紫外吸收光谱法

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1、第九章第九章 紫外吸收光谱法紫外吸收光谱法Ultraviolet Molecular Absorption Spectrometry 利用紫外吸收光谱进行定量分析的由来已久，公元60年古希腊已知道利用五味子浸液来估计醋中铁的含量。这一古老的方法由于最初是运用人的眼睛来进行检测，所以叫比色法。20世纪30年代产生了第一台光电比色计，40年代出现的 BakmanUV 分光光度计, 促进了新的分光光度计的发展。随着计算机的发展，紫外分光光度计已向着微型化自动化在线和多组分同时测定等方向发展。 一、分子内部的运动及分子能级一、分子内部的运动及分子能级 分子光谱比原子光谱要复杂得多,在分子中，除了有电子

2、相对于原子核的运动外，还有组成分子的各原子在其平衡位置附近的振动，以及分子本身绕其重心的转动 ,分子总的能量可以认为是这三种运动能量之和 即：E Ee+ Ev+ Er 式中Ee为电子能量 ，Ev为振动能量，Er转动能量。 分子中除了电子能级外，还有振动能级和转动能级这三种能级都是量子化的、不连续的。对于简单的双原子分子， Ee Ev Er二、能级跃迁与分子吸收光谱的类型二、能级跃迁与分子吸收光谱的类型 通常情况下，分子处于较低的能量状态，即基态。分子吸收能量具有量子化特征，即分子只能吸收等于二个能级之差的能量。如果外界给分子提供能量（如光能），分子就可能吸收能量引起能级跃迁，而由基态跃迁到激发

3、态能级。E=E1-E2=h=hc/ 由于三种能级跃迁所需要的能量不同，所以需要不同的波长范围的电磁辐射使其跃迁，即在不同的光学区域产生吸收光谱。1.转动能级跃迁与远红外光谱转动能级跃迁与远红外光谱 转动能级间的能量差Er约为：。可计算出 转动能级跃迁产生吸收光谱位于远红外区（50 300mm）, 称远红外光谱或分子转动光谱。2.振动能级振动能级 振动能级间的能量差Ev 约为： 。可计算出振动能级跃迁产生的吸收光谱位于红外区(0.7850m)，称红外光谱或分子振动光谱。振动能级跃迁时不可避免地会产生转动能级间的跃迁。即振动光谱中总包含有转动能级间跃迁，因而产生光谱也叫振动-转动光谱。3.电子能级

4、电子能级 电子能级的能量差 Ee : 201eV。可计算出电子跃迁产生的吸收光谱在紫外可见光区(200780nm)，称紫外可见光谱或分子的电子光谱。电子能级迁时不可避免地会产生振动和转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包含有振动能级和转动能级间跃迁，因而产生的谱线呈现宽谱带。紫外可见光谱实际上是电子-振动-转动光谱。 应该指出，紫外光可分为近紫外光（200 400 nm）和真空紫外光（60 200 nm）。由于氧、氮、二氧化碳、水等在真空紫外区（60 200 nm）均有吸收，因此在测定这一范围的光谱时，必须将光学系统抽成真空，然后充以一些惰性气体，如氦、氖、氩等。鉴于真空紫外吸收光谱的研究需要昂贵

5、的真空紫外分光光度计，故在实际应用中受到一定的限制。我们通常所说的紫外可见分光光度法，实际上是指近紫外、可见分光光度法。 三、有机化合物的紫外吸收光谱三、有机化合物的紫外吸收光谱 有机化合物此外吸收光谱（电子光谱）是由分子外层电子或价电子跃迁所产生的。按分子轨道理论，有机化合物分子中有：成键轨道，反键*轨道；成键轨道，反键轨道（不饱和烃）；另外还有非键轨道（杂原子存在）。各种轨道的能级不同，如图所示。有机化合物的紫外有机化合物的紫外可见吸收光谱，是其分子中外层价电子可见吸收光谱，是其分子中外层价电子跃迁的结果（三种）：跃迁的结果（三种）：电子、电子、电子、电子、n电子电子。 分子轨道理论分子轨

6、道理论：一个成一个成键轨道必定有一个相应的反键轨道必定有一个相应的反键轨道。通常外层电子均处键轨道。通常外层电子均处于分子轨道的基态，即成键于分子轨道的基态，即成键轨道或非键轨道上。轨道或非键轨道上。 外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态( (反反键轨道键轨道) )跃迁。主要有四种跃迁所需能量跃迁。主要有四种跃迁所需能量大小顺序为：大小顺序为：n n n n 电子跃迁类型：电子跃迁类型：1. *跃迁：跃迁：饱和烃（甲烷，乙烷）饱和烃（甲烷，乙烷）E很高，很高， n * * n *生色团与助色团生色团与助色团生色团：生色团： 最有用的紫外最

