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1、SFRP4过表达对结肠癌细胞株过表达对结肠癌细胞株HCT116基因表达谱的影响基因表达谱的影响 复旦大学附属肿瘤医院病理科黄 丹研研 究究 背背 景景研究背景CA Cancer J Clin. 2021; 58: 161-179 结直肠癌的发病率结直肠癌的发病率研究背景Wnt信号通路信号通路 分泌型卷曲相关蛋白分泌型卷曲相关蛋白SFRP 一组分泌型糖蛋白家族SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达定位于染色体8p 1211.1 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域CRD的N-末端和一个C-末端。 除SFRP3以外研究背景分泌型卷曲相关蛋白分泌型卷曲相关蛋白SFRP通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以
2、阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物而阻碍Wnt信号 研究背景研研 究究 目目 的的检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。 技术路线技术路线pcDNATM 3.1-SFRP4重组质粒基因芯片检测Pathway分析双酶切鉴定WB鉴定SFRP4表达转染HCT116后筛选稳定表达株结果结果1.pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定2.芯片生物信息学分析3.RT-PCR验证局部基因芯片的结果pcDNA3.1载体大小为5500bp，SFRP4基因片段大小为1056bp EcoRI和HindIII双酶
3、切重组质粒后凝胶电泳图 Western Blot 检测pcDNATM 3.1-SFRP4质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达 0道为pcDNA3.1空载体，1和2道为pcDNA3.1-SFRP4 1.pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定2.芯片生物信息学分析3.RT-PCR验证局部基因芯片的结果GenBank ID Gene nameCommentsInduction-fold NM_001040056MAPK3丝裂素活化蛋白激酶34.3NM_001006617MAPKAP1丝裂素活化蛋白激酶相关蛋白15.0NM_002756MAP2K3MAPKK32.3N
4、M_007181MAP4K1MAPKKKK12.8NM_021970MAP2K1IP1MAPKK1相关蛋白12.3NM_021284MEK蛋氨酸脑啡肽3.0上调的MAPK家族基因 下调的TNF家族基因GenBank ID Gene nameCommentsInduction-foldNM_006291TNFAIP2肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白20.25NM_006290TNFAIP3肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白30.38NM_014350TNFAIP8肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白80.25NM_003844TNFRSF10A肿瘤坏死因子受体超家族10A0.44NM_00384
5、0TNFRSF10D肿瘤坏死因子受体超家族10D0.5凋亡相关基因的改变GenBank ID Gene nameCommentsInduction-foldNM_000875IGF1R胰岛素样生长因子受体4.9NM_000043FASTNF受体超家族成员62.6NM_006538BCL2L11Bcl2-L110.13pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证局部基因芯片的结果1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。-actin作为对照。 RT-PCR验证基因芯片结果讨论讨论我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p38MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤细胞的作用机制。讨论讨论MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用 肿瘤坏死因子TNF家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用 结直肠癌细胞表达SFRP4后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。 谢谢！谢谢！
