw10g/kg.bw。同时。同时设阳性对照组和溶剂对照组。设阳性对照组和溶剂对照组。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物计数每只动物计数10001000个嗜多染红细胞个嗜多染

43、红细胞 ，记录含有微核的细，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率。观察嗜多染红细胞与成熟红胞数，并计算微核千分率。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。细胞的比例。 结果评价结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。有统计学意义，试验结果为阳性。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的目的：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性。突变性，以评价其致突变的可能性。原理原理：当受试物作用于细胞周期：当受试

44、物作用于细胞周期G1G1期和期和S S期时，可诱发染期时，可诱发染色体型畸变，而作用于色体型畸变，而作用于G2G2期时则诱发染色体单体型畸变。期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。态。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-53-5天适应期天适应期

45、小鼠或大鼠经口染毒小鼠或大鼠经口染毒2-42-4次，每次间隔次，每次间隔24h24h，在，在末次染毒末次染毒18-24h18-24h进行取材（取材前进行取材（取材前2-4h2-4h，腹腔注射秋水，腹腔注射秋水仙素）。仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100100个中期相细胞个中期相细胞 ，每个剂量组不少于，每个剂量组不少于10001000个。记录染色体数目及结构的改变。个。记录染色体

46、数目及结构的改变。结果评价结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。关系并有统计学意义，试验结果为阳性。小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验目的目的：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。内生殖细胞的致突变作用。原理原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及色体及X X、Y Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要

47、是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。其蛋白产物的改变。小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，于首次给样后的天，于首次给样后的3535天天处死动物处死动物 取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验

48、观察及评价指标观察及评价指标：每只动物检查每只动物检查10001000个精子个精子 ，记录精子畸形数目及类，记录精子畸形数目及类型。型。结果评价结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验目的目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。原理原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感：不同周期

49、的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过须经过DNADNA复制期，故在前细线期处理。第复制期，故在前细线期处理。第121214d14d采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。体畸变效应。小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，与首次给样后的天，与首次给样后的12-1412-14天处死动物取材，（取材前天处死动物取材，（取材前6h6h，

50、腹腔注，腹腔注 射秋射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100100个中期相细胞个中期相细胞 ，记录染色体数目，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。染色体单价体、性染色体单价体等）。结果评价结果评价：受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常受试物组与对照组的断片、易位、

51、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。义，试验结果为阳性。遗传毒性试验组合遗传毒性试验组合试验结果的判定试验结果的判定：如三项致突变试验（如三项致突变试验（AmesAmes试验，微核或骨髓细胞染试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。受试物用于保健食品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的

52、毒性试验。试验。30天喂养试验天喂养试验目的目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。入的危害性。原理原理： 以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续物，连续3030天。染毒期间每日密切观察动物的毒性天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，

53、以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。起的有害作用。30天喂养试验天喂养试验时间周期时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为：在获得了急性毒性数据后，一般为2 2月月 3-53-5天，大鼠适应期天，大鼠适应期 3030天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 再进行大体解剖、血液、生化、器官病再进行大体解剖、血液、生化、器官病 理检查。理检查。30天喂养试验天喂养试验剂量设计剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不能引起动物明显毒效应但不造

54、成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。组。 对于能获得对于能获得LD50LD50的受试物的受试物：最高剂量为：最高剂量为10102525的的LD50LD50，最低剂量组至少为人可能摄入量的，最低剂量组至少为人可能摄入量的3 3倍。倍。 对于不能获得对于不能获得LD50LD50的受试物的受试物：最高剂量为人可能摄：最高剂量为人可能摄入量的入量的100100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。入量。30天喂养试验天喂养试验观察及评价指标观察及评价指标：一般情况观察一般情

55、况观察：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周1 1次体重及次体重及2 2次食物摄入量，计算食物利用率。次食物摄入量，计算食物利用率。血液学指标血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。生化学指标生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。病理检查病理检查：大体解剖

56、、脏器称重、组织病理学检查。：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。30天喂养试验天喂养试验试验结果的判定试验结果的判定： 对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，综合其它试验结果可初倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。步做出安全性评价。 最小观察到有害作用剂量最小观察到有害作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，或倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例1010，放弃。放弃。 在中低剂量组中个别指标与对照

