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1、(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交植物体细胞杂交过程示意图过程示意图杂杂种种植植株株融合的融合的原生质原生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法?方法?促进融合促进融合的的方法方法?融合融合完成完成的的标志标志植物细胞植物细胞B 植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术过程过程动物细胞与植物细胞的差别:无细胞壁全能性受限制,不能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同:不需
2、去除细胞壁不能发育成新的动物个体一、动物细胞融合(细胞杂交)1、概念:指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果:形成单核的杂交细胞3、原理: 细胞膜的流动性4、诱导方式物理法:离心、振动、电激化学法:聚乙二醇(PEG)生物法:灭活的病毒不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂5、动物细胞融合过程5、过程:动物细胞A动物细胞B诱导,融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂(膜融合、质融合)(核融合)注意:动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起,让它们随机融合后,再从中筛选杂交细胞6、意义:突破了有性
3、杂交方法的局限,使远缘杂交(种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。7、应用:成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法(同左)(同左)灭活的病毒灭活的病毒物理(离心、振物理(离心、振动动、电刺激)电刺激)化学(聚乙二醇)化学(聚乙二醇)诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动
4、性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较二、单克隆抗体传统的抗体生产办法及缺陷是什么?抗体由什么细胞产生?B淋巴细胞每个每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体抗体要想获得大量的单一抗体,必须克隆单一的B淋巴细胞,形成细胞群1975,米尔斯坦和柯勒 杂交瘤技术设计方案:设计方案:一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖化学性质单一、特异性强的抗体。化学性质单
5、一、特异性强的抗体。杂种细胞杂种细胞2.2.制备过程:制备过程:诱导其融合的方法有哪些?诱导其融合的方法有哪些?融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞怎样筛选出杂交瘤细胞,杂交怎样筛选出杂交瘤细胞,杂交瘤细胞有何优点瘤细胞有何优点注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么为何要进行克隆化培养和专为何要进行克隆化培养和专一抗体检测,多次筛选一抗体检测,多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法抗的方法1、原理:杂交瘤细胞具有两个亲本的特性,即能迅速大量增殖,又能足够数量的单一抗体。2、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞(
6、 B-瘤细胞)克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外,还除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外,还有什么方法?有什么方法?3. 3.单克隆抗体的应用:单克隆抗体的应用:单克隆抗体的优点:特异性强、灵敏度高、产单克隆抗体的优点:特异性强、灵敏度高、产量大量大 作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质,并与作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质,并与特异性结合特异性结合 优点:优点:准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物:制成运载药物:制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病:主要用于癌症治疗治疗疾病:主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞,又减少了用
7、药剂量。既不损伤正常细胞,又减少了用药剂量。一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,得到杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆得到杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆抗体,与骨髓瘤细胞融合的是(抗体,与骨髓瘤细胞融合的是( ) A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴
8、细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-( )A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中,正确的是(动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中,正确的是( )A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 B.C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 A D4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-( )A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D