7、有用的紫外可见光谱是由可见光谱是由和和n跃迁产生的。跃迁产生的。这两种跃迁均要求有机物分子中含有不饱和基团。这类含有这两种跃迁均要求有机物分子中含有不饱和基团。这类含有键的不饱和基团称为生色团。简单的生色团由双键或叁键体键的不饱和基团称为生色团。简单的生色团由双键或叁键体系组成，如乙烯基、羰基、亚硝基、偶氮基系组成，如乙烯基、羰基、亚硝基、偶氮基NN、乙炔、乙炔基、腈基基、腈基CN等。等。助色团助色团： 有一些含有有一些含有n n电子的基团电子的基团(如如OH、OR、NH、NHR、X等等)，它们本身没有生色功能它们本身没有生色功能( (不能吸收不能吸收200nm200nm的光的光) )，但当它

8、们与生色团相连时，就会发生，但当它们与生色团相连时，就会发生n n共轭作用，共轭作用，增强生色团的生色能力增强生色团的生色能力( (吸收波长向长波方向移动，且吸收强吸收波长向长波方向移动，且吸收强度增加度增加) )，这样的基团称为助色团。，这样的基团称为助色团。跃迁跃迁 所需能量最大，所需能量最大，电子只有吸收远紫外光的能量才能发生电子只有吸收远紫外光的能量才能发生跃迁。饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区跃迁。饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区(吸收波长吸收波长200nm。这类跃迁在跃迁选律。这类跃迁在跃迁选律上属于禁阻跃迁，摩尔吸光系数一般为上属于禁阻跃迁，摩尔吸光系数一般为10100

9、Lmol-1 cm-1，吸收谱带强度较弱。分子中孤对电子和，吸收谱带强度较弱。分子中孤对电子和键同时存在键同时存在时发生时发生n 跃迁。丙酮跃迁。丙酮n 跃迁的跃迁的为为275nm max为为22 Lmol-1 cm -1（溶剂环己烷（溶剂环己烷)。vn *跃迁发生在含有杂原子的不饱和化合物中，其最大摩跃迁发生在含有杂原子的不饱和化合物中，其最大摩尔吸光系数尔吸光系数max （表示物质对光吸收能力大小的参量）比较（表示物质对光吸收能力大小的参量）比较小，吸收峰随溶剂极性增加而向短波方向移动，即产生小，吸收峰随溶剂极性增加而向短波方向移动，即产生蓝移蓝移，下表列出了一些常见生色团下表列出了一些常

10、见生色团n *跃迁的吸收特性。跃迁的吸收特性。生色团生色团化合物化合物溶剂溶剂羰基羰基正己烷正己烷28016羧基羧基乙醇乙醇20441硝基硝基CH3NO2异辛烷异辛烷28022亚硝基亚硝基C4H9NO乙醚乙醚66520*跃迁可以发生在任何具有不饱和键的有机化合物分子中，跃迁可以发生在任何具有不饱和键的有机化合物分子中，其最大摩尔吸光率很大，吸收峰随溶剂极性增加向长波方向其最大摩尔吸光率很大，吸收峰随溶剂极性增加向长波方向移动，即产生移动，即产生红移红移。下表列出了一些常见生色团。下表列出了一些常见生色团*跃迁的跃迁的吸收特性。吸收特性。生色团生色团 化合物化合物溶剂溶剂羰基羰基正己烷正己烷18

11、8900烯烯正庚烷正庚烷17713000炔炔正庚烷正庚烷17810000当一个分子中含有两个或两个以上的生色团时，按相互间的位置当一个分子中含有两个或两个以上的生色团时，按相互间的位置可以分为可以分为共轭共轭和和非共轭非共轭两种情况：非共轭时，各个生色团各自独两种情况：非共轭时，各个生色团各自独立吸收，吸收带由各生色团的立吸收，吸收带由各生色团的吸收带叠加吸收带叠加而成；共轭时，生色团而成；共轭时，生色团原有的原有的吸收峰会发生改变吸收峰会发生改变，可产生新的吸收峰。下表列出了一些，可产生新的吸收峰。下表列出了一些有关共轭结构的化合物的吸收特性。有关共轭结构的化合物的吸收特性。化合物化合物共轭