57、组相比有差异，应综合在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。其它试验结果判断其它试验结果判断q 传统致畸试验传统致畸试验： 需大于或等于人摄入量的需大于或等于人摄入量的100100倍。在倍。在5050倍至倍至100100倍之间需倍之间需进行安全性评价，小于进行安全性评价，小于5050倍需放弃。倍需放弃。q 9090天喂养试验、繁殖试验天喂养试验、繁殖试验：1.1.仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的分，需大于或等于人摄入量的1

58、00100倍。倍。2.2.国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量的入量的300300倍。在倍。在100100倍至倍至300300倍之间需进行慢性毒性试验，倍之间需进行慢性毒性试验，小于小于100100倍需放弃。倍需放弃。其它试验结果判断其它试验结果判断q 慢性毒性试验慢性毒性试验： 以以LD50LD50或或3030天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。物各剂量组，未见有毒性作用。q 致癌试验阳性判定依据致癌试验阳性判定依据：肿瘤只发生在实验组动物，对照

59、组中无肿瘤发生肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性为致癌试验阳性。安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的艺术性安全性评价的艺术性：1.1.动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；2

60、.2.安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；3.3.安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。结论结论：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据。际指导意义的依据。应综合考虑的问题应综合考虑的问题1.1.试验指标的统计学意义和生物学意

61、义试验指标的统计学意义和生物学意义 在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则对照值范围比较的原则, ,来综合考虑指标差异有无来综合考虑指标差异有无生物学意义生物学意义。2.2.生理作用与毒性作用生理作用与毒性作用 对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。应综合考虑的问题应综合考虑的问题3.3.时间时间- -毒性效应关系毒

62、性效应关系 对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况情况。4.4.特殊人群和敏感人群特殊人群和敏感人群 对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性免疫毒性。应综合考虑的问题应综合考虑的问题5.5.人的可能摄入量较大的保健食品人的可能摄入量较大的保健食品 应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物

63、利用率，从而导致某些毒理学素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物本身的毒性作用所致表现，而非受试物本身的毒性作用所致。6.6.含乙醇的保健食品含乙醇的保健食品 对实验中出现的某些指标的异常改变，在结对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用分的作用。应综合考虑的问题应综合考虑的问题7.7.动物年龄对试验结果的影响动物年龄对试验结果的影响 对实验中出现的某些指标的异常改变，要考对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年龄选择不当所致。虑是否因动物年龄选择不当所致。8.8.安全系数

64、安全系数 鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为异，安全系数通常为100100。应综合考虑的问题应综合考虑的问题9.9.人体资料人体资料 在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料食用受试物后反应的资料。10.10.综合评价综合评价 在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用范围、人的蓄积性、接触的人群范围、

65、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的安全性安全性。应综合考虑的问题应综合考虑的问题11.11.保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可 能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价。适用需重新评价。12.12.若受试物掺入饲料的最大加入量（若受试物掺入饲料的最大加入量（1010）或液体）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其量为

66、人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验结果进行安全性评价。它的毒性试验结果进行安全性评价。审评结论的判定审评结论的判定1.1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证明受试物的安全性。结果能够证明受试物的安全性。2.2.属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：（1 1）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒理学试验报告。毒理学试验报告。（2 2）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。（3 3）

67、未提供某些试验数据，需要补充提供。）未提供某些试验数据，需要补充提供。审评结论的判定审评结论的判定3.3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：（1 1）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产品的安全性，需要做除法评价产品的安全性，需要做除3030天天/90/90天喂养天喂养试验以外的毒理学试验；试验以外的毒理学试验；（2 2）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复试验。结论，需要重复试验。（1 1）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具

68、）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒性，存在安全性问题。有一定的毒性，存在安全性问题。（2 2）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有含有“可用于保健食品的原料可用于保健食品的原料”名单以外的原料，名单以外的原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价。且未进行新资源食品安全性毒理学评价。（3 3）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒理学试验。应阶段的毒理学试验。4.4.对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：（4 4）

