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1、血液细胞分离仪行政院卫生署丰原医院检验科行政院卫生署丰原医院检验科报告者：苏俞绫报告者：苏俞绫报告日期：报告日期：20042004年年 8 8 月月 12 12 日日 受训单位：台北荣总内科部输血医学科血液分离室受训单位：台北荣总内科部输血医学科血液分离室指导者：易曼芬学姐、刘绿霜学姐、林炯熙大夫指导者：易曼芬学姐、刘绿霜学姐、林炯熙大夫受训日期：受训日期：20042004年年6 6月月1 1日日77月月3131日日血液细胞分离仪-机型COBE Spectra 6.1 COBE Spectra 6.1 PBSC PBSC（Peripheral Blood Stem CellPeripheral
2、 Blood Stem Cell）COBE Spectra 7.0 COBE Spectra 7.0 LRS LRS（Leukocyte-Reduced Leukocyte-Reduced ApheresisApheresis PlateletPlatelet）COBE 2991COBE 2991FenwalFenwal CS-3000 Plus CS-3000 PlusFenwal CS-3000 Fenwal CS-3000 PlusPlusCOBE SPECTRA 6.1 COBE SPECTRA 6.1 ，COBE 2991COBE 2991血液细胞分离仪-kit、圆盘Kit- WBC
3、 TPE ELP LRS RBC圆盘-大圈圈（WBC、TPE） 小圈圈（ELP、PBSC） 小漏斗（LRS）血液细胞分离仪-项目 WBCWBC： 1.MNC- DLI 1.MNC- DLI（Donor Lymphocyte InfusionDonor Lymphocyte Infusion） 2.PMN- Therapeutic Leukocytopheresis 2.PMN- Therapeutic Leukocytopheresis（p pt t） GranulocytapheresisGranulocytapheresis（donordonor） 3.AutoPBSC- Peripher
4、al Blood 3.AutoPBSC- Peripheral Blood Stem Cell Stem Cell 4.BMP- Bone Marrow 4.BMP- Bone Marrow ProcessingCOBE 2991ProcessingCOBE 2991机型机型TPETPE：Therapetic Plasma ExchangeTherapetic Plasma ExchangeELPELP：Therapetic Thrombocytapheresis Therapetic Thrombocytapheresis （p pt t） Extended Life Platelet Ex
5、tended Life Platelet（donordonor）LRSLRS： Leukocyte-Reduced Apheresis Platelet Leukocyte-Reduced Apheresis PlateletRBCRBC：Therapetic PhlebotomyTherapetic Phlebotomy目前不用，以放血方式治疗目前不用，以放血方式治疗PMNPMN（Polymorphonuclear CellPolymorphonuclear Cell；多形核细胞）；多形核细胞）MNCMNC（Mononuclear Cell Mononuclear Cell ；单核细胞）；单
6、核细胞）血液细胞分离仪-事前准备P Pt / donort / donor同意书同意书医师声明书医师声明书P Pt / donort / donor声明书声明书会诊单会诊单抽血检验项目抽血检验项目 血液常规检查（血液常规检查（Blood RoutineBlood Routine）、）、ABOABO血型、血型、RhRh血型、不规则抗体筛检、肝功能（血型、不规则抗体筛检、肝功能（ALTALT）、梅毒血清反）、梅毒血清反应（应（VDRLVDRL）、）、C C型肝炎病毒抗体（型肝炎病毒抗体（anti-HCVanti-HCV）、）、B B型肝炎型肝炎病毒表面抗原（病毒表面抗原（HBsAgHBsAg）、爱
7、滋病毒抗体（）、爱滋病毒抗体（HIV-IHIV-I、HIV-HIV-IIII）、人类嗜）、人类嗜T T淋巴球病毒抗体（淋巴球病毒抗体（HTLV-IHTLV-I、HTLV-IIHTLV-II）、）、游离钙（游离钙（Free CaFree Ca）。）。执行收集的前几日，口服钙片、喝温牛奶以预防低血钙执行收集的前几日，口服钙片、喝温牛奶以预防低血钙反应。反应。按时前往，务必进食，但勿吃太油腻的食物（如炸排骨、按时前往，务必进食，但勿吃太油腻的食物（如炸排骨、炸鸡腿，包括豆浆）。炸鸡腿，包括豆浆）。禁烟、尼古丁、咖啡（因会增加血管收缩）。禁烟、尼古丁、咖啡（因会增加血管收缩）。血液细胞分离仪-原理 藉
8、由各种血液成分比重不同的不同及利用不同的离心速度将血液分离，并利用光学透视原理测细胞之密度，即由献血人身上收集所需之血液成分或由病人身上收集或移除所需的血液成分，而将其余的血液成分经由血液分离机持续性的运转回输给病人或献血者。5 buffy coat （WBC、Lym、plt、stem cell） 55 plasma45 RBC血液细胞分离仪-应用 执行各项稀有血液成分收集，提供临床病人输血需求可协助临床急症病人异常血液成分移除、减轻及避免立即性的生命威胁。血液细胞分离仪-符合条件WBC 3000 lHB 9.0 mg/dlPlt 30,000 l血液细胞分离仪-勿错1.Kit2.圆盘3.步骤