12、双键数共轭双键数11955000220010000221721000325425000325835000另有一些基团，本身并不产生吸收峰，但与生色团共存于同一分另有一些基团，本身并不产生吸收峰，但与生色团共存于同一分子时，可引起吸收峰的位移和吸收强度的改变，这些基团称为子时，可引起吸收峰的位移和吸收强度的改变，这些基团称为助助色团色团。如苯环的一个氢原子被一些基团取代后，苯环在。如苯环的一个氢原子被一些基团取代后，苯环在254nm处处的吸收带的最大吸收位置和强度就会改变。的吸收带的最大吸收位置和强度就会改变。化合物化合物取代基取代基苯苯254300氯苯氯苯264320溴苯溴苯262325苯酚苯

13、酚2731780苯甲醚苯甲醚2722240 有有机机化化合合物物的的吸吸收收谱谱带带常常常常因因引引入入取取代代基基或或改改变变溶溶剂剂使使最最大大吸吸收收波长波长maxmax和吸收强度发生变化和吸收强度发生变化: : maxmax向向长长波波方方向向移移动动称称为为红红移移，向向短短波波方方向向移移动动称称为为蓝蓝移移 ( (或或紫紫移移) )。吸吸收收强强度度即即摩摩尔尔吸吸光光系系数数增增大大或或减减小小的的现现象象分分别别称称为为增增色色效效应应或或减色效应，如图所示。减色效应，如图所示。红移和蓝移红移和蓝移5红移和蓝移： 由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基） 或采用不同溶剂后

14、 吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移） 吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移）6增色效应和减色效应 增色效应：吸收强度增强的效应 减色效应：吸收强度减小的效应7强带和弱带： max105 强带 min103 弱带紫外紫外可见吸收光谱中有机物发色体系信息分析的一般规律可见吸收光谱中有机物发色体系信息分析的一般规律 若在200750nm波长范围内无吸收峰，则可能是直链烷烃、环烷烃、饱和脂肪族化合物或仅含一个双键的烯烃等。 若在270350nm波长范围内有低强度吸收峰(10100Lmol-1cm-1),（n跃迁），则可能含有一个简单非共轭且含有n电子的生色团，如羰基。 若在20300n

15、m波长范围内有中等强度的吸收峰则可能含苯环。 若在210250nm波长范围内有强吸收峰，则可能含有2个共轭双键；若在260300nm波长范围内有强吸收峰，则说明该有机物含有3个或3个以上共轭双键。 若该有机物的吸收峰延伸至可见光区，则该有机物可能是长链共轭或稠环化合物。无机化合物的紫外无机化合物的紫外-可见吸收光谱可见吸收光谱 镧系和锕系元素的离子对紫外和可见光的吸收是基于内层f电子的跃迁而产生的。其紫外可见光谱为一些狭长的特征吸收峰，这些峰几乎不受金属离子的配位环境的影响。 1. 电子跃迁吸收光谱电子跃迁吸收光谱 过渡金属的电子跃迁类型为d电子在不同d轨道间的跃迁，吸收紫外或可见光谱。这些峰

16、强烈受配位环境的影响。 例如 cu2+以水为配位体，吸收峰在794nm处，而以氨为配位体，吸收峰在663nm处。此类光谱吸收强度弱，较少用于定量分析。2. 电子跃迁吸收光谱电子跃迁吸收光谱3.3.电荷转移吸收光谱电荷转移吸收光谱1 当吸收紫外可见辐射后，分子中原定域在金属当吸收紫外可见辐射后，分子中原定域在金属M轨道上电荷的转移轨道上电荷的转移到配位体到配位体L的轨道，或按相反方向转移，这种跃迁称为电荷转移跃迁，所的轨道，或按相反方向转移，这种跃迁称为电荷转移跃迁，所产生的吸收光谱称为荷移光谱。产生的吸收光谱称为荷移光谱。1 电荷转移跃迁本质上属于分子内氧化还原反应，因此呈现荷移光谱电荷转移跃

17、迁本质上属于分子内氧化还原反应，因此呈现荷移光谱的必要条件是构成分子的二组分，一个为电子给予体，另一个应为电子的必要条件是构成分子的二组分，一个为电子给予体，另一个应为电子接受体。接受体。1 电荷转移跃迁在跃迁选律上属于允许跃迁，其摩尔吸光系数一般都电荷转移跃迁在跃迁选律上属于允许跃迁，其摩尔吸光系数一般都较大较大(10 4左右左右)，适宜于微量金属的检出和测定。，适宜于微量金属的检出和测定。1 电荷转移跃迁在紫外区或可见光呈现荷移光谱，荷移光谱的最大吸电荷转移跃迁在紫外区或可见光呈现荷移光谱，荷移光谱的最大吸收波长及吸收强度与电荷转移的难易程度有关。收波长及吸收强度与电荷转移的难易程度有关。