69、毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致。批号不一致。（5 5）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。（6 6）3030天天/90/90天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不可信。常，结果不可信。4.4.对产品的安全性不予认可的情况如下对产品的安全性不予认可的情况如下( (二二) )：第三部分第三部分保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学评价中存在的问题评价中存在的问题存在的问题存在的问题 鉴鉴于于制制订订此此程程序序的的历历史史背背景景与与目目前前情情

70、况况有有所所不不同同，因因此此，对对保保健健食食品品的的安安全全性性评评价价时时，出出现现了了选选择择毒毒理理试试验验的的项项目目、剂剂量量、样样品品前前处处理理等等问问题题，现现就上述问题一并提出供讨论。就上述问题一并提出供讨论。存在的问题存在的问题q 充分了解受试物充分了解受试物1.1.要要求求提提供供规规格格化化产产品品，至至少少是是中中试试产产品品。符符合合既既定的配方，生产工艺和质量标准。定的配方，生产工艺和质量标准。2.2.仔仔细细阅阅读读配配方方以以了了解解受受试试物物的的物物理理、化化学学性性质质（包括化学结构、纯度、稳定性等）。（包括化学结构、纯度、稳定性等）。3.3.了解生

71、产工艺。了解生产工艺。4.4.按产品说明书的最大人体推荐量进行剂量设计。按产品说明书的最大人体推荐量进行剂量设计。存在的问题存在的问题q 动物年龄动物年龄 主主要要指指3030天天和和9090天天喂喂养养试试验验，“程程序序”中中规规定定用用离离乳乳大大鼠鼠，而而保保健健食食品品应应视视具具体体情情况况而而异异。最最典典型型的的是是人人参参、鹿鹿茸茸、减减肥肥产产品品，并并非非受受试试物物本本身身有有毒毒影影响响了了动动物物的的生生长长发发育育，而而是是因因为为这这类类产产品品的的服服用对象是成人，所用的动物是离乳大鼠。用对象是成人，所用的动物是离乳大鼠。存在的问题存在的问题q实验项目的选择实

72、验项目的选择1.1.配配方方中中含含有有仅仅限限局局部部地地区区人人群群食食用用而而又又不不在在“5151号号”名名单单上上的的原原料料，只只对对产产品品进进行行了了两两阶阶段段毒毒理理试试验验，而而未未对对原原料料本本身身按按要要求求进进行行毒毒理理学学评评价价，有有的的进进行行了了评评价价但但给给予予动动物物受受试试物物的的方方式式与与实实际际食食用用方方式式不不一样，如袋泡茶掺在饲料中给予动物。一样，如袋泡茶掺在饲料中给予动物。2.2.含含“5151号号”文文附附录录二二名名单单上上原原料料的的产产品品只只做做了了LD50LD50和三项致空变试验。和三项致空变试验。存在的问题存在的问题q

73、实验项目的选择实验项目的选择3.3.药药食食同同源源产产品品经经有有机机溶溶剂剂提提取取未未做做毒毒理理试试验验，或只做或只做LD50LD50和微核试验。和微核试验。4.4.从从食食品品中中提提取取某某一一成成分分的的粗粗提提物物只只做做了了LD50LD50和和三项致突变试验，如大豆异黄酮。三项致突变试验，如大豆异黄酮。5.5.配配方方中中仅仅有有单单一一成成分分，如如人人参参、西西洋洋参参、蜂蜂王王浆不必进行全部二阶段毒理试验。浆不必进行全部二阶段毒理试验。存在的问题存在的问题q样品前处理样品前处理（一）液体类（一）液体类（二）酒类（二）酒类（三）固体类（三）固体类（四）菌类（四）菌类（五五