9、血液细胞分离-步骤装圆盘装圆盘装装KitKit装装salinesaline、ACDACD（Anticoagulant Citrate DextroseAnticoagulant Citrate Dextrose；抗凝剂）；抗凝剂）机器机器priming priming 排除空气排除空气PPt / donort / donor携带病历报到携带病历报到 P Pt / donort / donor躺于病床或献血椅并盖好被子躺于病床或献血椅并盖好被子量血压、量体温量血压、量体温机器机器priming okpriming ok扎针两手臂（血管粗扎针两手臂（血管粗accessaccess、 return
10、return）或一中央静脉管（）或一中央静脉管（ access access ）一手臂（）一手臂（ return return ）确定扎针确定扎针 ok ok机器机器RUNRUN设置预设值设置预设值随时注意随时注意accessaccess端之血量端之血量达到预设值达到预设值量血压量血压移除移除accessaccess端端机器机器Rineback Rineback 将其余血液成分回输体内将其余血液成分回输体内移除移除returnreturn端端卸除卸除kitkit处理处理collect productscollect productsKitKitWBCWBCTPETPEELPELPLRSLRS项
11、目项目DLIDLI（Donor Donor LymphocytLymphocyte e InfusionInfusion）Therapeutic LeukocytopheresisTherapeutic Leukocytopheresis（p pt t）GranulocytaGranulocytapheresispheresis（dodonornor）PBSC PBSC （ Peripheral Peripheral Blood Stem Blood Stem Cell Cell ）Therapetic Therapetic Plasma Plasma ExchangeExchangeTher
12、apetic Therapetic ThrombocytThrombocytapheresis apheresis （p pt t） Extended Extended Life Life PlateletPlatelet（d donoronor）LeukocyteLeukocyte-Reduced -Reduced Apheresis Apheresis PlateletPlatelet步骤步骤MNCMNCPMNPMNDepleteDepletePMNPMNColletColletAutoPBSCAutoPBSCTPETPEELPDELPDDepleteDepleteELPC ELPC Co
13、lletColletLRSLRSEnd pointEnd point5000 ml5000 ml约约4000ml4000ml约约4000ml4000ml10000 ml10000 mlCollet Collet /replac /replac volumevolume130 ml130 ml700 ml700 ml250 ml250 ml50 ml 50 ml 或或依机器依机器TBV TBV 11.511.5倍倍700 ml700 ml300 ml300 ml300 ml300 mlPlasma Plasma volumevolume0 ml0 ml60 ml60 mlTBV TBV 11.5
14、11.5倍倍TimeTime约约2 hrs2 hrs23 hrs23 hrs34 hrs34 hrs4 hrs4 hrs34 hrs34 hrs23 hrs23 hrs约约2 hrs2 hrs约约2 hrs2 hrsIntel Intel flowflow（mlml/min/min）4555455545554555455545554555455545554555455545554555455545554555Intel:AC Intel:AC RatioRatio13.013.010.011.010.011.010.011.010.011.013.013.513.013.513.013.513
15、.013.510.011.010.011.011.012.011.012.011.012.011.012.0血液细胞分离仪-预设值血液细胞分离仪-产物检验项目KitKitWBCWBCTPETPEELPELPLRSLRS项目项目项目项目DLIDLI（DonDonor or LymphoLymphocyte cyte InfusionInfusion）Therapeutic LeukocytopheresisTherapeutic Leukocytopheresis（p pt t）GranulocytGranulocytapheresisapheresis（donordonor）PBSC PBSC
16、 （ PeripherPeripheral Blood al Blood Stem Stem Cell Cell ）Therapetic Therapetic Plasma Plasma ExchangeExchangeTherapetic Therapetic ThrombocThrombocytapheresis ytapheresis （p pt t）Extended Extended Life Life PlateletPlatelet（donordonor）Leukocyte-Leukocyte-Reduced Reduced Apheresis Apheresis Platelet
17、PlateletPrePreWBCWBCWBCWBCWBCWBCWBCWBCPlateletPlateletPlateletPlateletPlateletPlateletPostPostWBCWBCWBCWBCWBCWBCWBCWBCPlateletPlateletPlateletPlateletPlateletPlateletcollect collect productsproductsLym-Lym-Surface Surface makermakerWBCWBCCBC+DCCBC+DCCD34+CD34+CFU-CCFU-CBlood Blood culture culturePla