18、 例：例：Fe3与与SCN形成血红色配合物，在形成血红色配合物，在490nm处有强吸收峰。处有强吸收峰。其实质是发生了如下反应：其实质是发生了如下反应： Fe3 SCN h= Fe SCN 2 有有机化合物的吸收带机化合物的吸收带吸收带吸收带(absorption band): 在紫外光谱中，吸收峰在光在紫外光谱中，吸收峰在光谱中的波带位置。根据电子及分子轨道的种类，可将吸谱中的波带位置。根据电子及分子轨道的种类，可将吸收带分为四种类型。收带分为四种类型。1. (1) R吸收带2. (2) K吸收带3. (3) B吸收带4. (4) E吸收带吸收带类型和影响因素吸收带类型和影响因素1R带：由含

19、杂原子的不饱和基团的带：由含杂原子的不饱和基团的n *跃迁产生跃迁产生CO；CN；NN E小，小，max250400nm，max200nm，max104共轭体系增长，共轭体系增长，max红移，红移，max溶剂极性溶剂极性，对于，对于(CHCH)n max不变不变 对于对于CHCCO max红移红移3B带：由 *跃迁产生芳香族化合物的主要特征吸收带 max =254nm，宽带，具有精细结构；max=200极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失4E带：由苯环环形共轭系统的 *跃迁产生芳香族化合物的特征吸收带 E1 180nm max104 （常观察不到）E2 200nm max=7000 强

20、吸收苯环有发色团取代且与苯环共轭时，E2带与K带合并 一起红移（长移）影响紫外影响紫外-可见吸收光谱的因素可见吸收光谱的因素 物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的等）不同，吸收光谱的形状形状、吸收峰吸收峰的位置的位置、吸收强度吸收强度等都可能发生变化。等都可能发生变化。1.温度温度 在室温范围内，温度对吸收光谱的影响不大。在室温范围内，温度对吸收光谱的影响不大。 2. 溶剂溶剂 注意如下几点：注意如下几点： （1）同一种物质由于使用的溶剂不同，得到的紫外）同一种物质由于使用的溶剂

21、不同，得到的紫外可见可见吸收光谱的峰形和最大吸收位置可能不一样，所以在测定吸收光谱的峰形和最大吸收位置可能不一样，所以在测定物质的吸收光谱时，一定要注明所使用的溶剂物质的吸收光谱时，一定要注明所使用的溶剂（2）尽量选用低极性溶剂；）尽量选用低极性溶剂；（3）能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化）能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性；学和光化学稳定性；（4）溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。）溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。影响吸收带位置的因素：影响吸收带位置的因素：1溶剂效应：对max影响： n-*跃迁：溶剂极性，max蓝移 -*跃迁：溶剂极性 ，max红

22、移对吸收光谱精细结构影响 溶剂极性，苯环精细结构消失溶剂的选择极性；纯度高；截止波长 max2pH值的影响：影响物质存在型体，影响吸收波长 可见分光光度计可见分光光度计 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计1. 1. 光源光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可可见见光光区区：钨钨灯灯作作为为光光源源，其其辐辐射射波波长长范范围在围在3203202500 nm2500 nm。 紫紫外外区区：氢氢、氘氘灯灯。发发射射185185400 4

23、00 nmnm的的连连续光谱。续光谱。仪器结构 2.2.单色器单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。波长单色光的光学系统。 入射狭缝：光源的光由此进入单色器；入射狭缝：光源的光由此进入单色器； 准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； 色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； 聚焦装置：透镜或聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至后所得单色光聚焦至出射狭缝；出射狭缝； 出射狭缝。出射狭

24、缝。3. 3. 样品室样品室 样品室放置各种类型的吸收池样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。般用玻璃池。4. 4. 检测器检测器 利用光电效应将透过吸收池的利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。有光电池、光电管或光电倍增管。5. 5. 结果显示记录系统结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机进行检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果

25、处理仪器自动控制和结果处理1.1.单光束单光束 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。的稳定性。2.2.双光束双光束 自动记录，快速全波自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价结构分析。仪器复杂，价格较高。格较高。分光光度计类型分光光度计类型3.3.双波长双波长 将不同波长的两束单色光将不同波长的两

26、束单色光( (1 1、2 2) ) 快束交替通过同快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。 = =1 12nm2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。两波长同时扫描即可获得导数光谱。1.1.单组分的测定单组分的测定 通常采用通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。标准曲线法定量测定。2.2.多组分的同时测定多组分的同时测定 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。本质上与单组分测定没有区别。 若各组分