74、）以以某某些些食食品品为为载载体体的的保保健健食食品品：如如富富含含微微量量元素的鸡蛋、南瓜粉等元素的鸡蛋、南瓜粉等存在的问题存在的问题qLDLD5050中存在的问题中存在的问题 1.1.经口经口LD50LD50还用对照组。还用对照组。 2.2.不写禁食时间。不写禁食时间。 3.3.做到了做到了21.5g/KgBW,21.5g/KgBW,结论是结论是10g/KgBW10g/KgBW。 4.4.将受试物掺入饲料吃将受试物掺入饲料吃2424小时。小时。存在的问题存在的问题qAmesAmes实验实验 1.1.以油为载体的产品直接倒入平皿以油为载体的产品直接倒入平皿 2.2.工工艺艺是是低低温温提提取

75、取或或低低温温冷冷冻冻干干燥燥的的产产品品用用8 8磅磅1515分钟高压灭菌。分钟高压灭菌。 3.3.有溶剂对照而无自发回变对照。有溶剂对照而无自发回变对照。 4.4.菌菌落落回回变变数数随随剂剂量量的的增增加加而而增增多多已已超超过过正正常常值值而不是二倍而出具了合格的报告而不是二倍而出具了合格的报告存在的问题存在的问题qAmesAmes实验实验 5.5.有有抑抑菌菌作作用用的的产产品品不不进进行行预预试试验验找找出出抑抑菌菌剂剂量量而而出出具了具了5mg/5mg/皿菌落回变数正常的报告。皿菌落回变数正常的报告。 6.6.产产品品中中明明显显含含有有组组氨氨酸酸，而而不不进进行行除除组组氨氨

76、酸酸的的前前处处理。理。 7.7.应该用应该用XAD-2XAD-2树脂对样品进行前处理树脂对样品进行前处理 8.8.没没有有理理解解5mg/5mg/皿皿含含义义：系系指指有有效效成成份份，如如某某些些产产品品含含有有80%80%的的糖糖，没没进进行行样样品品前前处处理理或或向向送送样样方方提提出出要求，直接用产品做要求，直接用产品做5mg/5mg/皿，实际上是皿，实际上是1mg/1mg/皿。皿。存在的问题存在的问题q 微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验 1.1.微微核核试试验验：几几份份报报告告中中都都有有阳阳性性对对照照的的数数据据，而这几份原始记录中皆

77、无阳性对照。而这几份原始记录中皆无阳性对照。 2.2.精精子子畸畸形形试试验验：阳阳性性对对照照组组精精子子畸畸形形率率3.4%3.4%，即即判判断断阴阴性性对对照照组组与与阳阳性性对对照照组组相相比比差差异异有有显显著性著性P0.05P0.05。（正常畸形率为。（正常畸形率为0.8-3.4%0.8-3.4%）。）。 3.3.睾睾丸丸染染色色体体畸畸变变试试验验：阳阳性性对对照照持持续续应应用用一一年年以上。以上。存在的问题存在的问题q 3030天或天或9090天喂养实验天喂养实验1.1.雌性鼠的体重比雄性鼠还重或一样重雌性鼠的体重比雄性鼠还重或一样重 148.33 8.38172.28 10

78、.93194.82 10.92215.46 14.68231.50 15.15189.83 14.66239.52 17.56288.33 16.92324.14 19.80357.24 22.7267891014.03 2.0330.68 3.2247.61 5.3579.52 6.70118.53 7.1214.442.0730.62 4.5649.02 6.1986.86 8.98137.72 11.6912345雄（雄（n=30) 雌（雌（n=30)雄（雄（n=30) 雌（雌（n=30)体重体重(g)周周龄龄（周）周）体重体重(g)周周龄龄（周）（周）存在的问题存在的问题q 3030天

79、或天或9090天喂养实验天喂养实验2.2.食食物物利利用用率率雌雌雄雄分分不不开开，或或为为将将雌雌、雄雄性性大大鼠鼠食食物物利利用用率率拉开差距，雌性和雄性大鼠的进食量基本一致。拉开差距，雌性和雄性大鼠的进食量基本一致。3.3.大鼠的进食量越来越高，雌性大鼠大鼠的进食量越来越高，雌性大鼠700700多克、多克、 4.4.雄性大鼠雄性大鼠600600多克，而体重与食物利用率和以前的差不多。多克，而体重与食物利用率和以前的差不多。5.5.剂剂量量设设计计：相相当当于于推推荐荐量量（以以g/Kg g/Kg BWBW计计）的的6.566.56、2626和和105105倍，这是先设计再做试验，还是先做