18、teletPlateletPlateletPlateletPlateletPlateletWBC 1106 lWBC 1106 lPRBC Priming对象对象 小小孩小小孩预防预防因收集后导致因收集后导致Hb Hb 于于RUNRUN前用相同血型之前用相同血型之2 PRBC2 PRBC先行先行PrimingPriming使使kitkit中充满中充满RBCRBC，使小小孩减少，使小小孩减少RBC lossRBC lossKitKit中大约中大约130 ml130 ml的血量残留的血量残留 ，会造成收集，会造成收集（移除）后（移除）后HbHb不变或降低不变或降低 血液细胞分离-过程可能之反应血管
19、损伤血管损伤血肿血肿血压降低血压降低血量减少血量减少过敏过敏溶血溶血空气栓塞空气栓塞呼吸窘迫呼吸窘迫淋巴球及血小板减少淋巴球及血小板减少蛋白质及免疫球蛋白减少蛋白质及免疫球蛋白减少凝血因子减少凝血因子减少最常见的为因抗凝剂（最常见的为因抗凝剂（ACDACD）造成而有低血钙的症状（如肢）造成而有低血钙的症状（如肢端、脸部麻感、肌肉震颤感、胸闷、心律不齐、休克）端、脸部麻感、肌肉震颤感、胸闷、心律不齐、休克）需告知医师并立即处理需告知医师并立即处理发生低血钙时，怎么办？喝温牛奶Calcium Gluconate（葡萄糖钙） 1.对水喝 1Amp（10ml）：10ml water 2.第三条静脉注射
20、 1Amp+90ml saline 以50ml/1hr滴速 3.正压pump 1Amp以5ml/1hr滴速PBSC 理想 collect products通常收集通常收集2323次次 达到达到 MNC 4 8 108 /kg MNC 4 8 108 /kg CD34+ 2.0 106 /kg CD34+ 2.0 106 /kg MNC MNC：Mononuclear CellMononuclear Cell CD34+ CD34+：CD34CD34阳性细胞阳性细胞 为为Stem CellStem Cell之之maker maker collect bag collect bag中中MNC=To
21、tal WBCMNC=Total WBC量量 Total collect Total collect量量 DC DC P Pt t体体重重 （扣除（扣除segseg及及bandband） CD34+ CD34+ 以以Flow cytometryFlow cytometry检测检测 不可照光（照光不可照光（照光- -杀死杀死LymphocyteLymphocyte）PBSC冷冻自体移植异体移植Pt与donor时间无法配合时仪器： Planer kyro 560-16微电脑控制可程序冷冻仪 MVEXLC 1200自动充填液态氮存贮系统PBSC冷冻 1.配制成10DMSO： Stem Cell +
22、Plasma + 10ml DMSO（细胞冷冻保护剂） Stem Cell + Plasma = 90 ml Plasma加入DMSO前及加入Stem cell前均必须预冷（0）无菌操作PBSC冷冻2.2.置入置入Planer kyro 560-16Planer kyro 560-16微电脑控制可程序冷冻微电脑控制可程序冷冻仪仪开始开始 +4 +4慢慢以慢慢以 -1.0/min to -8 -1.0/min to -8 -25.0/min to -50 -25.0/min to -50 +8.0/min to -20 +8.0/min to -20 -1.0/min to -60.0 -1.0
23、/min to -60.0 -5.0/min to -120.0 -5.0/min to -120.0 3.3.再置入再置入 MVEXLC 1200 MVEXLC 1200自动充填液态氮存贮系统存贮自动充填液态氮存贮系统存贮 可程序冷冻仪可程序冷冻仪 自自动充填液态氮存贮动充填液态氮存贮PBSC解冻、回输37 水浴用15滴的IV set（静脉输注器）慢慢回输5分钟 后再快速输完一袋10分钟输完一袋 快速输完，避免细胞解冻后DMSO因高温放出毒性毒杀细胞DMSO（细胞冷冻保护剂） DMSO与Plasma（protein）混合会放热而使Plasma变性，故Plasma在与DMSO混合前后均置于0冰
24、水中降温，以防混合后的放热造成Plasma变性，因DMSO在0温度以上会对细胞产生毒性，因而毒杀细胞。GVHD（graft-vs-host disease； 移植物抗宿主疾病）CD4+CD4+、CD8+ TcellCD8+ Tcell引发引发在移植后在移植后2 23 3周发生周发生急性：移植后急性：移植后830830天天 - - 皮肤（红疹及脱屑）、胆道皮肤（红疹及脱屑）、胆道（黄疸）、（黄疸）、 胃肠胃肠 （严重腹泻）（严重腹泻） 慢性：移植后慢性：移植后100200100200天天 -皮肤、肝、眼、口腔黏膜、其皮肤、肝、眼、口腔黏膜、其它器官它器官GVHD（graft-vs-host di
25、sease； 移植物抗宿主疾病）最后终因感染或肝、肾功能衰竭或最后终因感染或肝、肾功能衰竭或DICDIC ( Disseminated Intravascular Coagulation ( Disseminated Intravascular Coagulation ，散播性血管内凝固症，散播性血管内凝固症) )而死亡，死亡率高达而死亡，死亡率高达757590 90 。预防方法预防方法移植前后给予免疫抑制剂移植前后给予免疫抑制剂cyclosporinecyclosporine，若仍发生，若仍发生GVHDGVHD则给予高剂量类固醇治疗。则给予高剂量类固醇治疗。 若移植后一直没有若移植后一直没有GVHDGVHD反应反应给给DLI DLI （Donor Donor Lymphocyte InfusionLymphocyte Infusion）产生轻微）产生轻微GVHDGVHD癌症细胞才癌症细胞才不易复发。不易复发。感想受训之感想察言观色 主动 多问谢谢聆听！