27、的吸收曲线互有重叠，则可若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。各组分的含量。 A1= a1bca b1bcb A2= a2bca b2bcb 普通分光光度分析方法普通分光光度分析方法 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。比溶液。 设：待测溶液浓

28、度为设：待测溶液浓度为c cx x，标准溶液浓度为，标准溶液浓度为c cs s( (c cs s c cx x) )。则：则： Ax= b cx As = b cs x s =b(cx cs ）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差光度之差。 示差分光光度法示差分光光度法示差法测得的吸光度与示差法测得的吸光度与c呈直线关系。由标准曲线上查得呈直线关系。由标准曲线上查得相应的相应的c值，则待测溶液浓度值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + c 普通法：普通法： cs的的T=10%；cx的的T=5% 示差法：示差法：

29、 cs 做参比，调做参比，调T=100% 则：则： cx的的T=50% ；标尺扩展；标尺扩展10倍倍示差法标尺扩展原理示差法标尺扩展原理 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(1和2)；以参比波长1处的吸光度A1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。 A A A22 A A11 ( (22 11) )b cb c 两波长处测得的吸光度差值两波长处测得的吸光度差值A与待测组分浓度成正比。与待测组分浓度成正比。11和和22分别表示待测组分在分别表示待测组分在1 1和和2 2处的摩尔吸光系数。

30、处的摩尔吸光系数。 双波长法双波长法关键问题关键问题: : 测量波长测量波长2 2和参比波长和参比波长1 1的选择与组合的选择与组合 以两组分以两组分x x和和y y的双波长法测定为例：的双波长法测定为例：设：设：x x为待测组分，为待测组分，y y为干扰组分，二者的吸光度差分别为为干扰组分，二者的吸光度差分别为: : Ax和和Ay，则该体系的总吸光度差，则该体系的总吸光度差Ax+y为：为： Ax+y = A x + A y 如何选择波长如何选择波长1 、2有一定的要求。有一定的要求。选择波长组合选择波长组合1 1 、2 2的基本要求是：的基本要求是： 选定的波长1和2处干扰组分应具有相同吸光

31、度，即：即： Ay = y = A y y22 A y y11 = 0 = 0故：故： Ax+y = x+y = A x=(x=(x x22x x11) )bcbcx x此时：测得的吸光度差此时：测得的吸光度差A只与待测组分只与待测组分x x的浓度呈线性关系，的浓度呈线性关系，而与干扰组分而与干扰组分y y无关。若无关。若x x为干扰组分，则也可用同样的方法为干扰组分，则也可用同样的方法测定测定y y组分。组分。 可采用作图法选择符合上可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合述两个条件的波长组合。 在选定的两个波长在选定的两个波长1 1和和2 2处待测组分的吸光度应具有处待测组分的吸光度应具

32、有足够大的差值。足够大的差值。 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。 利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析： 0 e-bc假定入射光强度0 在整个波长范围内保持恒定： dI 0 /d0则：dI/d0 bc e -bc d/d 0 bc d/d 导数分光光度法导数分光光度法 d dI I/d/d 0 0 bcbc d d/d/d 一阶导数信号与试样浓度呈一阶导数信号与试样浓度呈线性关系；线性关系； 测定灵敏度依赖于摩尔吸光测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率系数对波长的变化率d d/d/d。

33、吸。吸收曲线的拐点处收曲线的拐点处d d/d/d最大，故最大，故其灵敏度最高其灵敏度最高( (见图）。见图）。 同理可以导出其二阶和三阶导同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（略）数光谱（略） 紫外紫外-可见吸收光谱的应用可见吸收光谱的应用 紫外-可见吸收光谱除主要可用于物质的定量分析外，还可以用于物质的定性分析、纯度鉴定、结构分析。1.定性分析 每一种化合物都有自己的特征光谱。测出未知物的吸收光谱，原则上可以对该未知物作出定性鉴定，但对复杂化合物的定性分析有一定的困难。2.纯度的鉴定 用紫外吸收光谱确定试样的纯度是比较方便的。 如蛋白质与核酸的纯度分析中，可用A280/A260的比值，鉴定其纯度。 3.结构分析 紫外-可见吸收光谱一般不用于化合物的结构分析，但利用紫外吸收光谱鉴定化合物中的共轭结构和芳环结构还是有一定价值。例如，某化合物在近紫外区内无吸收，说明该物质无共轭结构和芳香结构。