80、试验再设计？倍，这是先设计再做试验，还是先做试验再设计？6.6.受试物掺入饲料的量高达受试物掺入饲料的量高达18%18%，袋泡茶掺入饲料给予动物。，袋泡茶掺入饲料给予动物。 存在的问题存在的问题q 3030天或天或9090天喂养实验天喂养实验7.7.动动物物摄摄入入饲饲料料的的量量在在3030天天喂喂养养试试验验以以体体重重的的10%10%计计，9090天天喂喂养养试试验验以以体体重重的的8%8%计计，这这是是经经过过大大量量资资料料统统计计得得出出，但但将将受受试试物物以以10-20%10-20%的的浓浓度度饮饮水水给给予予动动物物，又又不不计计饮饮水水量量，与与报报告告的的剂剂量量设设计计

81、是是否否基基本本一一致致？有有的的按按每每100gBw100gBw给给10ml10ml含有受试物的水，饮毕再给饮用水？含有受试物的水，饮毕再给饮用水？8.8.有的试验动物体重增长缓慢，解释是受试物不好吃。有的试验动物体重增长缓慢，解释是受试物不好吃。9.9.生生 化化 指指 标标 ： 不不 做做 TGTG、 ASTAST； TCTC高高 达达 2.8mmol/L2.8mmol/L；BUN12.9mmol/LBUN12.9mmol/L。存在的问题存在的问题q 3030天或天或9090天喂养实验天喂养实验10.10.以以大大鼠鼠为为试试验验动动物物测测尿尿酸酸，大大鼠鼠的的代代谢谢与与人人不不完完

82、全全一一样样，可将尿酸转化为尿囊素排出。可将尿酸转化为尿囊素排出。11.11.病病理理报报告告：心心肝肝脾脾无无毒毒性性损损伤伤，两两个个产产品品，两两份份报报告告来来自自同同一一检检测测单单位位；A4A4纸纸写写了了一一大大篇篇，详详细细描描述述了了病病理理组组织织结结构构，没没有有一一点点异异常常，四四个个产产品品、四四份份报报告告来来源源同同一一检检验验单单位位；写写一一小小段段也也比比较较详详细细的的描描述述了了病病理理组组织织结结构构，亦亦无无任何异常三个产品、三份报告亦来源于同一检验单位。任何异常三个产品、三份报告亦来源于同一检验单位。存在的问题存在的问题q 传统致畸试验传统致畸试

83、验 其其剂剂量量设设计计比比3030天天喂喂养养还还高高，程程序序已已明明确确以以亚亚急急性性试试验验的的最最大大无无作作用用剂剂量量为为高高剂剂量量，目目的的是是：找找强强致致畸畸物物，即即具具有有致致畸畸作作用用，但但无无母母体体毒毒性性出出现现，这种受试物致畸作用往往较强这种受试物致畸作用往往较强存在的问题存在的问题q 其他典型问题其他典型问题 推推荐荐量量较较大大的的产产品品，同同一一检检测测单单位位，3030天天喂喂养养试试验验进进行行了了样样品品前前处处理理达达到到足足够够倍倍数数，但但LD50LD50、三三项项致致突突变变试试验验未未进进行行样样品品前前处处理理，相相当当于于人人推推荐荐量量的的倍倍数数很很低低；样样品品进进行行了了前前处处理理但但折折合合到到样样品品的的量量不不一一致致；样样品品进进行行了了前前处处理理，但但报报告告中中写写取取一一定定量量的的样样品品用用回回旋旋蒸蒸发发仪仪浓浓缩缩至至所所需需浓浓度度，剂剂量量设设计计写写的的是是2525、5050、100ml/KgBw100ml/KgBw；有有的的报报告告要要从从字字里里行行间间为为依依据据替替检检测测单单位位计计算算出出剂剂量量设设计是否正确；计是否正确；AmesAmes试验的剂量以每皿试验的剂量以每皿% %之多少计。之多少计。谢谢 谢谢